【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于亲和色谱科学，具体涉及一种5-htr2a细胞膜色谱固相微萃取材料及其制备方法和在非典型抗精神病药物tdm中的应用。
技术介绍
1、治疗药物监测（therapeutic drug monitoring，简称tdm）是指在临床进行药物治疗过程中，观察药物疗效的同时，定时采集患者的血液（有时采集尿液、唾液等液体），测定其中的药物浓度，探讨药物的体内吸收及代谢过程，以便根据患者的具体情况，制定个体化的给药方案。非典型抗精神病药物（又称第二代抗精神病药，atypical antipsychotics，aas），包括氯氮平（clozapine）、奥氮平、利培酮、喹硫平、阿立哌唑以及齐拉西酮等药物。这些药物与传统抗精神病药物相比，具有作用谱广、疗效好和安全性好等优点，能够减缓锥体外系反应，提高患者的生活质量。非典型抗精神病药物的主要药理作用是五羟色胺2a（5-ht2a）和多巴胺d2受体阻断，一般在临床上认为其作用不仅具有抗幻觉妄想的作用，还会因为有激活作用，从而有效地改善精神分裂症患者的阴性症状。因此，能够有效进行非典型抗精神病药物的tdm对于非典型抗精神病患者的治疗具有重要意义。
2、目前，非典型抗精神病药物的tdm方式主要为高效液相色谱配备质谱检测器（lc-ms），特别是串联质谱检测器（lc-ms/ms）。但不足的是，传统的固相萃取材料大多只能根据极性强弱分离不同性质的组分，与目标组分的相互作用方式主要为非特异性吸附，导致传统的固相萃取方式寿命和特异性不高。因此，需要一种高稳定性、专属性强的生物亲和固相萃取材料。
3、细胞膜色谱（cell membrane chromatography，cmc）是将细胞膜固定至载体上，制成细胞膜固定相（cell membrane stationary phase，cmsp），利用色谱技术研究流动相中药物与受体相互作用规律，同时也是一种集色谱分离和活性识别于一体的技术，在复杂体系中的活性成分筛选中也具有独特的优势。细胞膜色谱固定相具有特异性筛选目标物质的能力，原理是通过目标物质可以与相关受体发生特异性受体与配体相互作用。目前已经在中药活性成分筛选以及配体-受体相互作用研究上面有十分广泛的应用，但是还未见将其用于非典型抗精神病药物tdm的报道。
技术实现思路
1、为了克服上述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种5-htr2a细胞膜色谱固相微萃取材料及其制备方法和在非典型抗精神病药物tdm中的应用，用以解决现有的非典型抗精神病药物的tdm方法准确性和灵敏度不高的问题。
2、为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：
3、本专利技术的第一个方面，公开了一种5-htr2a细胞膜色谱固相微萃取材料，由5-htr2a蛋白c端或n端融合snap-tag的高表达细胞膜固定在苄基鸟嘌呤修饰的硅胶上制得。
4、本专利技术的第二个方面，公开了上述一种5-htr2a细胞膜色谱固相微萃取材料的制备方法，将苄基鸟嘌呤修饰的硅胶与5-htr2a蛋白c端或n端融合snap-tag的高表达细胞膜悬液混合，得到5-htr2a细胞膜色谱固相微萃取材料。
5、优选地，苄基鸟嘌呤修饰的硅胶与5-htr2a蛋白c端或n端融合snap-tag的高表达细胞膜的质量比为125∶4。
6、优选地，苄基鸟嘌呤修饰的硅胶的制备方法为：将三聚氯氰硅胶与苄基鸟嘌呤混合，得到苄基鸟嘌呤修饰的硅胶。
7、进一步优选地，制备苄基鸟嘌呤修饰的硅胶时，以dmf作为溶剂。
8、优选地，将三聚氯氰硅胶与苄基鸟嘌呤混合，过滤，用dmf清洗，用无水乙醇重复清洗，滤饼烘干，得到苄基鸟嘌呤修饰的硅胶。
9、优选地，5-htr2a蛋白c端或n端融合snap-tag的高表达细胞膜悬液的制备方法为：将5-htr2a蛋白c端或n端融合snap-tag的过表达稳转细胞沉淀破碎、离心，取上清，再次离心，得细胞膜沉淀；将细胞膜沉淀与超纯水混合，得到5-htr2a蛋白c端或n端融合snap-tag的高表达细胞膜悬液。
10、优选地，5-htr2a蛋白c端或n端融合snap-tag的过表达稳转细胞的制备方法为：将含有5-htr2a蛋白c端或n端融合snap-tag的载体质粒通过慢病毒包载后，转染至hek293t细胞中，利用质粒中的抗性基因对转染细胞进行筛选，得到5-htr2a蛋白c端或n端融合snap-tag的过表达稳转细胞。
11、优选地，细胞沉淀破碎、离心的方式为：将细胞沉淀加入tris-hcl混悬置于冰上，用细胞破碎仪破碎，4℃，1000 × g离心10 min，上清转移后在4℃，12000 × g离心20 min。
12、优选地，将苄基鸟嘌呤修饰的硅胶与5-htr2a蛋白c端或n端融合snap-tag的高表达细胞膜悬液混合后，37℃，1500 rpm振荡30 min，pbs反复清洗三次，得到5-htr2a细胞膜色谱固相微萃取材料。
13、本专利技术的第三个方面，公开了上述5-htr2a细胞膜色谱固相微萃取材料在非典型抗精神病药物筛选识别中的应用。
14、本专利技术的第四个方面，公开了上述5-htr2a细胞膜色谱固相微萃取材料在非典型抗精神病药物目标成分预浓缩中的应用。
