糖化血红蛋白定量检测系统及使用该系统检测糖化血红蛋白含量的方法技术方案

本发明专利技术提供了一种能同时检测血液中血红蛋白和糖化血红蛋白的装置，包括侧流分析检测试纸条，激光诱导表面荧光检测器，ＬＥＤ检测器，以及一种利用上述装置通过免疫学方法同时定量测定血液种血红蛋白和糖化血红蛋白的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种高灵牵文度定量冲全测血液中的糖化血红蛋白的侧流(1 a tera 1 f low)定 量分析检测系统，以及使用该系统进行检测的方法，特别是能同时定量检测糖化血红蛋 白和总血红蛋白的集成式定量分析检测方法和系统。
技术介绍
糖尿病是一种不正常的碳水化合物代谢疾病，其中葡萄糖不能进入人体细胞也不能 被人体利用，因而高浓度停留在血液中，进而引起许多并发症。糖尿病分为三种类型 糖尿病的主要类型是1型糖尿病，叫做胰岛素依赖型糖尿病，当胰腺p细胞受到自动免 疫反应的伤害，从而停止产生或分泌胰岛素，就会产生l型糖尿病；2型糖尿病叫做非 胰岛素依赖型糖尿病，该类型糖尿病的特征是外周胰岛素抵抗并破坏胰岛素分泌；3型 糖尿病是妊娠性糖尿病，典型的发生在怀孕期。在发达国家，已知2型糖尿病是是最普 遍的糖尿病，占糖尿病人的9 0 - 9 5 %,而1型和妊娠性糖尿病没有那么普遍。糖尿病可以通过检测尿中或血液中的葡萄糖水平来诊断，但是尿糖对诊断来说并不 可靠。由于血糖水平可以被多种因素影响，如饮食和锻炼，因此血糖检验也不准确。由 于这些原因，糖化血红蛋白检验是主要用作诊断或监控糖尿病的血液检验。在1986年，美国糖尿病协会推荐每年进行两次糖化血红蛋白检验来监控所有类型 的糖尿病，而且糖化血红蛋白认为是血糖控制的一个稳定指标，自从1993年DCCT (糖 尿病控制与并发症试-验)显示糖化血红蛋白水平和糖尿病并发症有直接关系以来，被广 泛用于处理糖尿病。基于DCCT和UKPDS (英国糖尿病前瞻性研究)的结果，现行美国糖尿病协会(ADA ) 指导推荐目标糖化血红蛋白应低于7 %。如果糖化血红蛋白的含量高于8 % ， ADA建议 糖尿病治疗要重新检测，且根据需要修改。在2001年，美国临床内分泌学家协会建议 目标糖化血红蛋白是6. 5 %或更低,基于UKPDS的数据如果糖化血红蛋白为6.5%或更高， 糖尿病患者的视网膜脱落会增加。在1999年，国际糖尿病联合会(IDF )也推荐目标值 为6. 5%。根据DCCT对1441名患者6. 5年的临床研究，通过成功对血糖的严密控制，微脉管 并发症的风险显著减少。因此，患者和内科医生都认为严密控制血糖水平是必须的。 人类成熟的血红蛋白一般包括三种类型97% HbA， 2. 5% HbA2和0. 5% HbF。其中，HbA含有四个多狀链两个cx链，每个含有141个氨基酸，以及两个p链，每个含有146 个氨基酸。HbA色谱分析显示有96%的较多血红蛋白和5~6°/。的较少血红蛋白，命名为 HbAl或糖化血红蛋白。糖化形式的血红蛋白是通过在(3链N端的缬氨酸加上葡萄糖形成 的，歸l为80% ,剩下的部分为HbAla和HbAlb。糖化是在蛋白质的氨基酸残基上通过非酶作用加入糖分子的，这是一个非常慢且不 能逆转的反应。糖化血红蛋白是通过不断在血红蛋白上添加血糖形成的，且糖化血红蛋 白和血红蛋白的比例由红细胞暴露于葡萄糖的时间决定。特别是，在糖化作用中，葡萄 糖加在HbA的缬氨酸上形成HbAlc前体，然后通过阿玛多尔重排形成稳定的酮氨型。此 时，血糖水平的升高增加了血红蛋白暴露在周围葡萄糖中的时间，从而产生高比例的糖 化血红蛋白。因此，糖化血红蛋白的比例反映了血糖水平。同时，由于红细胞的寿命是 60天到120天，糖化血红蛋白检验能帮助监控血糖水平的长期控制。人们开发了血液中糖化血红蛋白检测的不同方法。目前可用的方法包括离子交换色 谱、亲和色谱、电泳、复合比色法或类似方法。这些方法都难于实施，且需要熟练的技 术人员和仪器。同时，考虑到一次性临床分析系统的发展趋势，在异地应用的，如家里， 或即时检验(POCT， point-of-care testing)，非常有用的定量检测系统被提了出来，如 视觉，光学和电化学检测方法。近来，识别糖化血红蛋白N-端残基的单克隆和多克隆抗体被开发出来(U. S. Pat. No. 4， 647， 654 ),因此推进了利用抗体对糖化血红蛋白进行定量免疫分析系统的研究。 