【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开大体涉及表达sars-cov-2s糖蛋白的假病毒。本公开还涉及采用假病毒来评价针对sars-cov-2病毒或其变种的生物样品的免疫原性(例如，生物样品是否含有中和抗体)的测定。本公开还涉及使用所述测定评价covid-19疫苗刺激针对sars-cov-2病毒或其变种的免疫应答的能力的方法。
技术介绍
1、由covid-19疫苗诱发的中和抗体应答在赋予针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，sars-cov-2)病毒的保护方面发挥着关键作用。为了测量针对sars-cov-2病毒的中和抗体，必须使用生物安全3级(bsl-3)实验室。与bsl-2实验室相比，bsl-3实验室需要更严格的实验室安全预防措施。这些措施包括受限/受控的实验室访问、对人员的医学监测和/或免疫接种、适当的实验室设计(包括自动关闭和锁定门、持续定向气流和水槽/洗眼站)、使用适当的生物安全柜和适当的个人防护设备(其可包括呼吸器)。
2、由于这些安全预防措施，bsl-3实验室操作昂贵且难以进入。本领域需要使得能够在bsl-3实验室外测量sars-cov-2中和抗体的新型测定。
技术实现思路
1、本文提供了一种用于测量针对sars-cov-2病毒的中和抗体的基于假病毒的中和测定。本文所述的测定可在生物安全2级(bsl-2)实验室中进行。因此，该测定比需要使用sars-cov-2病毒的常规测定更具成本效益。
3、本文提供了一种产生假病毒的方法，其包括用以下转染细胞：(i)编码慢病毒骨架和报告蛋白的质粒；(ii)编码rev蛋白、tat蛋白、gag蛋白、pol蛋白的一种或多种质粒；或其组合；以及(iii)表达sars-cov-2刺突(s)糖蛋白的质粒。
4、本文提供了一种用于测量生物样品刺激针对sars-cov-2病毒或其变种的免疫应答的能力的方法，其包括：
5、(a)使生物样品与表达sars-cov-2s糖蛋白和报告蛋白的假病毒接触；
6、(b)使表达血管紧张素转换酶2的细胞与假病毒接触；以及
7、(c)定量报告蛋白的表达。
8、本文提供了一种假病毒，其编码：(i)sars-cov-2刺突(s)糖蛋白；(ii)rev、tat、gag和pol蛋白中的一种或多种；以及(iii)报告蛋白。在实施方案中，假病毒编码1至约20种、2至约20种、3至约20种、4至约20种、5至约20种、6至约20种、7至约20种、8至约20种、9至约20种、约10至约20种、约11至约20种、约12至约20种、约13至约20种、约14至约20种、约15至约20种、约16至约20种、约17至约20种、约18至约20种、约19至约20种、1至约10种、2至约10种、3至约10种、4至约10种、5至约10种、6至约10种、约7至约10种、约8至约10种、2至5种、3至5种、4至约8种、5至约8种或约6至约8种sars-cov-2s糖蛋白。在实施方案中，报告蛋白是荧光素酶。在实施方案中，报告蛋白是荧光蛋白。在实施方案中，荧光蛋白是zsgreen。在实施方案中，sars-cov-2s糖蛋白与seq id no:1、seq id no:2或seq id no:3的多肽具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。在实施方案中，sars-cov-2s糖蛋白具有无活性的弗林蛋白酶(furin)切割位点。在实施方案中，sars-cov-2s糖蛋白具有无活性的弗林蛋白酶切割位点，所述无活性的弗林蛋白酶切割位点具有qqaq(seq id no:68)的氨基酸序列。在实施方案中，与具有seq id no:2的氨基酸序列的野生型sars-cov-2s糖蛋白相比，sars-cov-2s糖蛋白的氨基酸973和974是脯氨酸。在实施方案中，sars-cov-2s糖蛋白与seqid no:3、5-13、15、17-19、21和23-66中任一个的多肽具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。在实施方案中，sars-cov-2s糖蛋白与seq id no:3-13、20和22-66中任一个的多肽具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。在实施方案中，sars-cov-2s糖蛋白与seq id no:3、5-13和23-66中任一个的多肽具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。在实施方案中，sars-cov-2s糖蛋白来自sars-cov-2病毒或sars-cov-2的变种。在实施方案中，sars-cov-2的变种是b.1.1.7sars-cov-2毒株；b.1.351sars-cov-2毒株；p.1sars-cov-2毒株；cl.20c sars-cov-2毒株；b.1.617.2sars-cov-2毒株；b.1.525sars-cov-2毒株；b.1.526sars-cov-2毒株；b.1.617.1sars-cov-2毒株；c.37sars-cov-2毒株；b.1.621sars-cov-2毒株；或b.1.1.529sars-cov-2毒株。在实施方案中，sars-cov-2s糖蛋白与来自选自由以下组成的组的sars-cov-2s奥密克戎变种的sars-cov-2s糖蛋白具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性：ba.1、ba.2.12.1、ba.2、ba.3、ba.4、ba.5、xbb.1.5、xbb.2.3和xbb.1.16。在实施方案中，假病毒包含gag蛋白和pol蛋白。在实施方案中，融合蛋白编本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种假病毒，其编码：
2.根据权利要求1所述的假病毒，其编码1至约20种、2至约20种、3至约20种、4至约20种、5至约20种、6至约20种、7至约20种、8至约20种、9至约20种、约10至约20种、约11至约20种、约12至约20种、约13至约20种、约14至约20种、约15至约20种、约16至约20种、约17至约20种、约18至约20种、约19至约20种、1至约10种、2至约10种、3至约10种、4至约10种、5至约10种、6至约10种、约7至约10种、约8至约10种、2至5种、3至5种、4至约8种、5至约8种或约6至约8种SARS-CoV-2S糖蛋白。
3.根据权利要求1所述的假病毒，其中所述报告蛋白是荧光素酶。
