【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医学检验，具体来说，涉及一种人血中泽布替尼和伊布替尼的检测方法。
技术介绍
1、泽布替尼和伊布替尼是一类布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂，临床应用广泛。该类药物口服吸收差异大，可受食物影响，主要通过肝脏cyp3a酶代谢，与强cyp3a抑制剂同时服用时，其体内暴露量可大幅增加，导致患者出现剂量相关的不良反应，如出血、高血压等。此外，患者依从性差亦会导致其体内暴露量异常。这些均需通过开展治疗药物监测来评估患者体内真实药物暴露量，从而对患者进行个体化治疗，提高临床疗效，减少不良反应。
2、现阶段已报道的药物检测方法操作复杂，而且多个药物采用同一内标，无法避免基质效应带来的干扰，此外，还存在线性范围不适宜，方法残留效应明显等缺陷，从而导致无法快速、精准地确定患者体内药物的暴露量。
技术实现思路
1、本专利技术的技术任务是针对以上不足，提供一种人血中泽布替尼和伊布替尼的检测方法，简化了方法中的样本处理操作，加入内标工作液可同时完成内标加入和蛋白沉淀操作，上机检测时间仅需3min，适合大批量的临床样品分析；采用2个同位素内标，可有效降低基质效应干扰；设置6个浓度水平的标准曲线样本和3个浓度水平的质控样本，合理覆盖了临床样本中泽布替尼和伊布替尼的实际浓度范围。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、一种人血中泽布替尼和伊布替尼的检测方法，包括：
4、使用泽布替尼和伊布替尼对照品，配置混合储备液，逐级稀释制备标准曲线工作液，使用标
5、使用泽布替尼-d5和伊布替尼-d5对照品配置混合内标工作液，使用混合内标工作液对标曲样本和待测样本进行预处理；
6、使用电喷雾离子源和多反应监测模式对预处理后的待测样本和标曲样本进行质谱采集，分别得到待测样本信号强度和标曲样本信号强度；
7、根据所述标曲样本信号强度和所述标曲样本的理论浓度进行线性回归，得到回归方程；
8、根据所述回归方程和所述待测样本信号强度计算得到所述待测样本中泽布替尼和伊布替尼的浓度。
9、在一些实施例中，使用泽布替尼和伊布替尼对照品，配置混合储备液，逐级稀释制备标准曲线工作液，使用标准曲线工作液制备标曲样本，包括：
10、将泽布替尼对照品和伊布替尼对照品与标曲溶剂混合，得到混合标曲储备液，其中，所述标曲溶剂为甲醇水溶液或乙腈水溶液，优选为90％的甲醇水溶液；将所述混合标曲储备液进行梯度稀释，得到标曲工作液，并向所述标曲工作液中加入空白血浆，得到标曲样本，其中，所述标曲工作液和所述空白样血浆的体积比为1:5～20，优选为1:9。
11、在一些实施例中，所述使用泽布替尼-d5和伊布替尼-d5对照品配置混合内标工作液，并使用所述混合内标工作液对待测样本进行预处理，包括：分别将泽布替尼-d5和伊布替尼-d5对照品与内标储备溶剂混合，得到泽布替尼-d5储备液和伊布替尼-d5储备液，其中，所述内标储备溶剂为甲醇水溶液或乙腈水溶液，优选为90％的甲醇水溶液；将泽布替尼-d5储备液和伊布替尼-d5储备液与内标工作溶剂混合，得到混合内标工作液，其中，所述内标工作溶剂为甲醇、乙腈、甲酸中的一种或多种，优选为0.05％甲酸的乙腈，所述混合内标工作液浓度为10-100ng/ml，优选为20ng/ml；将所述混合内标工作液与待测样本混合，离心取上清，并使用稀释剂将所述上清进行稀释，得到预处理后待测样本，其中，所述稀释剂为甲酸水溶液、乙腈水溶液或其混合液，优选为含0.1％甲酸和38％乙腈的水溶液。
12、在一些实施例中，所述质谱采集中，色谱柱填料为c18，粒径为1.7-5μm，优选为1.7μm；进样体积为2-10μl，优选为2μl；柱温为35-45℃，优选为40℃；毛细管电压为0.5～2.0kv，优选为1.0kv；脱溶剂气温度400～500℃，优选为450℃；脱溶剂气流量为600～800l/hr，优选为800l/hr；锥孔气流速为40～60l/hr，优选为60l/hr。
13、在一些实施例中，所述质谱采集中，有机流动相为含甲酸的乙腈溶液，水系流动相为甲酸和甲酸铵的水溶液，其中，所述甲酸体积分数为0.01％～1％，优选为0.1％，甲酸铵摩尔浓度为5～20mm，优选为10mm；洗脱流速为0.3～0.5ml/min，优选为0.4ml/min。
14、在一些实施例中，所述质谱采集中，梯度洗脱条件如下：0.0min，水系流动相：62％；0.5min，水系流动相：62％；1.0min，水系流动相：40％；2.0min，水系流动相：28％；2.5min，水系流动相：0％；3.0min，水系流动相：62％。
15、在一些实施例中，所述方法还包括在质谱采集进样后，使用洗针液对进样针进行清洗，其中，所述洗针液为含氨水的甲醇或乙腈水溶液，优选为含0.5％体积氨水和49.5％体积乙腈的水溶液。
