【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物育种，具体涉及一种芹菜抗黄萎病种株的选留方法。
技术介绍
1、芹菜(apiumgraveolens l.var.dulce)为伞形科旱芹属二年生蔬菜，富含营养，兼具多种药理功能，被誉为佳蔬良药，在我国南北各地均有种植。近二三十年以来芹菜在我国发展迅猛，种植面积和消费量不断增加，已成为我国非常重要的蔬菜作物之一。随着芹菜种植面积的扩大与种植茬次的增多，连作重茬导致的多种病虫危害日益加重，其中芹菜黄萎病是危害最为严重的病害之一，防控非常困难，给各地芹菜生产造成很大损失。
2、芹菜黄萎病由尖孢镰刀菌芹菜专化型(fusarium oxysporum f.sp.apii，简写为foa)引起，最初表现为根部维管组织褐变，进而根和根茎逐渐坏死，引起地上部叶片不能从根系获得充足营养，而出现发育迟缓，失绿黄化，最终导致植株干枯死亡。该病最早于1909年在美国首次发现(ryke，1935)，很快成为美国主要芹菜产区最为严重的病害，并逐渐蔓延到世界其它地区(correl等，1985)，我国最早是2005年前后在广东珠海市发现的(陈远凤，等，2008)，现在已传至我国大部分芹菜产区并构成危害。目前，foa在世界各地已先后发现4个生理小种(epstein等，2017；wo 2022/136652 a1)，其中生理小种2号(foa-r2)危害最为普遍，也是我国发生芹菜黄萎病最主要的病原菌。
3、现有技术中，一般情况下，在观察芹菜黄萎病时，是在定植到田间后，发现叶片黄化，确定感染黄萎病后，再去观察根，但是当叶片黄化时
4、另外，现有技术中，对黄萎病调查研究的植株，均是定植在大田中，这种情况下，植株受大田杂菌的影响比较大，发病较快，虽然单纯为了病株的黄萎病鉴定影响不大，但是却给选留种株带来很大影响。
5、人们早已认识到，选育抗病品种是农作物病害防治最为经济、有效、环保的技术途径。美国从上世纪70年代开始开展芹菜黄萎病抗病育种研究，先后育成多个抗病品种推向生产，收到比较理想效果(quiros，1993)。我国目前尚没有芹菜黄萎病抗病育种与抗病性鉴定相关研究报道。
6、参考文献：
7、1、ryker tc.fusarium yellows of celery.phytopathology,1935,25(5)：578-600；
8、2、correll jc，et al.identification of fusarium oxysporum f.sp.apii onthe basis of colony size，virulence，and vegetativecompatibility.phytopathology,1986,76(4)：396-400；
9、3、epsteinl,.et al.races of the celery pathogen fusarium oxysporumf.sp.apii are polyphyletic.phytopathology,2017,107(1)：463-473；
10、4、wo 2022/136652 a1,2022,06,30；
11、5、陈远凤，等.西芹黄萎病病原菌的生物学特性和防治药剂筛选.中国植物病理学会2008年学术年会沦文集，北京：中国农业科学技术出版社，2008：626-631；
12、6、quiroscf.celery breeding program at the department of vegetablecrops，university of california，davis.hortscience，1993，28(4)：250。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种为芹菜抗黄萎病育种工作提供一种操作简便、品种容量多、选择准确、存活率高的抗病种株选留方法，可以大幅度提高育种效率。
2、为了实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：
3、一种芹菜抗黄萎病种株的选留方法，包括如下步骤：
4、(1)芹菜材料的准备：以高感芹菜品种tall utah作为对比品种，将参加黄萎病抗病性鉴定与抗病种株选留的所有市售和优选芹菜品种种子播种在装有消毒育苗基质的平底育苗盘内，按照常规育苗方法进行培育，当芹菜苗长出2片真叶时，选择健壮且长势基本一致的幼苗，分别移栽到50孔穴盘中，继续培育30-35天。在育苗过程中，根据季节温度特点采取相应调控手段，保持环境温度在18℃～25℃之间，以利幼苗生长发育。每个参试品种准备100株穴盘苗。
