【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于维生素检测，具体涉及一种血液中脂溶性维生素a、d、e含量的检测方法。
技术介绍
1、脂溶性维生素是溶于有机溶剂而不溶于水的一类维生素，如维生素a、25羟基维生素d2、25羟基维生素d3、维生素e是脂溶性维生素。目前用于测定脂溶性维生素的方法主要有荧光分析法、酶免疫法、液相色谱法及液相色谱-串联质谱法(lc-ms/ms法)等，其中液相色谱-串联质谱方法的优势在于其高精密度以及高灵敏度，可以检测出浓度较低的微量物质，且具有高性能和可靠性。在使用液相色谱-串联质谱技术检测待测物时，常用的前处理方法主要有液液萃取法、固液萃取法、蛋白沉淀方法和衍生化方法。
2、但液液萃取法和固液萃取法的前处理需要多次萃取、干燥、净化等步骤，需要大量人工操作，且液液萃取法难以实现高通量和自动化。固液萃取法主要依靠96孔固相支持液液萃取板(sle板)来完成，成本较高，不利于降本增效。而现有蛋白沉淀方法在进行样本稀释后25羟基维生素d2、25羟基维生素d3不能满足低性能仪器的灵敏度需求。此外，市场也有采用衍生化方法进行脂溶性维生素测定，但存在需要通过液液萃取方法先进行提取、干燥、衍生、吹干复溶再进行上机等操作，步骤繁琐，耗费时间，且衍生时间较长(如衍生反应需1小时)、衍生化条件苛刻(如70℃衍生化反应)，不利于推广和使用。因此，迫切需要开发出一种操作方便、快速的脂溶性维生素含量检测方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于针对上述问题，提出一种血液中脂溶性维生素a、d、e含量的检测方
2、为实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案为：
3、本专利技术提出的一种血液中脂溶性维生素a、d、e含量的检测方法，包括如下步骤：
4、s1、取血液样本每50μl中加入250μl的bht内标溶液；
5、s2、在加入bht内标溶液后的血液样本中加入20μl的七水硫酸锌溶液，依次进行首次混匀和离心处理；
6、s3、取离心处理后的上清液100μl进行浓缩干燥；
7、s4、在常温下向浓缩干燥后的上清液中加入50μl的ptad(4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮)乙腈溶液进行衍生化反应，然后加入淬灭剂终止衍生化反应，获得衍生样本；
8、s5、取离心处理后的上清液100μl加入衍生样本中进行再次混匀后检测。
9、优选地，bht内标溶液的体积比例为甲醇：乙腈：异丙醇＝(5-20)：(45-60)：(30-35)。
10、优选地，bht内标溶液的浓度为1mg/ml～5mg/ml，七水硫酸锌溶液的浓度为0.1mol/l～0.5mol/l。
11、优选地，ptad(4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮)乙腈溶液的浓度为0.05mg/ml～2mg/ml。
12、优选地，淬灭剂为乙酸铵溶液且浓度为0.1mol/l-0.5mol/l。
13、优选地，首次混匀为涡旋混匀且转速为1000rpm-2500rpm，时间为3min-10min；再次混匀为涡旋混匀且转速为300rpm-600rpm，时间为3min-10min；离心处理的转速为3000rpm-5000rpm，时间为5min-30min。
14、优选地，衍生化反应的时间为10min-40min。
15、优选地，浓缩干燥的浓缩温度为30℃～45℃，浓缩时间15min～60min。
16、与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
17、该方法以蛋白沉淀前处理结合衍生化技术为主，并通过优化衍生的时间、温度使衍生过程的条件达到较容易满足的效果，且能满足添加回收率准确度的要求，即既不会因为衍生时间较短衍生不完全而影响样本准确度，也不会因为衍生时间较长导致整体检测时间较长不利于推广，且也不会造成衍生温度较高导致的ptad易水解衍生效果不佳以及衍生温度太低准确度效果不佳的问题，与此同时也优化了衍生后的淬灭剂，即衍生后的样本中部分ptad会与维生素进行反应，因此在衍生过程中添加乙酸铵溶液(或还可为维生素c、甲酸铵、维生素a乙酸酯等)进行ptad淬灭，更利于维生素的检测，尤其是通过淬灭剂的筛选能够明显增强维生素a的响应，能够快速准确地完成脂溶性维生素a、d、e含量的检测，显著提高血液中25羟基维生素的检测灵敏度，同时又能保证维生素a和维生素e的准确度，使检测结果更加准确和稳定，有助于实现了对低性能仪器检测脂溶性维生素a、d、e的检测需求。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种血液中脂溶性维生素A、D、E含量的检测方法，其特征在于：所述血液中脂溶性维生素A、D、E含量的检测方法包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的血液中脂溶性维生素A、D、E含量的检测方法，其特征在于：所述BHT内标溶液的体积比例为甲醇：乙腈：异丙醇＝(5-20)：(45-60)：(30-35)。
3.如权利要求1所述的血液中脂溶性维生素A、D、E含量的检测方法，其特征在于：所述BHT内标溶液的浓度为1mg/mL～5mg/mL，所述七水硫酸锌溶液的浓度为0.1mol/L～0.5mol/L。
4.如权利要求1所述的血液中脂溶性维生素A、D、E含量的检测方法，其特征在于：所述PTAD(4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮)乙腈溶液的浓度为0.05mg/mL～2mg/mL。
5.如权利要求1所述的血液中脂溶性维生素A、D、E含量的检测方法，其特征在于：所述淬灭剂为乙酸铵溶液且浓度为0.1mol/L-0.5mol/L。
6.如权利要求1所述的血液中脂溶性维生素A、D、E含量的检测方法，其特征在于：所述首次混匀为涡旋混匀且
7.如权利要求1所述的血液中脂溶性维生素A、D、E含量的检测方法，其特征在于：所述衍生化反应的时间为10min-40min。
8.如权利要求1所述的血液中脂溶性维生素A、D、E含量的检测方法，其特征在于：所述浓缩干燥的浓缩温度为30℃～45℃，浓缩时间15min～60min。
...【技术特征摘要】
1.一种血液中脂溶性维生素a、d、e含量的检测方法，其特征在于：所述血液中脂溶性维生素a、d、e含量的检测方法包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的血液中脂溶性维生素a、d、e含量的检测方法，其特征在于：所述bht内标溶液的体积比例为甲醇：乙腈：异丙醇＝(5-20)：(45-60)：(30-35)。
3.如权利要求1所述的血液中脂溶性维生素a、d、e含量的检测方法，其特征在于：所述bht内标溶液的浓度为1mg/ml～5mg/ml，所述七水硫酸锌溶液的浓度为0.1mol/l～0.5mol/l。
4.如权利要求1所述的血液中脂溶性维生素a、d、e含量的检测方法，其特征在于：所述ptad(4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮)乙腈溶液的浓度为0.05mg/ml～2mg/ml。
5.如权利要求1所述的血液中脂...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈丽雪，何培培，张欢，马倩影，
申请(专利权)人：瑞莱谱杭州医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。