本发明专利技术公开了一种血红蛋白的检测方法，包括：取0.1‑0.2mmol/L(6,5)‑SWCNTs溶液，加入到截留分子量为100kDa的超滤离心管中，离心1‑10min，弃去滤过液；在截留物中加入与滤过液同体积的SDS溶液，重复离心6‑15次；再将溶液超声分散0.2‑1h，并离心2‑15min；在DPPE‑mPEG5000溶液中，加入上述上清液，充分混合后静置过夜；再分别使用截留分子量为10kDa和100kDa的超滤离心管对依次上述混合溶液进行离心过滤，取上述上清液，加入待测血红蛋白溶液，混合均匀后静置孵育10S以上；以水作为空白对照，进行UV‑Vis‑NIR吸收光谱和近红外荧光光谱测定；血红蛋白标准品以配制成不同浓度的储备液，绘制标准曲线；根据标准曲线计算样品中血红蛋白的浓度。本发明专利技术操作简单，时间短，检测成本低。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及血红蛋白检测领域，具体涉及一种血红蛋白的检测方法。
技术介绍
1、血红蛋白是一类存在于原核和真核细胞中的以血红素为辅基的含铁金属蛋白，在生物体内具有运输和储存氧、调节胞内ph值、调控生理代谢等诸多重要功能。近年来，以微生物细胞工厂为平台来合成不同来源的血红蛋白已经逐步成为人们的研究热点。目前文献/专利中报道较多的是检测全血液，血清、血浆、尿液中的血红蛋白的含量。但是目前的检测方法较为繁琐，或者是成本较高。
2、血红蛋白(hemoglobin，hb)是红细胞中一种重要的金属蛋白，由两个α亚基和两个β亚基构成，每个亚基包含一条肽链和一个血红素。四条肽链堆积折叠形成的球形四聚体蛋白称为珠蛋白。血红素又称亚铁原卟啉，是由四个吡咯基组成的环状分子，环中心与一个亚铁离子相结合。在生物体中，血红蛋白具有运输氧气和二氧化碳、维持血液酸碱平衡等多种功能，其含量是诊断贫血症的重要指标。正常成年男性血液中hb的浓度为120～165g/l，成年女性为110～150g/l，儿童为120～140g/l，低于该浓度将会导致贫血。据统计，全世界大约有20亿人患有贫血症。另外，血红蛋白的含量异常还与许多其他疾病有关，如白血病、阻塞性肺气肿、先天性心脏病和癌症等。因此，在临床诊断中准确测定血红蛋白的含量对评估人体健康状况具有重要意义。目前，血红蛋白检测的常见方法有氰化血红蛋白法、比色法、荧光法、液相色谱法和电化学法，但是这些方法大多存在操作复杂、耗时长、需要昂贵的试剂和仪器等缺陷。
技术实现思路
1、因此，本专利技术要解决的技术问题是，提供一种成本低，操作便捷，准确性高的血红蛋白的检测方法。
2、本专利技术的技术方案是，一种血红蛋白的检测方法，包括如下步骤：
3、(1)取0.1-0.2mmol/l(6,5)-swcnts溶液，加入到截留分子量为100kda的超滤离心管中，室温，离心力400-600g条件下离心1-10min，弃去滤过液；
4、(2)在截留物中加入与上述滤过液同体积的浓度为0.1-3wt％的sds溶液，重复离心6-15次；离心完成后，将溶液超声分散0.2-1h，并在室温，离心力为19000g-23000g条件下离心2-15min；
5、(3)在0.5-2mg/ml的dppe-mpeg5000溶液中，加入上述sds分散的(6,5)-swcnts的上清液，体积比为1-2:1-5，充分混合后静置过夜；
6、(4)在室温、离心力为900g-1100g条件下，分别使用截留分子量为10kda和100kda的超滤离心管对依次上述混合溶液进行离心过滤，去除多余的表面活性剂和多余的dppe-mpeg5000；
7、(5)取上述dppe-mpeg5000-(6,5)上清液，加入终浓度为0.5-2μm的血红蛋白(hb)溶液，混合均匀后静置孵育10s以上；以水作为空白对照，进行uv-vis-nir吸收光谱和近红外荧光光谱测定。
8、步骤(1)中，使用100kda超滤离心管是为了通过超滤将(6,5)-swcnts表面包覆的混合表面活性剂(doc/sc/sds)替换为后续的sds溶液。
9、(6,5)-swcnts全称，为单一手性(6,5)单壁碳纳米管。
10、离心力400-600g是指离心时设置的离心力为400-600×g，g为重力加速度。
