【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗体药物，尤其涉及抗pd-1单克隆抗体及其应用。
技术介绍
0、技术背景
1、程序性死亡-1(programmed death-1；pd-1，也称为cd279)是一个主要表达在激活的t细胞表面的抑制性受体。某些亚群的b细胞，单核细胞和树突状细胞在激活以后也会表达pd-1。
2、pd-1属于免疫球蛋白超家族成员，全长288个氨基酸，含有一个胞外结构域、一个跨膜结构域和一个胞质结构域。胞外结构域含有一个免疫球蛋白样结构域(igv-likedomain)，负责与其配体结合。胞质结构域含有免疫受体酪氨酸抑制基序(itim)和免疫受体酪氨酸转换基序(itsm),负责信号转导。
3、pd-1有两个配体，分别是程序性死亡配体-1(programmed death ligand 1，pd-l1)和程序性死亡配体-2(programmed death ligand 2，pd-l2)。初始t细胞表面不表达pd-1。当初始t细胞表面的tcr/cd3复合体和cd28分别与mhc-抗原肽和cd80/cd86结合后，tcr/cd3复合体和cd28的胞内区分别被蛋白激酶磷酸化，从而招募一系列信号转导蛋白和启动一系列磷酸化事件，最终导致初始t细胞被激活，然后其表面开始上调pd-1。当pd-1与抗原提呈细胞表面的pd-l1或pd-l2结合后，pd-1被激活，其胞质结构域被蛋白激酶磷酸化，从而招募蛋白磷酸酶shp-2。shp-2可以将cd28和tcr/cd3复合体胞内去磷酸化，从而抑制t细胞的激活。
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5、虽然目前已经有多款阻断pd-1信号通路的pd-1拮抗型抗体(比如帕博利珠单抗，也称为可瑞达)上市并用于治疗多种肿瘤，但是开发能够激活pd-1信号通路的pd-1激动型抗体用于抑制t细胞反应从而治疗炎症和自身免疫性疾病仍然是有必要的。
技术实现思路
1、本申请专利技术人通过大量的研究，获得了特异性结合pd-1的鼠源抗体，其具备显著的激活pd-1信号通路的作用，进一步基于所述鼠源抗体获得了具有pd-1结合活性和pd-1信号通路激活作用的人源化抗体。本专利技术的抗体通过激活pd-1信号通路能够有效抑制t细胞活性，抑制免疫应答或炎症反应，从而发挥防治炎症、过敏和自身免疫相关疾病的作用。此外，本专利技术的抗体还具有对人和猴pd-1的种属交叉结合活性和激活活性，从而有益于在动物模型中开展临床前评价研究等工作。
2、抗体或其抗原结合片段
3、在第一方面，本申请提供了能够特异性结合pd-1的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：
4、如seq id no:7或15所示的重链可变区(vh)中含有的vh cdr1或其变体、vh cdr2或其变体以及vh cdr3或其变体；和/或，如seq id no:8或16所示的轻链可变区(vl)中含有的vl cdr1或其变体、vl cdr2或其变体以及vl cdr3或其变体；
5、其中，所述变体与其所源自的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加，例如保守置换)。在某些实施方案中，所述的置换是保守置换。
6、在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
7、如seq id no:7或15所示的重链可变区(vh)中含有的3个cdr；和/或，如seq idno:8或16所示的轻链可变区(vl)中含有的3个cdr。
8、在某些实施方案中，所述vh中含有的3个cdr和/或所述vl中含有的3个cdr由kabat、imgt或chothia编号系统定义。
9、在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
10、包含下述3个互补决定区(cdrs)的重链可变区(vh)：序列为seq id no:1的vhcdr1、序列为seq id no:2的vh cdr2、序列为seq id no:3的vh cdr3；和/或，包含下述3个互补决定区(cdrs)的轻链可变区(vl)：序列为seq id no:4的vl cdr1、序列为seq id no:5的vl cdr2、序列为seq id no:6的vl cdr3；其中，所述cdr由kabat编号系统定义。
11、在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含来源于鼠免疫球蛋白的框架区序列。
12、在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
13、重链可变区(vh)，其包含seq id no：7所示的序列或其变体；和/或，轻链可变区(vl)，其包含seq id no：8所示的序列或其变体；
14、其中，所述变体与其所源自的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)，或具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。优选地所述的置换、缺失或添加不存在于cdr区。
15、在某些实施方案中，所述的置换是保守置换。
16、在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含如seq id no:7所示的序列的vh和包含如seq id no:8所示的序列的vl。
17、在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含来源于人免疫球蛋白的框架区序列。
18、在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含人胚系抗体基因所编码的氨基酸序列中所包含的框架区。在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：人重链胚系序列的重链框架区，和/或，人轻链胚系序列的轻链框架区。在某些实施方案中，所述人重链胚系序列的重链框架区和/或人轻链胚系序列的轻链框架区可任选地包含从人源残基至鼠源残基的回复突变。
19、在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：包本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.能够特异性结合PD-1的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：
2.权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：
3.权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：
4.权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含来源于人免疫球蛋白的框架区序列；