由于在免疫分析系统中采用了识别糖化血红蛋白的抗体，其在特异性和灵敏性方面具有 优势。当用免疫分析检验法检测糖化血红蛋白水平时，必须制备具有高灵敏度识别糖化 血红蛋白特异的糖化区域的抗体。由于血液中的糖化血红蛋白被糖化的区域不是暴露在 外部，为了能被抗体识别，糖化血红蛋白必须首先被修饰。因此，血红蛋白必须变成高 铁血红蛋白以用于总血红蛋白的分光检测。高铁血红蛋白具有吸收特定波长的光的性 质，因此其通过分光法测定其吸收可以定量检测总血紅蛋白含量。同时，修饰的糖化血 红蛋白通过免疫学方法确定其在血液中的糖化血红蛋白的含量。免疫检验装置根据其原理可以分成通流(flow through)型和侧流(lateral flow) 型。在通流型中，抗体与多孔基质表面共价偶联，且样品中的分析物与固定化抗体结合。 然后，再加入二级捕获抗体，随后再用发色酶底物进行视觉检测。有两种类型的侧流免 疫分析4全验装置。 一种类型是一体式装置(all-in one),另一种类型是当流动样品通 过固定在多孔基质上的标记固定化抗体时，与标记抗体结合的装置。侧流型的结构包括样品垫(sample pad),可以用于上样；释放垫(releasing pad)，包被有检测抗体；显影膜或试纸条(developing membrane or strip),样品中的成份 在其中移动，并被独自分开，再进行抗原-抗体反应；以及吸收垫，可以连续^jj欠流体 以使样品能持续流过该装置。侧流分析检验可以广泛且便利地应用于不同领域，如怀孕 诊断，癌症诊断和微生物检测。但是由于不能用棵眼进行定量检测，因此不能检测分析 物的准确含量，其应用受到限制。利用HbAlc的抗体的免疫分析检测一般应用测定反应体系的浊度变化来进行。由于 HbAlc特异性抗原表位只出现在糖化血红蛋白P链N端，因此抗原-抗体复合物不会聚 集。因此，具有多个抗原表位的多聚半抗原会与抗体反应，形成不可溶的免疫复合物。 可以通过比法来测量。浊度信号与样品中的糖化血红蛋白浓度成反比。但是，这种方法 有个缺点需要单独的分析实验室和自动分析设备，因为它包含几个处理步骤。韩国专利公开号为2004-0018893公开了一种糖化血红蛋白检验试剂盒，它包含緩 冲液，緩冲液中含有糖化血红蛋白抗体，含有血红蛋白抗体的试纸条，以及洗脱溶液。 不幸的是，不能检测糖化血红蛋白的准确含量，这是由于试剂盒是一个半定量分析检验 系统，其中将染料加入糖化血红蛋白抗体中，并且HbAlc存在所引起的颜色变化是通过 棵眼观测或者使用比色板进行视觉比较。目前，可以定量检测分析物的放射免疫检测法(RIA )或酶联免疫吸附测定(ELISA ) 法，涉及几个复杂步骤，包括，用酶处理和洗涤。因此，对能够进行更快速，更便利， 更灵敏定量检测的普通检测方法有很大的需求
技术实现思路
技术问题如上所迷，用抗体对糖化血红蛋白的量进行定量测定的便利的检测装置的灵敏性较 低且为进行定量免疫检测包含几个复杂的步骤，包括，用酶处理和洗涤。因此，本专利技术 人通过努力研究提供了 一种集成式定量分析检测系统，它能够同时对糖化血红蛋白和总 血红蛋白进行定量测定本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种侧流分析检测试纸条，包括背板，样品垫，色谱介质和吸收垫，其特征为，所述背板支撑所述试纸条上的所有部件，且所述样品垫和所述吸收垫分别无重叠的黏附于所述背板的两端，所述样品垫朝向黏附吸收垫方向的一端与所述色谱介质的一端重叠，首先将样品加于所述样品垫上，所述色谱介质的另一端与所述吸收垫重叠，所述色谱介质上距离所述样品垫一定距离处固定有一种捕捉物，所述捕捉物与所述样品中的一种分析物实质相同，且通过竞争性免疫反应与样品中的分析物通过抗原－抗体反应结合，并且所述捕捉物为糖化血红蛋白。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：崔义烈，南基凤，金载勳，郑东锡，朴相烈，文政大，郑震河，金永敏，郑素映，朴爱京，金丙澈，金成中，
申请(专利权)人：韩国帕克特生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]