【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于合成生物学，涉及重组人xxiii型胶原蛋白、其生产方法及应用。
技术介绍
1、胶原蛋白是哺乳动物中发现的最丰富的蛋白质，目前已经发现的28种胶原蛋白可分为四大类：纤维型胶原、网状型胶原、具有间断三螺旋的原纤维相关胶原(facits)及具有间断三螺旋的膜相关胶原(macits)。
2、xxiii型胶原蛋白是近些年来发现的一种新型跨膜胶原蛋白，是ii型跨膜蛋白的一种，其结构上与xiii型和xxv型胶原蛋白具有高度相似性，都包含三个三螺旋胶原结构域，两侧是四个非胶原结构域，跨膜结构域位于nc1结构域。人xxiii型胶原转录本大小为3067bp，其编码540个氨基酸序列，锚定与细胞表明的蛋白大小表现为75kd，可被弗林蛋白酶切割而产生60kd的可溶性蛋白。
3、作为一种新近发现的胶原蛋白，关于xxiii型胶原功能的研究很少，现有研究多集中在其是多种转移性肿瘤的标志物。基本上不存在采用截短、拼接等方式构建有功能的人xxiii型重组胶原蛋白的研究。
技术实现思路
1、鉴于现有技术中存在的技术问题，本专利技术的目的在于，提供具有良好生物活性的天然人xxiii型胶原蛋白的截短蛋白、以及通过上述截短蛋白的拼接构建的生物活性更好的重组人xxiii型胶原蛋白。
2、专利技术人发现了6个具有良好促细胞粘附、促凝血活性(与市售重组人胶原蛋白相当)的天然人xxiii型胶原蛋白的截短蛋白，并将它们以特定方式拼接从而构建了促细胞粘附、促凝血活性更好(优于市售重组人
3、即，本专利技术的技术方案包括：
4、1.一种重组人xxiii型胶原蛋白，其氨基酸序列如seq id no:1～7中的任一个所示。
5、2.编码项1所述的重组人xxiii型胶原蛋白的核酸。
6、3.包含项2所述的核酸的表达载体。
7、4导入了项3所述的表达载体的宿主细胞。宿主细胞可以是原核细胞或真核细胞，包括大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌等细菌宿主，毕赤酵母、酿酒酵母、动物细胞、植物细胞等真核宿主，优选大肠杆菌及毕赤酵母，更优选毕赤酵母。
8、5.一种项1所述的重组人xxiii型胶原蛋白的生产方法，其包括培养项4所述的宿主细胞，使其表达项1所述的重组人xxiii型胶原蛋白，并收集包含所述重组人xxiii型胶原蛋白的培养物的步骤。所述表达可以是组成表达、诱导表达中的一种或者两种的组合。其中，诱导表达的诱导剂可以是iptg、β-半乳糖苷、甲醇、乙醇等诱导剂。
9、6.根据项5所述的生产方法，其还包括将所述培养物进行分离纯化、从而获得纯化的所述重组人xxiii型胶原蛋白的步骤。
10、7.根据项6所述的生产方法，其中，所述分离纯化采用盐析、色谱层析、亲和层析、酸碱沉淀、膜分离中的一种或多种的组合，优选色谱层析与膜分离的组合或离子交换层析与膜分离的组合。
11、8根据项1所述的重组人xxiii型胶原蛋白在制备组织工程材料中的用途。
12、9.根据项8所述的用途，其中，所述组织工程材料选自止血海绵、皮下填充剂、人工骨、人工皮肤、口腔可吸收生物膜、骨植入剂、骨修复支架。
13、本专利技术的有益效果包括：
14、1)本专利技术所述的重组人xxiii型胶原蛋白的氨基酸序列与天然氨基酸序列为100％同源，无免疫原性。
15、2)本专利技术所述的重组人xxiii型胶原蛋白可在商业化的毕赤酵母表达系统中高产表达。该表达体系具有翻译后修饰，同时易于高效分泌表达，极少的内源性分泌蛋白便于后续的纯化。
16、3)本专利技术所述的重组人xxiii型胶原蛋白经验证具有与商品化的市售重组人胶原蛋白相当或更好的细胞粘附性，能够达到应用目的。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种重组人XXIII型胶原蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No:7所示。
2.一种重组人XXIII型胶原蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No:1～6中的任一个所示。
3.编码权利要求1或2所述的重组人XXIII型胶原蛋白的核酸。
4.包含权利要求3所述的核酸的表达载体。
5.导入了权利要求4所述的表达载体的宿主细胞；所述宿主细胞优选毕赤酵母。
6.一种权利要求1或2所述的重组人XXIII型胶原蛋白的生产方法，其包括培养权利要求4所述的宿主细胞，使其表达权利要求1所述的重组人XXIII型胶原蛋白，并收集包含所述重组人XXIII型胶原蛋白的培养物的步骤。
7.根据权利要求6所述的生产方法，其还包括将所述培养物进行分离纯化、从而获得纯化的所述重组人XXIII型胶原蛋白的步骤。
8.根据权利要求7所述的生产方法，其中，所述分离纯化采用盐析、色谱层析、亲和层析、酸碱沉淀、膜分离中的一种或多种的组合；优选色谱层析与膜分离的组合或离子交换层析与膜分离的组合。
9.根据权利要求1或2所述的重组
10.根据权利要求9所述的用途，其中，所述组织工程材料选自止血海绵、皮下填充剂、人工骨、人工皮肤、口腔可吸收生物膜、骨植入剂、骨修复支架。
...【技术特征摘要】
1.一种重组人xxiii型胶原蛋白，其氨基酸序列如seq id no:7所示。
2.一种重组人xxiii型胶原蛋白，其氨基酸序列如seq id no:1～6中的任一个所示。
3.编码权利要求1或2所述的重组人xxiii型胶原蛋白的核酸。
4.包含权利要求3所述的核酸的表达载体。
5.导入了权利要求4所述的表达载体的宿主细胞；所述宿主细胞优选毕赤酵母。
6.一种权利要求1或2所述的重组人xxiii型胶原蛋白的生产方法，其包括培养权利要求4所述的宿主细胞，使其表达权利要求1所述的重组人xxiii型胶原蛋白，并收集包含所述重组人xxiii...
【专利技术属性】
技术研发人员：范代娣，王鹏，宇文伟刚，杨柳青，张源镤，徐茹，刘琳，贾利平，严钰博，
申请(专利权)人：西安巨子生物基因技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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