15、优选地，所述非典型抗精神病药物目标成分预浓缩后，联合hplc在非典型抗精神病药物tdm中的应用。
16、本专利技术的第五个方面，公开了一种监测非典型抗精神病药物血药浓度的方法，将非典型抗精神病药物溶液注入上述5-htr2a细胞膜色谱固相微萃取材料中，洗脱，离心取上清，过滤，hplc测定洗脱液，计算得到血液中非典型抗精神病药物的血药浓度。
17、优选地，非典型抗精神病药物与5-htr2a细胞膜色谱固相微萃取材料的质量比为4∶25。
18、优选地，洗脱时选择体积比为1∶1的乙腈和0.1%三乙胺水溶液作为洗脱液。
19、优选地，非典型抗精神病药物的液相检测条件：采用diamonsil c18，150 × 4.6mm i.d.，5 μm色谱柱检测；流动相条件设置为：70% a相-30%b等度洗脱，a相为0.1%三乙胺水溶液，b相为乙腈；流速为0.8 ml/min；检测波长为215 nm。
20、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
21、本专利技术提供的一种5-htr2a细胞膜色谱固相微萃取材料，选择5-htr2a蛋白作为非典型抗精神病药物的目标受体，将苄基鸟嘌呤（benzylguanine，bg）键合到硅胶上，让其与5-htr2a蛋白c端或n端融合snap-tag的高表达细胞膜发生特异专一反应，在硫醚键共价结合作用下，snap-tag能够特异性地与苄基鸟嘌呤发生共价键合，从而使5-htr2a蛋白定向共价固定在修饰硅胶表面。该5-htr2a细胞膜色谱固相微萃取材料具有：1）共价本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种5-HTR2A细胞膜色谱固相微萃取材料，其特征在于，由5-HTR2A蛋白C端或N端融合SNAP-Tag的高表达细胞膜固定在苄基鸟嘌呤修饰的硅胶上制得。
2.权利要求1所述的一种5-HTR2A细胞膜色谱固相微萃取材料的制备方法，其特征在于，将苄基鸟嘌呤修饰的硅胶与5-HTR2A蛋白C端或N端融合SNAP-Tag的高表达细胞膜悬液混合，得到5-HTR2A细胞膜色谱固相微萃取材料。
3.根据权利要求2所述的一种5-HTR2A细胞膜色谱固相微萃取材料的制备方法，其特征在于，苄基鸟嘌呤修饰的硅胶与5-HTR2A蛋白C端或N端融合SNAP-Tag的高表达细胞膜的质量比为125∶4。
4.根据权利要求2或3所述的一种5-HTR2A细胞膜色谱固相微萃取材料的制备方法，其特征在于，苄基鸟嘌呤修饰的硅胶的制备方法为：将三聚氯氰硅胶与苄基鸟嘌呤混合，得到苄基鸟嘌呤修饰的硅胶。
5.根据权利要求2所述的一种5-HTR2A细胞膜色谱固相微萃取材料的制备方法，其特征在于，5-HTR2A蛋白C端或N端融合SNAP-Tag的高表达细胞膜悬液的制备方法为：将
6.权利要求1所述的5-HTR2A细胞膜色谱固相微萃取材料在非典型抗精神病药物筛选识别中的应用。
7.权利要求1所述的5-HTR2A细胞膜色谱固相微萃取材料在非典型抗精神病药物目标成分预浓缩中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述非典型抗精神病药物目标成分预浓缩后，联合HPLC在非典型抗精神病药物TDM中的应用。
9.一种监测非典型抗精神病药物血药浓度的方法，其特征在于，将非典型抗精神病药物溶液注入权利要求1所述的5-HTR2A细胞膜色谱固相微萃取材料中，洗脱，离心取上清，过滤，HPLC测定洗脱液，计算得到血液中非典型抗精神病药物的血药浓度。
10.根据权利要求9所述的一种监测非典型抗精神病药物血药浓度的方法，其特征在于，非典型抗精神病药物与5-HTR2A细胞膜色谱固相微萃取材料的质量比为4∶25。
...【技术特征摘要】
1.一种5-htr2a细胞膜色谱固相微萃取材料，其特征在于，由5-htr2a蛋白c端或n端融合snap-tag的高表达细胞膜固定在苄基鸟嘌呤修饰的硅胶上制得。
2.权利要求1所述的一种5-htr2a细胞膜色谱固相微萃取材料的制备方法，其特征在于，将苄基鸟嘌呤修饰的硅胶与5-htr2a蛋白c端或n端融合snap-tag的高表达细胞膜悬液混合，得到5-htr2a细胞膜色谱固相微萃取材料。
3.根据权利要求2所述的一种5-htr2a细胞膜色谱固相微萃取材料的制备方法，其特征在于，苄基鸟嘌呤修饰的硅胶与5-htr2a蛋白c端或n端融合snap-tag的高表达细胞膜的质量比为125∶4。
4.根据权利要求2或3所述的一种5-htr2a细胞膜色谱固相微萃取材料的制备方法，其特征在于，苄基鸟嘌呤修饰的硅胶的制备方法为：将三聚氯氰硅胶与苄基鸟嘌呤混合，得到苄基鸟嘌呤修饰的硅胶。
5.根据权利要求2所述的一种5-htr2a细胞膜色谱固相微萃取材料的制备方法，其特征在于，5-htr2a蛋白c端或n端融合snap-tag的高表达细胞膜悬液的制备方法为：将5...
【专利技术属性】
技术研发人员：吕艳妮，贺浪冲，韩省力，周童培，张涛，
申请(专利权)人：西安交通大学，
类型：发明
国别省市：
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