【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物技术和农林育种，具体涉及一种用于鉴定小麦-黑麦1rs.1bl易位系的特异性分子标记检测体系。
技术介绍
1、小麦-黑麦易位系（1rs.1bl）是通过将黑麦（ secale cerealel.，2n=14，rr）的1rs染色体片段导入小麦（ triticum aestivuml.，2n=42，aabbdd）的1a或1b染色体中获得的。这些易位系因其优良的抗病性、抗逆性和高产性，在全球小麦育种中得到了广泛应用。然而，传统的细胞学鉴定方法（如染色体核型分析、荧光原位杂交（fish）和基因组原位杂交（gish））操作复杂、耗时较长，且难以满足大规模育种的需求。因此，开发一种高效、快速、准确的分子标记鉴定方法具有重要意义。
2、1rs染色体来源于黑麦1r染色体的短臂，最早被引入小麦可追溯到20世纪初。1917年，俄罗斯遗传学家vavilov在野外观察到黑麦和小麦在高温干旱条件下同时开花，产生了自然杂交现象。这一发现推动了人工杂交实验的发展。20世纪20-30年代，德国的riebesel和katterman成功构建了1rs.1bl易位系。在现代小麦育种中，1rs.1bl易位系因其包含多个有利基因复合体，在全球范围内被广泛应用。例如，1rs.1bl易位系携带的抗病基因包括： sr31（抗小麦秆锈病）、 lr26（抗小麦叶锈病）、 yr9（抗小麦条锈病）、
3、1rs染色体短臂的抗病基因复合体极大地提高了小麦对多种病害的抗性，特别是对秆锈病、叶锈病和条锈病的抵抗能力。然而，近年来，由于病原菌的进化，部分抗病基因已失去作用。例如， yr9基因对部分条锈病菌株已不再有效（singh et al.，1998）。此外，1rs.1bl易位系的小麦品种在南非、印度和中国的多个地区逐渐表现出对白粉病的感病性，表明抗病基因的持久性仍然是育种过程中需要关注的重要问题（singh et al.，1998）。
4、多个研究表明，1rs易位系的小麦品种在干旱、贫瘠土壤等不良环境条件下具有更高的适应性（carver and rayburn，1994）。这一特性主要归因于1rs染色体调控的小麦根系发育增强，例如ehdaie et al.（2003）发现，1rs.1al易位系小麦的根系生物量显著增加，提高了其在低磷环境下的吸收能力（manske et al.，1996）。此外，rajaram et al.（1983）研究发现，在相同环境条件下，1rs.1bl易位系小麦的产量比未携带该易位的对照品种高出约11-12%。
5、随着分子生物学技术的进步，针对1rs易位系的分子标记鉴定方法得到了快速发展。早期的rapd、aflp等技术虽然可以用于1rs易位的检测，但由于其重现性差、操作复杂，未能广泛应用。近年来，ssr（简单序列重复）、snp（单核苷酸多态性）等标记的开发极大地提高了1rs易位系的检测效率。例如：ssr标记：schlegel and korzun（1997）开发的ssr标记能够准确区分1rs.1bl与1rs.1al易位系。snp标记：lelley et al.（2004）利用高通量基因分型技术，筛选出多个能够稳定检测1rs易位的snp位点，并应用于大规模小麦育种检测。
6、1rs.1bl易位系在小麦育种中的应用已有近百年历史，显著提高了小麦的抗病性、抗逆性和产量，因此被广泛应用于全球小麦品种的改良。近年来，随着高通量测序技术的发展，小麦和黑麦的基因组序列相继公布，为易位系的精准鉴定提供了新的技术手段。
技术实现思路
1、为了解决上述技术问题，本专利技术的目的是提供一种用于鉴定小麦-黑麦1rs.1bl易位系的特异性分子标记检测体系，该分子标记检测体系基于黑麦1rs染色体特有的dna序列，能够通过pcr技术快速、准确地鉴定易位系。
2、本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：提供一种用于鉴定小麦-黑麦1rs.1bl易位系的特异性分子标记检测体系，包括以下引物对中的至少一种：
3、引物对1：上游引物的核苷酸序列如seq id no.1所示；下游引物的核苷酸序列如seq id no.2所示；
4、引物对2：上游引物的核苷酸序列如seq id no.3所示；下游引物的核苷酸序列如seq id no.4所示。
5、进一步，采用引物对1进行黑麦1rs染色体臂小片段的分子检测时，pcr反应体系10µl，2 x rapid taq pcr 酶4µl，引物 10 µmol/l 各0.25 µl，模板基因组dna1 µl 50-100ng，ddh2o 4.5 µl；pcr扩增程序：96℃预变性5 min；94℃变性25sec，60℃退火25 sec，72℃延伸30 sec，35个循环；72℃延伸5 min；pcr扩增产物采用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，缓冲液为1×tbe，标记在1rs易位系材料中特异性扩增出1032 bp单一条带。