4.根据权利要求1所述的假病毒，其中所述报告蛋白是荧光蛋白。
5.根据权利要求4所述的假病毒，其中所述荧光蛋白是ZsGreen。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的假病毒，其中所述SARS-CoV-2S糖蛋白与SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的多肽具有至少80
7.根据权利要求1-6中任一项所述的假病毒，其中所述SARS-CoV-2S糖蛋白具有无活性的弗林蛋白酶切割位点。
8.根据权利要求7所述的假病毒，其中所述SARS-CoV-2S糖蛋白具有无活性的弗林蛋白酶切割位点，所述无活性的弗林蛋白酶切割位点具有QQAQ(SEQ ID NO:68)的氨基酸序列。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的假病毒，其中与具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的野生型SARS-CoV-2S糖蛋白相比，所述SARS-CoV-2S糖蛋白的氨基酸973和974是脯氨酸。
10.根据权利要求1-8中任一项所述的假病毒，其中所述SARS-CoV-2S糖蛋白与SEQ IDNO:3、5-13、15、17-19、21和23-66中任一个的多肽具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。
11.根据权利要求1-6和10中任一项所述的假病毒，其中所述SARS-CoV-2S糖蛋白与SEQID NO:3-13、20和22-66中任一个的多肽具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的假病毒，其中所述SARS-CoV-2S糖蛋白与SEQ IDNO:3、5-13和23-66中任一个的多肽具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。
13.根据权利要求1-5中任一项所述的假病毒，其中所述SARS-CoV-2S糖蛋白来自SARS-CoV-2病毒或SARS-CoV-2的变种。
14.根据权利要求13所述的假病毒，其中SARS-CoV-2的所述变种是B.1.1.7SARS-CoV-2毒株；B.1.351SARS-CoV-2毒株；P.1SARS-CoV-2毒株；Cal.20C SARS-CoV-2毒株；B.1.617.2SARS-CoV-2毒株；B.1.525SARS-CoV-2毒株；B.1.526SARS-CoV-2毒株；B.1.617.1SARS-CoV-2毒株；C.37SARS-CoV-2毒株；B.1.621SARS-CoV-2毒株；或B.1.1.529SARS-CoV-2毒株。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的假病毒，其中所述SARS-CoV-2S糖蛋白与来自选自由以下组成的组的SARS-CoV-2S奥密克戎变种的SARS-CoV-2S糖蛋白具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种假病毒，其编码：
2.根据权利要求1所述的假病毒，其编码1至约20种、2至约20种、3至约20种、4至约20种、5至约20种、6至约20种、7至约20种、8至约20种、9至约20种、约10至约20种、约11至约20种、约12至约20种、约13至约20种、约14至约20种、约15至约20种、约16至约20种、约17至约20种、约18至约20种、约19至约20种、1至约10种、2至约10种、3至约10种、4至约10种、5至约10种、6至约10种、约7至约10种、约8至约10种、2至5种、3至5种、4至约8种、5至约8种或约6至约8种sars-cov-2s糖蛋白。
3.根据权利要求1所述的假病毒，其中所述报告蛋白是荧光素酶。
4.根据权利要求1所述的假病毒，其中所述报告蛋白是荧光蛋白。
5.根据权利要求4所述的假病毒，其中所述荧光蛋白是zsgreen。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的假病毒，其中所述sars-cov-2s糖蛋白与seq idno:1、seq id no:2或seq id no:3的多肽具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的假病毒，其中所述sars-cov-2s糖蛋白具有无活性的弗林蛋白酶切割位点。
8.根据权利要求7所述的假病毒，其中所述sars-cov-2s糖蛋白具有无活性的弗林蛋白酶切割位点，所述无活性的弗林蛋白酶切割位点具有qqaq(seq id no:68)的氨基酸序列。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的假病毒，其中与具有seq id no:2的氨基酸序列的野生型sars-cov-2s糖蛋白相比，所述sars-cov-2s糖蛋白的氨基酸973和974是脯氨酸。
10.根据权利要求1-8中任一项所述的假病毒，其中所述sars-cov-2s糖蛋白与seq idno:3、5-13、15、17-19、21和23-66中任一个的多肽具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。
11.根据权利要求1-6和10中任一项所述的假病毒，其中所述sars-cov-2s糖蛋白与seqid no:3-13、20和22-66中任一个的多肽具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的假病毒，其中所述sars-cov-2s糖蛋白与seq idno:3、5-13和23-66中任一个的多肽具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。
13.根据权利要求1-5中任一项所述的假病毒，其中所述sars-cov-2s糖蛋白来自sars-cov-2病毒或sars-cov-2的变种。
14.根据权利要求13所述的假病毒，其中sars-cov-2的所述变种是b.1.1.7sars-cov-2毒株；b.1.351sars-cov-2毒株；p.1...
【专利技术属性】
技术研发人员：Z·蔡，R·卡尔克丽，
申请(专利权)人：诺瓦瓦克斯股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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