5、(2)接菌液的制备：预先从芹菜生产田间采集严重黄化的典型黄萎病感病植株，通过组织分离培养法对发病植株进行病原菌分离纯化，对分离纯化的病原菌经过显微形态和分子鉴定，确定其为尖孢镰刀菌芹菜专化型(fusarium oxysporum f.sp.apii，简写为foa)，进而采用生理小种鉴定引物进行分子检测，进一步明确其为foa的2号生理小种(foa-r2)。利用pd液体培养基进行病原菌扩繁培养，7天后进行过滤、离心，收集得到高浓度foa-r2病原孢子母液，再用无菌水进行稀释，用血球计数板计数，稀释成分生孢子浓度为107个/ml的foa-r2菌悬液。
6、(3)蘸根接菌：芹菜穴盘苗培育30-35天后，淘汰少量弱小苗，选择健壮苗拔出，抖落掉根系上的育苗基质，随后以参试品种为单位，用制备好的107个孢子/ml菌悬液进行蘸根接菌，要求蘸根周到均匀，苗子根系完全浸入菌悬液中，晃动8-10秒钟，拿出来控干明水，重新植入32孔穴盘，继续培养。
7、(4)接菌后培养：接菌后随时监控穴盘内基质温度和湿度情况，根据天气条件变化采取相应措施，保持25℃以上温度和潮润状态，高温季节在高温时段进行遮阴降温，低温季节则利用地热线进行自动控温。其它管理按照常规方法进行。
8、(5)抗病性调查评价：接菌后40-60天，首先进行对比品种tall utah黄萎病发病情况调查，用锋利刀具从种株根茎结合部一侧斜向下切入主根中柱维管组织1/4--1/3部位，随后调直刀刃角度向下纵切，观察切面维管组织发生褐化的严重程度，作为黄萎病发病分级标准：
9、0级，无褐化症状；
10、1级，褐化斑点小而零星，占切面面积的5％以下；
11、2级，褐化病斑占切面组织面积的5％～50％，深褐色；
12、3级，褐化病斑占切面组织面积的50％以上，出现腐烂坏死组织；
13、4级，根茎部维管组织基本坏死，植株黄化干枯死亡。
14、最佳调查时间选择在对比品种tall utah大部分种株发病程度达到3-4级时进行。
15、调查以一个品种为单位，对每一株芹菜发病程度逐一调查，分级摆放，并做好记录本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种芹菜抗黄萎病种株的选留方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)在育苗过程中，保持环境温度在18℃～25℃之间，每个参试品种准备100株穴盘苗。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中对分离纯化的病原菌经过显微形态和分子鉴定，确定其为尖孢镰刀菌芹菜专化型Fusarium oxysporum f.sp.Apii，简写为FOA，进而采用生理小种鉴定引物进行分子检测，进一步明确其为FOA的2号生理小种FOA-R2。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)蘸根接菌过程中，要求蘸根周到均匀，苗子根系完全浸入菌悬液中，晃动8-10秒钟，拿出来控干明水。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(5)中所述黄萎病发病分级标准为：
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，种株定植前，先利用精甲·咯·嘧菌悬浮剂、氢氧化铜可湿性粉剂和吲丁·萘·芸生根粉三种市售药剂配制成混合药液进行蘸根处理：其中精甲·咯·嘧菌悬浮剂选用总有效成分为11％剂型，用
...【技术特征摘要】
1.一种芹菜抗黄萎病种株的选留方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)在育苗过程中，保持环境温度在18℃～25℃之间，每个参试品种准备100株穴盘苗。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中对分离纯化的病原菌经过显微形态和分子鉴定，确定其为尖孢镰刀菌芹菜专化型fusarium oxysporum f.sp.apii，简写为foa，进而采用生理小种鉴定引物进行分子检测，进一步明确其为foa的2号生理小种foa-r2。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)蘸根接菌过...
【专利技术属性】
技术研发人员：高国训，高苇，王武台，吴锋，杨利娟，王勇，华德平，
申请(专利权)人：天津市农业科学院，
类型：发明
国别省市：
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