【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及农药检测领域，具体地，涉及一种提取生物样本中新烟碱类杀虫剂和/或其代谢产物的方法及应用。
技术介绍
1、新烟碱类杀虫剂具有独特的神经毒性作用模式，通过靶向昆虫神经细胞膜上的烟碱乙酰胆碱受体，导致神经信号传递障碍，最终导致昆虫死亡。新烟碱类杀虫剂因其广谱杀虫活性、对哺乳动物的低毒性、高功效和选择性而得到广泛应用，已逐渐取代有机磷酸盐和氨基甲酸酯等较旧的杀虫剂。
2、研究表明，孕鼠子宫内暴露于新烟碱会导致“母婴传递”效应，并可能导致其后代行为和脑功能的持久性损伤。可见暴露于新烟碱可能对哺乳动物有害，如生殖毒性、神经毒性、肝毒性、遗传毒性和内分泌干扰作用等。新烟碱类杀虫剂已在水、土壤、室内灰尘、食物甚至多个人类标本中被检测到其残留物。定期监测人体中新烟碱类杀虫剂及其代谢物，有助于严格控制新烟碱类杀虫剂以及减少残留风险。
3、目前，已有一些检测液体生物样本中新烟碱类杀虫剂的方法(如cn113009057a和cn115901992a)，但这些方法都不适用于固体生物样本的检测。现有技术(cn118393045a)已公开了头发或指甲中检测新烟碱及其代谢产物的方法，但是检测到的目标物较少。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中缺少既能检测液体生物样品又能检测固体生物样品中新烟碱类杀虫剂及其代谢物的方法的问题，为扩大固体生物样品中的目标物检出范围，本专利技术提供了一种提取生物样本中新烟碱类杀虫剂及其代谢产物的方法及应用。
2、本专利技术的一个目的是提
3、本专利技术的另一个目的是提供所述方法在检测新烟碱类杀虫剂和/或其代谢产物中的应用。
4、本专利技术的再一个目的是提供一种检测新烟碱类杀虫剂和/或其代谢产物的方法。
5、为了实现上述目的，本专利技术是通过以下方案予以实现的：
6、本专利技术首先通过液液萃取法，利用乙腈和二氯甲烷的混合溶剂提取新烟碱类杀虫剂及其代谢产物，然后加入甲酸使其离子化方便后续过柱，接着通过固相萃取去除杂质，减少了杂质的干扰，降低基质的影响，得到纯度较高的提取物，大大增加检测的灵敏度。色谱和质谱联用具有灵敏度高、准确度高、精密度高和重现性好等优点，本专利技术进一步通过液相色谱串联质谱进行样品检测，测定多种生物样品中新烟碱类杀虫剂及其代谢物的含量。
7、一种提取生物样本中新烟碱类杀虫剂和/或其代谢产物的方法，所述新烟碱类杀虫剂和/或其代谢产物包括啶虫脒、n-去甲基啶虫脒、吡虫啉、5-羟基吡虫啉、噻虫嗪、噻虫啉、噻虫啉酰胺、噻虫胺、氯噻啉和氟啶虫胺腈中的至少一种；
8、所述方法包括以下步骤：将生物样本和提取溶剂充分混匀，分层，收集最上层的溶液，得到上清；将所述上清与1～3％v/v甲酸水溶液混匀，得到初提产物；对所述初提产物进行固相萃取，得到含所述新烟碱类杀虫剂和/或其代谢产物的提取物；
9、所述提取溶剂包括乙腈和二氯甲烷，所述乙腈和所述二氯甲烷的体积比为(0.5～2):1。
10、优选地，所述生物样本为固体生物样本或液体生物样本。
11、更优选地，所述固体生物样本包括粪便样本。
12、进一步优选地，所述粪便样本为1岁以内婴儿的粪便样本。
13、进一步优选地，所述生物样本为固体生物样本，则先进行干燥，粉碎，再和提取溶剂充分混匀。
14、更进一步优选地，所述固体生物样本的干燥方法包括冻干。
15、更进一步优选地，所述固体生物样本的粉碎方法包括研磨。
16、更优选地，所述液体生物样本包括尿液样本。
17、优选地，所述乙腈和所述二氯甲烷的体积比为2:1。
18、优选地，将所述上清与2％v/v甲酸水溶液混匀。
19、优选地，将生物样本和提取溶剂充分混匀，分层，收集最上层的溶液得到上清1，收集剩余的溶液得到余液；将所述余液与所述提取溶剂充分混匀，分层，收集最上层的溶液得到上清2；合并上清1和上清2，得到混合上清；将所述混合上清与1～3％v/v甲酸水溶液混匀，得到初提产物；对所述初提产物进行固相萃取，得到含所述新烟碱类杀虫剂和/或其代谢产物的提取物。在此方案中，共进行2次液液萃取。
20、优选地，将生物样本和提取溶剂充分混匀，分层，收集最上层的溶液得到上清1，收集剩余的溶液得到余液1；将所述余液1与所述提取溶剂充分混匀，分层，收集最上层的溶液得到上清2，收集剩余的溶液得到余液2；将所述余液2与所述提取溶剂充分混匀，分层，收集最上层的溶液得到上清3；合并上清1～3，得到混合上清；将所述混合上清与1～3％v/v甲酸水溶液混匀，得到初提产物；对所述初提产物进行固相萃取，得到含所述新烟碱类杀虫剂和/或其代谢产物的提取物。在此方案中，共进行3次液液萃取。
21、优选地，所述将生物样本和提取溶剂充分混匀的方法包括涡旋和/或超声。
22、更优选地，所述涡旋的时间为0.5～2min。
23、进一步优选地，所述涡旋的时间为1min。
24、更优选地，所述超声的条件包括：频率30～50khz，功率80～120w，时间10～20min。
25、进一步优选地，所述超声的条件包括：频率40khz，功率100w，时间15min。
26、优选地，所述分层的方法包括离心。
27、更优选地，所述离心的条件包括：转速4500～5500rmp，时间5～15min。
28、进一步优选地，所述离心的条件包括：转速5000rmp，时间10min。
