【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫分析，特别涉及血清淀粉样蛋白a免疫层析检测试剂条的制备方法。
技术介绍
1、血清淀粉样蛋白a(serum amy loid a protein,saa)是由肝脏分泌的一种急性时相反应蛋白。它来自于载脂蛋白家族，是组织淀粉样蛋白a的前体物质。其血浆浓度在炎症、创伤、心肌梗死、感染、肿瘤等情况下显著上升，可作为淋巴细胞等免疫细胞的趋化因子；并上调多种炎症因子(如tnf、i l-6及i l-8等)的表达。病毒感染时saa明显升高，感染后4-6h即升高，康复期消失更快，急性期感染病人增高幅度反映病情严重程度。在感染性疾病、肿瘤、移植排斥反应等疾病中均检测到saa升高，可为临床提供更好的诊疗依据。
2、目前已知的测定人血清淀粉样蛋白a的方法有：酶联免疫测定法(elisa)、胶体金层析法、免疫比浊法和荧光微球层析法等。免疫比浊法对仪器要求较高，容易受血脂的影响，不能检测全血。胶体金层析法可用于临床检测，但是灵敏度较低。酶联免疫测定法(elisa)有较高的灵敏度，但是操作过程繁琐，每次测值均需要绘制标准曲线，准确度误差大，测定时间较长，仪器昂贵且需要专业培训人员进行操作，不符合临床快速检测需求。
3、因此，开发操作简单、仪器成本低、适合现场即时检测的人血清淀粉样蛋白a的产品，是本领域技术人员需要解决的技术问题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了克服现有技术的缺陷，针对相关技术中的技术缺陷，提供基于量子点荧光微球的定量检测人血清淀粉样蛋白a免疫层析
2、本专利技术的第一方面在于提供一种血清淀粉样蛋白a免疫层析检测试剂条，包括反应底板、样品垫、结合垫、层析膜和吸水纸；所述层析膜设置在所述反应底板的中部，所述样品垫和所述吸水纸分别设置在所述反应底板的两端，所述反应底板中部为所述层析膜，所述层析膜和所述样品垫中间为所述结合垫，所述样品垫部分叠加搭接在所述结合垫上，所述结合垫部分叠加搭接在所述层析膜的一侧，所述吸水纸部分叠加搭接在所述层析膜的另一侧；
3、所述结合垫上固相了用于人血清淀粉样蛋白a抗体标记的量子点荧光微球和用于dnp-dnp-bsa标记的量子点荧光微球；
4、所述层析膜上具有包被有人血清淀粉样蛋白a抗体的检测线和包被有兔抗dnp质控抗体的质控线；所述层析膜上沿层析方向依次平行间隔设置所述检测线和所述质控线。
5、优选的，所述人血清淀粉样蛋白a抗体通过对人血清淀粉样蛋白a免疫小鼠获得；所述层析膜为硝酸纤维素膜；所述吸水纸由棉麻材质制成，使样本在所述吸水纸的毛细作用下从所述样品垫层析到所述层析膜并发生抗体抗原反应。
6、本专利技术的第二方面在于提供第一方面的一种血清淀粉样蛋白a免疫层析检测试剂条的制备方法，包括：
7、s1，采用量子点荧光微球标记人血清淀粉样蛋白a抗体以形成量子点荧光微球标记人血清淀粉样蛋白a抗体溶液；所述量子点荧光微球直径为200-400nm，激发光为340nm，发射光为610nm，斯托克斯位移大于150nm；
8、s2，采用量子点荧光微球标记dnp-bsa以形成量子点荧光微球标记dnp-bsa溶液；
9、s3，对所述量子点荧光微球标记血清淀粉样蛋白a抗体溶液进行固相；
10、s4，进行所述血清淀粉样蛋白a检测抗体包被和所述兔抗dnp质控抗体包被；
11、s5，基于样品垫预处理溶液对所述样品垫进行预处理；所述样品垫预处理溶液包括：10-50mmo l/l pb，1％-5％蔗糖，0.1％-2％pvp，0.5-5％bsa和0.1-2％吐温20，并且所述样品垫预处理溶液的ph值为7.0-8.0；
12、s6，进行试剂条组装，包括：将所述样品垫、所述结合垫、所述层析垫和所述吸水纸依次搭接粘贴在所述反应底板上，并保持1-2mm的重合，使用切条机按照4mm宽度裁切形成所述血清淀粉样蛋白a免疫层析检测试剂条。
13、优选的，所述s1包括：
14、s11，利用edc和nhs活化所述量子点荧光微球表面的羧基基团；
15、s12，加入人血清淀粉样蛋白a抗体，室温偶联1-3小时；
16、s13，加入微球封闭剂封闭1-2小时，从而对没有偶联人血清淀粉样蛋白a抗体的羧基基团进行封闭；
17、s14，将封闭后的溶液离心去上清，并加入微球保存液形成量子点荧光微球标记人血清淀粉样蛋白a抗体溶液。
18、优选的，所述s2包括：
19、s21，利用edc和nhs活化量子点荧光微球表面的羧基基团；
20、s22，加入dnp-bsa，室温偶联1-3小时；
21、s23，加入微球封闭剂封闭1-2小时，从而对没有偶联dnp-bsa的羧基基团进行封闭；
22、s24，将封闭后的溶液离心去上清，并加入微球保存液形成量子点荧光微球标记dnp-bsa溶液。
23、优选的，所述s1和所述s2中的所述离心的转速为10000-18000rpm，离心时间为10-20分钟；所述s1和所述s2在室温摇床上进行反应，所述摇床的转速控制在100-200rpm；所述s13和所述s23的所述加入微球封闭剂封闭1-2小时包括：加入所述微球封闭剂，在室温摇床转速100-200rpm的条件下反应1-2小时；其中，所述的微球封闭剂为合成的非蛋白和非血清基质高分子水溶性聚合物，含有氨基末端，能够通过与羧基化学键固定到微球的表面，从而达到封闭效果，所述封闭效果包括：封闭微球偶联蛋白和抗体后非特异位点，从而增强共轭物蛋白或抗体活性，并且能代替bsa实现高信噪比。
24、优选的，所述s3包括：
25、s31，将所述量子点荧光微球标记血清淀粉样蛋白a抗体溶液用微球保存液稀释4倍形成第一稀释液；