11、步骤(4)中，多余的表面活性剂是指游离的sds。此步骤先使用10kda超滤管去除表面活性剂，再用100kda超滤管去除未与swcnts结合的dppe-mpeg5000，得到上清液就是dppe-mpeg5000分散的(6,5)-swcnts。步骤(1)-步骤(4)为探针的制备。
12、步骤(5)中，此处静置孵育是指在进行光谱测定前，让探针(即dppe-mpeg5000-(6,5))与检测物质(即血红蛋白)发生充分作用。待测样品即提到的血红蛋白。发现血红蛋白加入以后立即(10s左右)使探针的荧光淬灭。终浓度为0.5-2μm的血红蛋白(hb)溶液，指未知样品需控制在此浓度范围。
13、根据本专利技术的一种血红蛋白的检测方法，优选的是，步骤(1)所述离心时间为4-6min。
14、根据本专利技术的一种血红蛋白的检测方法，优选的是，步骤(2)所述sds溶液浓度为0.8-2.2％。
15、根据本专利技术的一种血红蛋白的检测方法，优选的是，步骤(3)所述的dppe-mpeg5000溶液浓度为1-1.5mg/ml。
16、根据本专利技术的一种血红蛋白的检测方法，优选的是，步骤(4)所述离心时间为0.2-1h。
17、根据本专利技术的一种血红蛋白的检测方法，优选的是，步骤(5)所述dppe-mpeg5000-(6,5)上清液与所述血红蛋白溶液的体积比为3-5:1。
18、根据本专利技术的一种血红蛋白的检测方法，优选的是，步骤(5)所述静置孵育10s-8min。此时间段的荧光淬灭率较高。
19、进一步地，步骤(5)所述静置孵育4min-6min。静置孵育4min-6min时荧光淬灭率更高。
20、有益效果：
21、本专利技术涉及一种创新的血红蛋白检测方法，其特点在于操作简单，检测速度快，检测成本低。该方法无需复杂的预处理过程，与其它方法相比显著缩短了检测时间，只需几分钟。此外，通过在生物透明窗口进行近红外荧光检测，有效避免了生物组织的背景干扰，具有良好的稳定性和重现性。该方法还具有灵敏度高，检测限低等特点，即使是微量的血红蛋白浓度变化也能被准确捕捉，对于早期诊断和治疗监测具有重要意义。
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【技术保护点】
1.一种血红蛋白的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种血红蛋白的检测方法，其特征在于：步骤(1)所述离心时间为4-6min。
3.根据权利要求1所述的一种血红蛋白的检测方法，其特征在于：步骤(2)所述SDS溶液浓度为0.8-2.2％。
4.根据权利要求1所述的一种血红蛋白的检测方法，其特征在于：步骤(3)所述的DPPE-mPEG5000溶液浓度为1-1.5mg/mL。
5.根据权利要求1所述的一种血红蛋白的检测方法，其特征在于：步骤(4)所述离心时间为0.2-1h。
6.根据权利要求1所述的一种血红蛋白的检测方法，其特征在于：步骤(5)所述DPPE-mPEG5000-(6,5)上清液与所述血红蛋白溶液的体积比为3-5:1。
7.根据权利要求1所述的一种血红蛋白的检测方法，其特征在于：步骤(5)所述静置孵育10S-8min。
8.根据权利要求7所述的一种血红蛋白的检测方法，其特征在于：步骤(5)所述静置孵育4min-6min。
【技术特征摘要】
1.一种血红蛋白的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种血红蛋白的检测方法，其特征在于：步骤(1)所述离心时间为4-6min。
3.根据权利要求1所述的一种血红蛋白的检测方法，其特征在于：步骤(2)所述sds溶液浓度为0.8-2.2％。
4.根据权利要求1所述的一种血红蛋白的检测方法，其特征在于：步骤(3)所述的dppe-mpeg5000溶液浓度为1-1.5mg/ml。
5.根据权利要求1所述的一...
【专利技术属性】
技术研发人员：张敏，陈静，董开翔，李果，曹晓迪，刘岩，章弘扬，胡坪，
申请(专利权)人：华东理工大学，
类型：发明
国别省市：
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