【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物检测，具体地，涉及用于特异性检测河流弧菌的分子靶点、检测方法和应用。
技术介绍
1、河流弧菌是一种嗜盐的革兰氏阴性细菌，具有直至轻微弯曲的杆状细胞形态，可通过极性鞭毛运动。河流弧菌是霍乱样血性腹泻的重要原因，并在发达国家和不发达国家，特别是卫生条件差的地区最易引起伤口感染和原发性败血症。该菌于1975年在一名腹泻患者中首次被鉴定为f群弧菌，后来被命名为河流弧菌。河流弧菌在海洋动物中的检出频率非常高，比如牡蛎、青蟹和零售鱼类等。河流弧菌自然存在于温暖、含盐和微咸的水中，可在9～31℃的温度下存活，但当水温升至18℃以上时会大量繁殖，其中当温度和盐度因素有利于细菌增殖时，大多数临床疾病都会出现河流弧菌感染的季节性模式。一般而言，该病的临床指征包括轻至中度脱水、呕吐、发热、腹痛和腹泻。在中国浙江省，河流弧菌被鉴定为急性腹泻病例中的第二大病原体，但仅次于副溶血弧菌。因此，这种病原体不仅成为一个重要的食品安全问题，而且也是一个严重的医疗和公共健康问题。
2、目前，对于河流弧菌的检测，国标方法仍采用的是传统平板培养法。具有成本低、特异性强等优点，但同时平板培养计数法也有一些缺点，例如培养时间长、对操作人员和操作过程要求较为严格等。为了弥补平板检测法的不足，基于核酸扩增的分子学检测方法已经应用于食品中河流弧菌的检测中。
3、基于核酸扩增的分子学检测方法的特异性与灵敏度主要取决于相应检测靶点的选择。目前，pcr检测方法是最常用的分子学检测方法之一，其引物是根据目标细菌基因组dna特异性保守序列(检测靶
技术实现思路
1、为克服现有技术中存在的上述缺陷与不足，本专利技术提供用于特异性检测河流弧菌的分子靶点、检测方法和应用。
2、本专利技术的第一个目的是提供核苷酸序列如seq id no：1所示的基因片段或核苷酸序列如seq id no：2所示的基因片段在作为河流弧菌的检测靶点中的应用。
3、本专利技术的第二个目的是提供核苷酸序列如seq id no：1所示的基因片段或核苷酸序列如seq id no：2所示的基因片段在制备河流弧菌的检测产品中的应用。
4、本专利技术的第三个目的是提供检测核苷酸序列如seq id no：1所示的基因片段或核苷酸序列如seq id no：2所示的基因片段的试剂在制备河流弧菌的检测产品中的应用。
5、本专利技术的第四个目的是提供一种用于检测核苷酸序列如seq id no：1所示的基因片段的引物组。
6、本专利技术的第五个目的是提供一种用于检测核苷酸序列如seq id no：2所示的基因片段的引物组。
7、本专利技术的第六个目的是提供一种用于检测河流弧菌的试剂盒。
8、本专利技术的第七个目的是提供一种检测河流弧菌的方法。
9、因此，本专利技术要求保护以下内容：
10、核苷酸序列如seq id no：1所示的基因片段或核苷酸序列如seq id no：2所示的基因片段在作为河流弧菌的检测靶点中的应用。
11、核苷酸序列如seq id no：1所示的基因片段或核苷酸序列如seq id no：2所示的基因片段在制备河流弧菌的检测产品中的应用。
12、检测核苷酸序列如seq id no：1所示的基因片段或核苷酸序列如seq id no：2所示的基因片段的试剂在制备河流弧菌的检测产品中的应用。
13、优选地，所述检测核苷酸序列如seq id no：1所示的基因片段的试剂为核苷酸序列如seq id no：3～4所示的引物；
14、所述检测核苷酸序列如seq id no：2所示的基因片段的试剂为核苷酸序列如seqid no：5～6所示的引物。
15、一种用于检测核苷酸序列如seq id no：1所示的基因片段的引物组，所述引物组由正向引物f1和反向引物r1组成，所述正向引物f1的核苷酸序列如seq id no：3所示，所述反向引物r1的核苷酸序列如seq id no：4所示。
16、一种用于检测核苷酸序列如seq id no：2所示的基因片段的引物组，所述引物组由正向引物f2和反向引物r2组成，所述正向引物f2的核苷酸序列如seq id no：5所示，所述反向引物r2的核苷酸序列如seq id no：6所示。
17、一种用于检测河流弧菌的试剂盒，所述试剂盒包含检测核苷酸序列如seq id no：1所示的基因片段或核苷酸序列如seq id no：2所示的基因片段的试剂，所述检测以非疾病治疗诊断为目的。
18、优选地，所述试剂为上述用于检测核苷酸序列如seq id no：1所示的基因片段的引物组或用于检测核苷酸序列如seq id no：2所示的基因片段的引物组。
19、优选地，所述试剂盒还含有pcr反应试剂、阳性对照参考品和/或阴性对照参考品。
20、更优选地，所述阳性对照参考品为含有核苷酸序列如sed id no：1所示的基因片段或核苷酸序列如seq id no：2所示的基因片段的质粒dna，所述阴性对照参考品为ddh2o。