29、优选地，所述生物样本和提取溶剂的质量体积比为25mg：7.5ml。
30、优选地，所述上清与所述甲酸水溶液的体积比为1：(4～8)。
31、更优选地，所述上清与所述甲酸水溶液的体积比为1：6。
32、优选地，所述固相萃取包括以下步骤：将所述初提产物加入活化的固相萃取小柱，用洗柱液进行清洗，干燥，用甲醇洗脱，收集洗脱物；所述洗柱液包括甲醇、甲酸和水，所述甲醇、甲酸和水的体积比为10：2：(80～100)。
33、更优选地，所述甲醇、甲酸和水的体积比为10：2：88。
34、优选地，所述生物样本包括体液、粪便或毛发中的任意一种或几种。
35、任一所述的方法在检测新烟碱类杀虫剂和/或其代谢产物中的应用也应在本专利技术的保护范围之内。
36、一种检测新烟碱类杀虫剂和/或其代谢产物的方法，包括以下步骤：用所述提取生物样本中新烟碱类杀虫剂和/或其代谢产物的方法提取待测样本，得到提取物，之后用超高效液相色谱法检测所述提取物；
37、包括以下步骤：将待测样本和提取溶剂充分混匀，分层，收集最上层的溶液，得到上清；将所述上清与1～3％v/v甲酸水溶液混匀，得到初提产物；对所述初提产物进行固相萃取，得到含所述新烟碱类杀虫剂和/或其代谢产物的提取物；所述提取溶本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种提取生物样本中新烟碱类杀虫剂和/或其代谢产物的方法，其特征在于，所述新烟碱类杀虫剂和/或其代谢产物包括啶虫脒、N-去甲基啶虫脒、吡虫啉、5-羟基吡虫啉、噻虫嗪、噻虫啉、噻虫啉酰胺、噻虫胺、氯噻啉和氟啶虫胺腈中的至少一种；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物样本和提取溶剂的质量体积比为25mg：(2.5～7.5)mL。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述上清与所述甲酸水溶液的体积比为1：(4～8)。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固相萃取包括以下步骤：
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物样本为固体生物样本或液体生物样本。
6.权利要求1～5任一项所述的方法在检测新烟碱类杀虫剂和/或其代谢产物中的应用。
7.一种检测新烟碱类杀虫剂和/或其代谢产物的方法，其特征在于，包括以下步骤：用权利要求1所述的方法提取待测样本，得到提取物，之后用超高效液相色谱法检测所述提取物。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，权利要求1所述的方法中，将内
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述内标物包括同位素标记的啶虫脒、同位素标记的N-去甲基啶虫脒、同位素标记的吡虫啉、同位素标记的5-羟基吡虫啉、同位素标记的噻虫嗪、同位素标记的噻虫啉、同位素标记的噻虫啉酰胺、同位素标记的噻虫胺、同位素标记的氯噻啉和同位素标记的氟啶虫胺腈。
10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述超高效液相色谱的色谱条件包括：用C18色谱柱；以0.1％v/v甲酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱程序中，流动相B的体积百分比变化为：0～0.6min，流动相B为95％；0.6～4.5min，流动相B为95％～1％；4.5～5.5min，流动相B为1％；5.5～6min，流动相B为1％～95％；6～8min，流动相B为95％。
...【技术特征摘要】
1.一种提取生物样本中新烟碱类杀虫剂和/或其代谢产物的方法，其特征在于，所述新烟碱类杀虫剂和/或其代谢产物包括啶虫脒、n-去甲基啶虫脒、吡虫啉、5-羟基吡虫啉、噻虫嗪、噻虫啉、噻虫啉酰胺、噻虫胺、氯噻啉和氟啶虫胺腈中的至少一种；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物样本和提取溶剂的质量体积比为25mg：(2.5～7.5)ml。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述上清与所述甲酸水溶液的体积比为1：(4～8)。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固相萃取包括以下步骤：
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物样本为固体生物样本或液体生物样本。
6.权利要求1～5任一项所述的方法在检测新烟碱类杀虫剂和/或其代谢产物中的应用。
7.一种检测新烟碱类杀虫剂和/或其代谢产物的方法，其特征在于，包括以下步骤：用权利要求1所述的方法提取待测样本，得到提取物，之后用超...
【专利技术属性】
技术研发人员：李晶，唐子雄，黄一鹤，朱珍妮，姜彦岐，刘付宇杰，魏鑫，银仁莉，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：
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