6、进一步，采用引物对2进行黑麦1rs染色体臂小片段的分子检测时，pcr反应体系10µl，2 x rapid taq pcr 酶4µl，引物 10 µmol/l各0.25 µl，模板基因组dna 1 µl 50-100ng，ddh2o 4.5 µl；pcr扩增程序：96℃预变性5 min；94℃变性25sec，60℃退火25 sec，72℃延伸30 sec，35个循环；72℃延伸5 min；pcr扩增产物采用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，缓冲液为1×tbe，标记在1rs易位系材料中特异性扩增出381 bp单一条带。
7、本专利技术还提供了上述用于鉴定小麦-黑麦1rs.1bl易位系的特异性分子标记检测体系在小麦-黑麦1rs.1bl易位系检测、鉴定、分子标记辅助育种或种质资源筛选中的应用。
8、本专利技术还提供了一种鉴定小麦-黑麦1rs.1bl易位系的试剂盒，包括上述用于鉴定小麦-黑麦1rs.1bl易位系的特异性分子标记检测体系。
9、本专利技术具有以下有益效果：
10、1、本专利技术的用于鉴定小麦-黑麦1rs.1bl易位系的特异性分子标记检测体系具备以下优点：快速本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.用于鉴定小麦-黑麦1RS.1BL易位系的特异性分子标记检测体系，其特征在于，包括以下引物对中的至少一种：
2.如权利要求1所述的用于鉴定小麦-黑麦1RS.1BL易位系的特异性分子标记检测体系，其特征在于，采用引物对1进行黑麦1RS染色体臂小片段的分子检测时，PCR反应体系10µl，2 x Rapid Taq PCR 酶4 µl，引物 10 µmol/L 各0.25 µl，模板基因组DNA 1 µl 50-100 ng，ddH2O 4.5 µl；PCR扩增程序：96℃预变性5 min；94℃变性25 sec，60℃退火25sec，72℃延伸30 sec，35个循环；72℃延伸5 min；PCR扩增产物采用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，缓冲液为1×TBE，标记在1RS易位系材料中特异性扩增出1032 bp单一条带。
3.如权利要求1所述的用于鉴定小麦-黑麦1RS.1BL易位系的特异性分子标记检测体系，其特征在于，采用引物对2进行黑麦1RS染色体臂小片段的分子检测时，PCR反应体系10µl，2 x Rapid Taq PCR酶4µl，引物10 µmol/L 各
4.权利要求1-3任一项所述的用于鉴定小麦-黑麦1RS.1BL易位系的特异性分子标记检测体系在小麦-黑麦1RS.1BL易位系检测、鉴定、分子标记辅助育种或种质资源筛选中的应用。
5.一种鉴定小麦-黑麦1RS.1BL易位系的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-3任一项所述的用于鉴定小麦-黑麦1RS.1BL易位系的特异性分子标记检测体系。
...【技术特征摘要】
1.用于鉴定小麦-黑麦1rs.1bl易位系的特异性分子标记检测体系，其特征在于，包括以下引物对中的至少一种：
2.如权利要求1所述的用于鉴定小麦-黑麦1rs.1bl易位系的特异性分子标记检测体系，其特征在于，采用引物对1进行黑麦1rs染色体臂小片段的分子检测时，pcr反应体系10µl，2 x rapid taq pcr 酶4 µl，引物 10 µmol/l 各0.25 µl，模板基因组dna 1 µl 50-100 ng，ddh2o 4.5 µl；pcr扩增程序：96℃预变性5 min；94℃变性25 sec，60℃退火25sec，72℃延伸30 sec，35个循环；72℃延伸5 min；pcr扩增产物采用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，缓冲液为1×tbe，标记在1rs易位系材料中特异性扩增出1032 bp单一条带。
3.如权利要求1所述的用于鉴定小麦-黑麦1rs.1bl易位系的特异性分子标记检测体系，其特征在于，采用引物对...
【专利技术属性】
技术研发人员：贺飞，张志蒙，尹谋，赵心宇，罗巧玲，
申请(专利权)人：中国科学院遗传与发育生物学研究所，
类型：发明
国别省市：
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