21、一种检测河流弧菌的方法，利用任一上述的试剂盒对待测样品进行检测，所述检测以非疾病治疗诊断为目的。
22、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
23、本专利技术提供了用于特异性检测河流弧菌的分子靶点、检测方法和应用，本专利技术以核苷酸序列为seq id no：1所示的基因片段或核苷酸序列为seq id no：2所示的基因片段为分子靶标，设计出能够特异性检测河流弧菌的引物组。本专利技术为河流弧菌的检测提供新的分子靶标，同时建立的检测方法能够快速鉴定待测样本中的河流弧菌，在河流弧菌的检测和防治中具有广阔的应用前景。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的基因片段或核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示的基因片段在作为河流弧菌的检测靶点中的应用。
2.核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的基因片段或核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示的基因片段在制备河流弧菌的检测产品中的应用。
3.检测核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的基因片段或核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示的基因片段的试剂在制备河流弧菌的检测产品中的应用。
4.一种用于检测核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的基因片段的引物组，其特征在于，所述引物组由正向引物F1和反向引物R1组成，所述正向引物F1的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，所述反向引物R1的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。
5.一种用于检测核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示的基因片段的引物组，其特征在于，所述引物组由正向引物F2和反向引物R2组成，所述正向引物F2的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示，所述反向引物R2的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示。
6.一种用于检
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂为权利要求4所述的引物组或权利要求5所述的引物组。
8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还含有PCR反应试剂、阳性对照参考品和/或阴性对照参考品。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照参考品为含有核苷酸序列如SED ID NO：1所示的基因片段或核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示的基因片段的质粒DNA，所述阴性对照参考品为ddH2O。
10.一种检测河流弧菌的方法，其特征在于，利用权利要求6～9任一所述的试剂盒对待测样品进行检测，所述检测以非疾病治疗诊断为目的。
...【技术特征摘要】
1.核苷酸序列如seq id no：1所示的基因片段或核苷酸序列如seq id no：2所示的基因片段在作为河流弧菌的检测靶点中的应用。
2.核苷酸序列如seq id no：1所示的基因片段或核苷酸序列如seq id no：2所示的基因片段在制备河流弧菌的检测产品中的应用。
3.检测核苷酸序列如seq id no：1所示的基因片段或核苷酸序列如seq id no：2所示的基因片段的试剂在制备河流弧菌的检测产品中的应用。
4.一种用于检测核苷酸序列如seq id no：1所示的基因片段的引物组，其特征在于，所述引物组由正向引物f1和反向引物r1组成，所述正向引物f1的核苷酸序列如seq id no：3所示，所述反向引物r1的核苷酸序列如seq id no：4所示。
5.一种用于检测核苷酸序列如seq id no：2所示的基因片段的引物组，其特征在于，所述引物组由正向引物f2和反向引物r2组成，所述正向引物f2的核苷酸序列如seq id n...
【专利技术属性】
技术研发人员：方彰胜，狄慧玲，王昀，陈泊全，彭燕，张知心，董育仪，
申请(专利权)人：广东生态工程职业学院，
类型：发明
国别省市：
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