16、在一些实施例中，所述标曲样本中泽布替尼和伊布替尼的理论浓度依次为500、250、50、25、5、2.5ng/ml。
17、在一些实施例中，所述方法还包括质控检验，其中，所述质控检验的质控样本中，泽布替尼和伊布替尼的理论浓度依次均为400、40、4ng/ml。
18、在一些实施例中，所述方法检测泽布替尼和伊布替尼浓度的范围均为2.5-500ng/ml。
19、与现有技术相比，本专利技术的优点和积极效果在于：
20、1、通过设置6个浓度水平的标准曲线样本和3个浓度水平的质控样本，合理覆盖了临床样本中泽布替尼和伊布替尼的实际浓度范围；
21、2、采用2个同位素内标，定量方法可选单内标或者双内标方案，可有效降低基质效应干扰，保证检测结果准确性；
22、3、采用特殊的洗针液，减少高浓度样本带来的残留；
23、4、简化样本处理操作，混合内标工作液可一步完成添加内标和蛋白沉淀操作，且上机检测时间仅需3min，适合大批量的临床样品分析。
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1.一种人血中泽布替尼和伊布替尼的检测方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的一种人血中泽布替尼和伊布替尼的检测方法，其特征在于，使用泽布替尼和伊布替尼对照品，配置混合储备液，逐级稀释制备标准曲线工作液，使用标准曲线工作液制备标曲样本，包括：
3.根据权利要求1所述的一种人血中泽布替尼和伊布替尼的检测方法，其特征在于，使用泽布替尼-D5和伊布替尼-D5对照品配置混合内标工作液，使用混合内标工作液对标曲样本和待测样本进行预处理，包括：
4.根据权利要求1所述的一种人血中泽布替尼和伊布替尼的检测方法，其特征在于，所述质谱采集中，色谱柱填料为C18，粒径为1.7-5μm，优选为1.7μm；进样体积为2-10μL，优选为2μL；柱温为35-45℃，优选为40℃；毛细管电压为0.5～2.0kV，优选为1.0kV；脱溶剂气温度400～500℃，优选为450℃；脱溶剂气流量为600～800L/Hr，优选为800L/Hr；锥孔气流速为40～60L/Hr，优选为60L/Hr。
5.根据权利要求1所述的一种人血中泽布替尼和伊布替尼的检测方法，
6.根据权利要求5所述的一种人血中泽布替尼和伊布替尼的检测方法，其特征在于，所述质谱采集中，梯度洗脱条件如下：
7.根据权利要求3所述的一种人血中泽布替尼和伊布替尼的检测方法，其特征在于，所述方法还包括在质谱采集进样后，使用洗针液对进样针进行清洗，其中，所述洗针液为含氨水的甲醇或乙腈水溶液，优选为含0.5％体积氨水和49.5％体积乙腈的水溶液。
8.根据权利要求1所述的一种人血中泽布替尼和伊布替尼的检测方法，其特征在于，所述标曲样本中泽布替尼和伊布替尼的理论浓度依次为500、250、50、25、5、2.5ng/mL。
9.根据权利要求1所述的一种人血中泽布替尼和伊布替尼的检测方法，其特征在于，所述方法还包括质控检验，其中，所述质控检验的质控样本中，泽布替尼和伊布替尼的理论浓度依次均为400、40、4ng/mL。
10.根据权利要求1-9任一项所述的一种人血中泽布替尼和伊布替尼的检测方法，其特征在于，所述方法检测泽布替尼和伊布替尼浓度的范围均为2.5-500ng/mL。
...【技术特征摘要】
1.一种人血中泽布替尼和伊布替尼的检测方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的一种人血中泽布替尼和伊布替尼的检测方法，其特征在于，使用泽布替尼和伊布替尼对照品，配置混合储备液，逐级稀释制备标准曲线工作液，使用标准曲线工作液制备标曲样本，包括：
3.根据权利要求1所述的一种人血中泽布替尼和伊布替尼的检测方法，其特征在于，使用泽布替尼-d5和伊布替尼-d5对照品配置混合内标工作液，使用混合内标工作液对标曲样本和待测样本进行预处理，包括：
4.根据权利要求1所述的一种人血中泽布替尼和伊布替尼的检测方法，其特征在于，所述质谱采集中，色谱柱填料为c18，粒径为1.7-5μm，优选为1.7μm；进样体积为2-10μl，优选为2μl；柱温为35-45℃，优选为40℃；毛细管电压为0.5～2.0kv，优选为1.0kv；脱溶剂气温度400～500℃，优选为450℃；脱溶剂气流量为600～800l/hr，优选为800l/hr；锥孔气流速为40～60l/hr，优选为60l/hr。
5.根据权利要求1所述的一种人血中泽布替尼和伊布替尼的检测方法，其特征在于，所述质谱采集中，有机流动相为含甲酸的乙腈溶液，水系流动相为甲酸和甲酸铵的水溶液，其中，所述甲...
【专利技术属性】
技术研发人员：毕重文，袁恒杰，胡祎明，蔡世娇，李正翔，何庆，
申请(专利权)人：天津医科大学总医院，
类型：发明
国别省市：
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