5.权利要求4所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
6.权利要求1-5任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段进一步包含来源于哺乳动物(例如人或鼠)免疫球蛋白的恒定区；
7.权利要求6所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含人免疫球蛋白重链恒定区变体，其与野生型人免疫球蛋白重链恒定区相比具备增强的对Fc受体(例如CD32A、CD32B和/或CD16A)的结合活性；
8.权利要求6或7所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
9.权利要求1-8任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗原结
10.分离的核酸分子，其编码权利要求1-9任一项所述的抗体或其抗原结合片段，或其重链可变区和/或轻链可变区，或其重链和/或轻链。
11.载体，其包含权利要求10所述的分离的核酸分子；优选地，所述载体为克隆载体或表达载体。
12.宿主细胞，其包含权利要求10所述的分离的核酸分子或权利要求11所述的载体。
13.制备权利要求1-9任一项所述的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括，在允许所述抗体或其抗原结合片段表达的条件下，培养权利要求12所述的宿主细胞，和从培养的宿主细胞培养物中回收所述抗体或其抗原结合片段。
14.双特异性或多特异性分子，其包含权利要求1-9任一项所述的抗体或其抗原结合片段；
15.免疫缀合物，其包含权利要求1-9任一项所述的抗体或其抗原结合片段以及连接于所述抗体或其抗原结合片段的治疗剂；
16.药物组合物，其包含权利要求1-9任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求10所述的分离的核酸分子、权利要求11所述的载体、权利要求12所述的宿主细胞、权利要求14所述的双特异性或多特异性分子或权利要求15所述的免疫缀合物，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂；
17.权利要求1-9任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求10所述的分离的核酸分子、权利要求11所述的载体、权利要求12所述的宿主细胞、权利要求14所述的双特异性或多特异性分子、权利要求15所述的免疫缀合物或权利要求16所述的药物组合物在制备PD-1信号通路激活剂中的用途。
18.权利要求1-9任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求10所述的分离的核酸分子、权利要求11所述的载体、权利要求12所述的宿主细胞、权利要求14所述的双特异性或多特异性分子、权利要求15所述的免疫缀合物或权利要求16所述的药物组合物在制备免疫抑制剂(例如T细胞活性抑制剂)中的用途。
19.权利要求1-9任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求10所述的分离的核酸分子、权利要求11所述的载体、权利要求12所述的宿主细胞、权利要求14所述的双特异性或多特异性分子、权利要求15所述的免疫缀合物或权利要求16所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于在受试者中预防和/或治疗自身免疫性疾病、过敏性疾病、移植物抗宿主病、移植排斥或淋巴瘤；
20.缀合物，其包含权利要求1-9任一项所述的抗体或其抗原结合片段，以及与所述抗体或其抗原结合片段连接的可检测的标记；
21.权利要求1-9任一项所述的抗体或其抗原结合片段或权利要求20所述的缀合物在制备检测试剂中的用途，所述检测试剂用于检测PD-1在样品中的存在或其水平和/或诊断与PD-1相关的疾病；
...【技术特征摘要】
1.能够特异性结合pd-1的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：
2.权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：
3.权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：
4.权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含来源于人免疫球蛋白的框架区序列；
5.权利要求4所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
6.权利要求1-5任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段进一步包含来源于哺乳动物(例如人或鼠)免疫球蛋白的恒定区；
7.权利要求6所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含人免疫球蛋白重链恒定区变体，其与野生型人免疫球蛋白重链恒定区相比具备增强的对fc受体(例如cd32a、cd32b和/或cd16a)的结合活性；
8.权利要求6或7所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
9.权利要求1-8任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗原结合片段选自fab、fab’、f(ab’)2、fd、fv、二硫键连接的fv、scfv、di-scfv、(scfv)2、双抗体(diabody)和单域抗体(sdab)；和/或，所述抗体为鼠源抗体、人源化抗体、嵌合抗体、双特异性抗体或多特异性抗体。
10.分离的核酸分子，其编码权利要求1-9任一项所述的抗体或其抗原结合片段，或其重链可变区和/或轻链可变区，或其重链和/或轻链。
11.载体，其包含权利要求10所述的分离的核酸分子；优选地，所述载体为克隆载体或表达载体。
12.宿主细胞，其包含权利要求10所述的分离的核酸分子或权利要求11所述的载体。
13.制备权利要求1-9任一项所述的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括，在允许所述抗体或其抗原结合片段表达的条件下，培养权利要求12所述的宿主细胞，和从培养的宿主细胞培养物中回收所述抗体或其抗原结合片段。
【专利技术属性】
技术研发人员：姜文波，徐立忠，楚雪斌，宋磊，李雪，薛伟丽，李灵芸，赵然然，何旭芝，王思勤，金磊，
申请(专利权)人：长春金赛药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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