【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，更具体的说是涉及一种鸡原始生殖细胞的电转染方法。
技术介绍
1、转染是研究基因表达以及在细胞中结合基因编辑技术的重要方法。目前原始生殖细胞(primordial germ cells，pgcs)转染方法主要有生化转染方法、病毒感染法和物理法等，不同的转染方法各有优缺点。
2、生化转染方法是通过转染试剂与核酸形成复合物通过膜融合或者胞吞作用呈递至胞内。以最常见的脂质体转染方法为例，脂质体是由脂质双分子层组成的囊泡，可以模拟细胞膜结构。中性脂质体通过脂质膜包裹dna，借助脂质膜将dna导入细胞膜内。而阳离子脂质体带有正电荷，通过静电作用与带负电的dna结合形成dna-阳离子脂质体复合物，复合物通过膜融合或者胞吞作用进入细胞。但是由于细胞膜结构功能的差异以及悬浮细胞的接触特性，脂质体转染在原代细胞和悬浮细胞的转染效果不是很理想。
3、病毒感染法是一种利用病毒载体将外源基因导入宿主细胞的转染方法。其基本原理是利用病毒天然具有的感染细胞的能力，将病毒的遗传物质替换为外源基因，然后通过病毒与宿主细胞的相互作用，将外源基因传递到宿主细胞中。由于病毒的高侵染性，使用病毒转染方法往往能获得较好的转染效果。但是制备高滴度病毒步骤复杂繁琐，且病毒转染的方法存在一定生物安全风险，不能规模推广。
4、物理法分为显微注射和电穿孔转染两种方法。受精卵是哺乳动物最大的单个细胞，因此常常使用极细的玻璃微量注射针将外源基因片段直接注射到原核期胚或培养的细胞中来制备转基因动物。但是该方法并不适用于鸟类。而电穿孔
5、目前对于鸡pgcs转染效率十分低，大部分实验室使用脂质体的转染效率在1～30％，影响了利用pgcs研究基因过表达和敲低表达的效率。如果要获得稳定转染的pgcs细胞系，该效率还会进一步下降。
6、综上，对于如何提高鸡pgcs转染效率是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了一种鸡原始生殖细胞的电转染方法。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、一种鸡原始生殖细胞的电转染方法，包括如下步骤：
4、(1)鸡原始生殖细胞的培养及计数；
5、(2)将计数之后的鸡原始生殖细胞与电转缓冲液、待转染材料混合，得到电转染体系；
6、所述待转染材料为mirna抑制剂、mirna模拟物或dna；
7、(3)将电转染体系转移至电极杯中，使用电转仪进行转染。
8、进一步的，所述步骤(1)的具体操作为：将鸡原始生殖细胞使用完全培养基培养，之后离心，使用pbs重悬，并进行细胞计数。
9、进一步的，步骤(2)中，
10、当所述待转染材料为dna时，所述鸡原始生殖细胞、电转缓冲液、dna用量比为：1×106个：100μl：4μg；
11、当所述待转染材料为mirna抑制剂或mirna模拟物时，所述鸡原始生殖细胞、电转缓冲液、mirna抑制剂/mirna模拟物的用量比为：1×106个：100μl：400nm。
12、进一步的，所述电转仪为thermo neon nxt细胞核转染仪或lonzaaad-1001s细胞核转染仪。
13、进一步的，步骤(3)中，
14、当所述电转仪为thermo neon nxt细胞核转染仪时，转染参数为1300v，30ms，脉冲次数为1或1500v，20ms，脉冲次数为1；
15、当所述电转仪为lonza aad-1001s细胞核转染仪时，转染程序为a13。
16、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术取得的有益效果为：
17、本专利技术方法能够使mirna抑制剂、mirna模拟物或载体dna在原始生殖细胞中成功表达，且表达量显著提高，有助于研究原始生殖细胞自我更新、增殖等特性，满足体外细胞实验以及实施基因编辑技术的要求。
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1.一种鸡原始生殖细胞的电转染方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)的具体操作为：将鸡原始生殖细胞使用完全培养基培养，之后离心，使用PBS重悬，并进行细胞计数。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述电转仪为Thermo Neon NxT细胞核转染仪或Lonza AAD-1001S细胞核转染仪。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，
【技术特征摘要】
1.一种鸡原始生殖细胞的电转染方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)的具体操作为：将鸡原始生殖细胞使用完全培养基培养，之后离心，使用pbs重悬，并进行细胞计数。
3.如权利要求1所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵智锋，姜自琴，邹娴，罗成龙，何燕华，徐振强，朱颖，舒鼎铭，
申请(专利权)人：广东省农业科学院动物科学研究所，
类型：发明
国别省市：
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