【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因检测，特别是涉及一种下呼吸道感染相关新生隐球菌多重基因鉴定引物组及其应用。
技术介绍
1、呼吸道感染是临床最常见的严重威胁人类健康的感染性疾病，可分为上呼吸道感染和下呼吸道感染(lrti)。lrti为喉部以下部位的感染，常引起急慢性气管炎、急慢性肺炎、支气管炎等严重症状。
2、lrti最主要的病原体是细菌(包括结核分枝杆菌和军团菌)，也可由真菌和衣原体及支原体等非典型微生物导致，部分病毒也可引起lrti，综合统计大量文献报道，国内引起lrti最常见的病原体包括肺炎克雷伯菌(klebsiella pneumoniae,kpn)、肺炎链球菌(streptococcus pneumoniae，spn)、流感嗜血杆菌(haemophilus influenzae，hin)、铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa，pau)、嗜肺军团菌(legionnaire,leg)、金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus，sau)、嗜麦芽窄食单胞菌(stenotrophomonas maltophilia，sma)、结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis，tb)、大肠杆菌(escherichia coli，e.coli)、鲍曼不动杆菌(acinetobacter baumannii，aba)、阴沟肠杆菌(enterobactercloacae，ecl)、黏质沙雷菌(serratia marcescens，sm)、副流感嗜血杆菌(haemophiluspar
3、目前临床实验室有关lrti病原体的检验主要包括细菌、真菌和支原体涂片镜检法和分离培养法，病毒则主要依赖于免疫学检测和分子生物学方法等，常见的样本类型有痰液，肺泡灌洗液、外周血和浆膜腔积液。
4、目前国内外检测lrti病原体的常规技术如下：
5、(1)涂片镜检法：涂片镜检法是病原学诊断的经典方法，主要用于结核分枝感染的抗酸染色镜检和新生隐球菌的墨汁染色镜检。涂片镜检的优点是简便、经济，检测最为迅速，可快速为lrti诊断提供参考依据。缺点是特异性较差，要求实验人员有丰富的经验。临床上将分离培养法和涂片镜检法相结合，提高诊断正确性，降低假阴性、假阳性。
6、(2)病原体分离培养法：分离培养法是诊断细菌和真菌引起的lrti的金标准，是进行呼吸道分泌物检测的常规方法。培养法的优点是培养阳性可以明确病原体类型，而且同时可以进行体外药敏试验，药敏试验结果可为临床治疗lrti及控制细菌耐药性等方面提供准确有效的参考依据。缺点是营养要求较高，阳性检出率不高(约30％)，培养周期长，生物安全要求高。培养法周期长、阳性检出率低，不能为临床lrti的诊疗提供快速准确的病原学依据。
7、(3)免疫学方法：病毒和衣原体等无法通过分离培养法检测病原体，可通过检测其特异性抗原或特异性抗体(igm和igg抗体)来明确病原体的种类。常用的免疫学检测方法有酶联免疫吸附法、免疫荧光法、胶体金免疫层析法、荧光免疫层析法、电化学发光免疫分析等。免疫学方法优点是快速、无损伤，但缺点是受所选用蛋白特异性及患者免疫状态等因素的限制，特异性相对较低，窗口期较长，而且igg型抗体无法判断为接种疫苗、感染后或隐性感染，仅作为辅助诊断指标。
8、(4)分子生物学方法：包括测序、单一pcr、套式pcr、线性探针以及高通量测序(ngs)等。分子生物学方法的优点是快速、灵敏度高、特异性强，缺点是普通pcr或qpcr等方法检测位点少、通量小、价格高，检测周期较长，而且无法判定位感染、定植或污染。
9、因此，亟需一种通量高、成本低、灵敏度高且特异性优异的用于lrti相关新生隐球菌鉴定的多重基因检测试剂盒产品具有重要的临床指导意义。
技术实现思路
1、为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种下呼吸道感染相关新生隐球菌多重基因鉴定引物组及其应用，利用fam荧光标记引物，优化反应体系，可在同一pcr体系内检测新生隐球菌目的基因、人类内参基因和系统内参，克服了传统pcr中由于不均等扩增造成的偏差，精准定量基因表达。基于此构建的试剂和试剂盒，操作简单、成本低、准确性高，结合毛细管电泳分析技术，结果直观可靠，便于大规模临床应用，为lrti相关新生隐球菌检测提供高效方案。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
