【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物，尤其涉及一种联合消减雌激素的生物炭基菌剂的制备方法及应用。
技术介绍
1、环境雌激素作为一种新型污染物，具有内分泌干扰效应。并且在环境中以ng·kg-1级别的浓度就能干扰鱼类、两栖类动物的内分泌系统、神经系统甚至导致生殖障碍，导致物种灭绝。畜禽粪便是天然甾体雌激素的环境源头，随着畜禽粪便堆置过程中的渗滤液向下流动，部分雌激素被土壤吸附，部分污染地下水。土壤中残留的雌激素会被作物、蔬菜吸收，威胁人体健康和生态平衡。
2、现有技术中，常采用微生物技术修复被环境雌激素污染的水体和土壤。通常从污染场地分离雌激素降解菌株或者降解菌群，不断施加环境压力进行驯化，最终获得具备雌激素降解功能菌。但是，当实际应用场景中存在多种环境雌激素时，施用功能菌群往往难以适应复杂的环境条件，并且在面对多底物的条件下，雌激素的降解效果远不及分离的最初效果。
技术实现思路
1、本专利技术提出及一种联合消减雌激素的生物炭基菌剂的制备方法及应用，制备得到的生物炭基菌剂内固定的雌激素降解菌群包含鞘氨醇单胞菌jy-1、红球菌jy-2以及新鞘氨醇杆菌，能够在存在多种环境雌激素的污染介质环境下，较为高效地对降解多种环境雌激素。
2、为了达到上述目的，本专利技术的采用如下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供一种联合消减雌激素的生物炭基菌剂的制备方法，包括：
4、配制雌激素降解菌群，雌激素降解菌群包括鞘氨醇单胞菌jy-1、红球菌jy-2以及新鞘氨醇杆菌；所述
5、制备生物炭基；
6、将雌激素降解菌群固定在生物炭基上，得到联合消减雌激素的生物炭基菌剂。
7、在第一方面的一种实现方式中，配制雌激素降解菌群，包括：
8、分别对鞘氨醇单胞菌jy-1、红球菌jy-2以及新鞘氨醇杆菌进行活化和培养，得到鞘氨醇单胞菌jy-1的菌液、红球菌jy-2的菌液以及新鞘氨醇杆菌的菌液；
9、混合鞘氨醇单胞菌jy-1的菌液、红球菌jy-2的菌液以及新鞘氨醇杆菌的菌液，得到雌激素降解菌群。
10、在第一方面的一种实现方式中，分别对鞘氨醇单胞菌jy-1、红球菌jy-2以及新鞘氨醇杆菌进行活化和培养，包括：
11、分别将鞘氨醇单胞菌jy-1和红球菌jy-2接种至lb培养基中活化，并培养至lb培养基od600=1.0，得到鞘氨醇单胞菌jy-1的预配菌液和红球菌jy-2的预配菌液；
12、将新鞘氨醇杆菌接种到r2a培养基中活化，并培养至r2a培养基od600=1.0，得到新鞘氨醇杆菌的预配菌液；
13、分别采用无机盐培养基对鞘氨醇单胞菌jy-1的预配菌液、红球菌jy-2的预配菌液以及新鞘氨醇杆菌的预配菌液进行清洗并重悬调整至od600=1.0，得到对鞘氨醇单胞菌jy-1的菌液、红球菌jy-2的菌液以及新鞘氨醇杆菌的菌液；
14、其中，lb培养基的配方为：酵母提取物10 g·l-1、胰蛋白胨10 g·l-1、氯化钠10g·l-1；r2a培养基的配方为：酵母浸出粉0.5 g·l-1、蛋白胨0.5 g·l-1、酸水解酪蛋白0.5g·l-1、葡萄糖0.5 g·l-1、可溶性淀粉0.5 g·l-1、丙酮酸钠0.3 g·l-1、磷酸氢二钾0.3g·l-1、无水硫酸镁0.024 g·l-1；无机盐培养基的配方为：硝酸铵1.5 g·l-1、硫酸氢二钾1.9 g·l-1、硫酸二氢钾0.5 g·l-1、氯化钠0.5 g·l-1、七水硫酸镁0.2 g·l-1。
15、在第一方面的一种实现方式中，鞘氨醇单胞菌jy-1的菌液、红球菌jy-2的菌液以及新鞘氨醇杆菌的菌液的体积混合比例为：1~1.5：1~1.5：1~2。
16、在第一方面的一种实现方式中，制备生物炭基，包括：对植物材料进行热解后，得到生物炭基。
17、在第一方面的一种实现方式中，雌激素降解菌群与生物炭基进行固定的菌料比为10 ml ~ 30 ml：1g。
18、在第一方面的一种实现方式中，联合消减雌激素的生物炭基菌剂的有效活菌数为5.4×109 cfu/g ～ 9.6×109 cfu/g。
19、第二方面，本专利技术提供第一方面提供方法制备得到的联合消减雌激素的生物炭基菌剂在去除污染介质中环境雌激素的应用。
20、在第二方面的一种实现方式中，污染介质为污水、污染土壤或者畜禽粪便。
21、在第二方面的一种实现方式中，环境雌激素包括雌三醇、雌二醇和雌酮中的一种或多种。
22、在第二方面的一种实现方式中，应用包括：将联合消减雌激素的生物炭基菌剂投入污染介质中，以降解污染介质中的环境雌激素。
23、在第二方面的一种实现方式中，联合消减雌激素的生物炭基菌剂的投入量为污染介质质量的3%~5%。
24、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
25、（1）本专利技术不仅提供一种具备消减多种天然雌激素的生物炭基菌剂，能够有效将生物炭与微生物修复技术相结合，尤其是在多种环境雌激素污染的水体和畜禽粪便具有良好的修复效果；
26、（2）本专利技术以生物炭基为载体，将雌激素降解功能菌群固定在生物炭基上，相较于游离菌群而言，雌激素降解效果更好，污染物残留量更低，生物炭基菌剂可高效降解污染水体和畜禽粪便中多种天然雌激素，降低残余污染物的生态风险，保障人体健康。
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1.一种联合消减雌激素的生物炭基菌剂的制备方法，其特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述配制雌激素降解菌群，包括：
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述鞘氨醇单胞菌JY-1的菌液、所述红球菌JY-2的菌液以及所述新鞘氨醇杆菌的菌液的体积比例为：1~1.5：1~1.5：1~2。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述制备生物炭基，包括：
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述雌激素降解菌群与所述生物炭基进行固定的菌料比为10 ~ 30 mL：1g。
6.权利要求1~5任一所述的方法制备得到的联合消减雌激素的生物炭基菌剂在去除污染介质中环境雌激素的应用。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述环境雌激素包括雌三醇、雌二醇和雌酮中的一种或多种。
【技术特征摘要】
1.一种联合消减雌激素的生物炭基菌剂的制备方法，其特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述配制雌激素降解菌群，包括：
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述鞘氨醇单胞菌jy-1的菌液、所述红球菌jy-2的菌液以及所述新鞘氨醇杆菌的菌液的体积比例为：1~1.5：1~1.5：1~2。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：凌婉婷，王俊跃，高彦征，胡小婕，桑煜龙，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：
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