26、s32，将所述第一稀释液与所述量子点荧光微球标记dnp-bsa溶液按照100：1的比例混合形成第一混合液；
27、s33，按照2-6u l/cm将所述第一混合液喷涂在所述结合垫上并进行干燥和结合垫预处理，得到所述结合垫；所述干燥条件为30-45℃干燥12-24小时；
28、所述结合垫预处理采用配制的结合垫预处理溶液进行，所述结合垫预处理溶液包括：10-50mmo l/lpbs，1％-20％蔗糖，0.5％-10％海藻糖，0.5％-5％bsa，0.05％-0.2％pvp，0.05％-0.2％peg8000，0.5％-5％sds-l和0.1-5％吐温20，并且所述结合垫预处理溶液的ph值为7.4；所述结合垫预处理包括：将结合垫平铺放在所述结合垫预处理溶液中静置1-5min，然后在40-60℃的温度范围下鼓风干燥1-2小时。
29、优选的，所述s4包括：
30、s41，将所述血清本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种血清淀粉样蛋白A免疫层析检测试剂条，其特征在于，包括反应底板、样品垫、结合垫、层析膜和吸水纸；所述层析膜设置在所述反应底板的中部，所述样品垫和所述吸水纸分别设置在所述反应底板的两端，所述反应底板中部为所述层析膜，所述层析膜和所述样品垫中间为所述结合垫，所述样品垫部分叠加搭接在所述结合垫上，所述结合垫部分叠加搭接在所述层析膜的一侧，所述吸水纸部分叠加搭接在所述层析膜的另一侧；
2.根据权利要求1所述的一种血清淀粉样蛋白A免疫层析检测试剂条，其特征在于，所述血清淀粉样蛋白A抗体通过对人血清淀粉样蛋白A免疫小鼠获得；所述层析膜为硝酸纤维素膜；所述吸水纸由棉麻材质制成，使样本在所述吸水纸的毛细作用下从所述样品垫层析到所述层析膜并发生抗体抗原反应。
3.一种权利要求1-2任一所述的血清淀粉样蛋白A免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于，包括：
4.根据权利要求3所述的血清淀粉样蛋白A免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于，所述S1包括：
5.根据权利要求4所述的血清淀粉样蛋白A免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于，所述S2包括
6.根据权利要求5所述的血清淀粉样蛋白A免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于，所述S1和所述S2中的所述离心的转速为10000-18000rpm，离心时间为10-20分钟；所述S1和所述S2在室温摇床上进行反应，所述摇床的转速控制在100-200rpm；所述S13和所述S23的所述加入微球封闭剂封闭1-2小时包括：加入所述微球封闭剂，在室温摇床转速100-200rpm的条件下反应1-2小时；其中，所述的微球封闭剂为合成的非蛋白和非血清基质高分子水溶性聚合物，含有氨基末端，能够通过与羧基化学键固定到微球的表面，从而达到封闭效果，所述封闭效果包括：封闭微球偶联蛋白和抗体后非特异位点，从而增强共轭物蛋白或抗体活性，并且能代替BSA实现高信噪比。
7.根据权利要求6所述的血清淀粉样蛋白A免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于，所述S3包括：
8.根据权利要求7所述的血清淀粉样蛋白A免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于，所述S4包括：
9.一种基于权利要求1-2任一所述的血清淀粉样蛋白A免疫层析检测试剂条的检测试剂盒，其特征在于，包括：
10.一种基于权利要求9所述的检测试剂盒定量检测血清淀粉样蛋白A的检测方法，其特征在于，包括：
...【技术特征摘要】
1.一种血清淀粉样蛋白a免疫层析检测试剂条，其特征在于，包括反应底板、样品垫、结合垫、层析膜和吸水纸；所述层析膜设置在所述反应底板的中部，所述样品垫和所述吸水纸分别设置在所述反应底板的两端，所述反应底板中部为所述层析膜，所述层析膜和所述样品垫中间为所述结合垫，所述样品垫部分叠加搭接在所述结合垫上，所述结合垫部分叠加搭接在所述层析膜的一侧，所述吸水纸部分叠加搭接在所述层析膜的另一侧；
2.根据权利要求1所述的一种血清淀粉样蛋白a免疫层析检测试剂条，其特征在于，所述血清淀粉样蛋白a抗体通过对人血清淀粉样蛋白a免疫小鼠获得；所述层析膜为硝酸纤维素膜；所述吸水纸由棉麻材质制成，使样本在所述吸水纸的毛细作用下从所述样品垫层析到所述层析膜并发生抗体抗原反应。
3.一种权利要求1-2任一所述的血清淀粉样蛋白a免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于，包括：
4.根据权利要求3所述的血清淀粉样蛋白a免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于，所述s1包括：
5.根据权利要求4所述的血清淀粉样蛋白a免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于，所述s2包括：
6.根据权利要求5所述的血清淀粉样蛋白a免...
【专利技术属性】
技术研发人员：左威，朱永春，李寅龙，王璐瑶，王加义，李静，王洋，
申请(专利权)人：北京中生金域诊断技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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