3、本专利技术的目的之一在于提供一种下呼吸道感染相关新生隐球菌多重基因鉴定引物组，所述引物组的核苷酸序列如seq id no.1-2所示。
4、优选地，所述引物组包含用于检测新生隐球菌的引物。
5、本专利技术的目的之二在于提供一种用于区分下呼吸道感染相关新生隐球菌的试剂，所述试剂中含有上述的引物组。
6、优选地，所述试剂中还含有用于检测人类内参基因位点hum dna和系统内参ic的引物，核苷酸序列如seq id no.3-6所示。
7、本专利技术的目的之三在于提供一种用于区分下呼吸道感染相关新生隐球菌的试剂盒，所述试剂盒中含有上述的引物组。
8、优选地，所述试剂盒中还含有核苷酸序列如seq id no.3-6所示的引物组。
9、本专利技术的目的之四在于提供一种如上述的引物组在制备下呼吸道感染相关新生隐球菌鉴定产品中的应用。
10、本专利技术的目的之五在于提供一种如核苷酸序列如seq id no.1-6所示的引物组在制备下呼吸道感染相关新生隐球菌鉴定产品中的应用。
11、优选地，所述产品为试剂或试剂盒。
12、更为优选地，所述试剂盒的使用方法为：
13、(1)获得待测样本的dna；
14、(2)以步骤(1)中的dna为基础，利用核苷酸序列如seq id no.1-2所示的引物组或seq id no.3-6所示的引物组进行多重pcr；
15、(3)对多重pcr产物进行毛细管电泳，检测fam荧光信号，并使用id-x系统软件分析目标基因靶点峰高强度，得到各病原体的相对载量。
1本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种下呼吸道感染相关新生隐球菌多重基因鉴定引物组，其特征在于，所述引物组的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2所示。
2.根据权利要求1所述的一种下呼吸道感染相关新生隐球菌多重基因鉴定引物组，其特征在于，所述引物组包含用于检测新生隐球菌的引物。
3.一种用于区分下呼吸道感染相关新生隐球菌的试剂，其特征在于，所述试剂中含有权利要求1中所述的引物组。
4.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于，所述试剂中还含有用于检测人类内参基因位点Hum DNA和系统内参IC的引物，核苷酸序列如SEQ ID NO.3-6所示。
5.一种用于区分下呼吸道感染相关新生隐球菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有权利要求1所述的引物组。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还含有核苷酸序列如SEQID NO.3-6所示的引物组。
7.一种如权利要求1中所述的引物组在制备下呼吸道感染相关新生隐球菌鉴定产品中的应用。
8.一种如核苷酸序列如SEQ ID NO.1-6所示的引物组在制备下呼吸道感染相关新
9.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，所述产品为试剂或试剂盒。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述试剂盒的使用方法为：
...【技术特征摘要】
1.一种下呼吸道感染相关新生隐球菌多重基因鉴定引物组，其特征在于，所述引物组的核苷酸序列如seq id no.1-2所示。
2.根据权利要求1所述的一种下呼吸道感染相关新生隐球菌多重基因鉴定引物组，其特征在于，所述引物组包含用于检测新生隐球菌的引物。
3.一种用于区分下呼吸道感染相关新生隐球菌的试剂，其特征在于，所述试剂中含有权利要求1中所述的引物组。
4.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于，所述试剂中还含有用于检测人类内参基因位点hum dna和系统内参ic的引物，核苷酸序列如seq id no.3-6所示。
5.一种用于区分下呼吸道感...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵虎，王诗雯，迟文静，方毅，张景皓，姜文容，吴勇，金海英，
申请(专利权)人：华东医院，
类型：发明
国别省市：
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