【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物技术和基因诊断，具体说是一种用于检测hla-b*58:01等位基因的双探针和引物组合物。
技术介绍
1、痛风是单钠尿酸盐沉积于骨关节、肾脏和皮下等部位引发的急慢性炎症和组织损伤，与嘌呤代谢紊乱及(或)尿酸排泄减少所致的高尿酸血症直接相关，属于代谢性风湿病的范畴。别嘌呤醇是治疗痛风的最常用药，在国内外各项指南中均被推荐为一线用药。该药价格低廉，长期服用不会增加经济负担。但部分患者服用别嘌呤醇会发生不良反应如皮疹、发热、肝功能异常，甚至更严重的症状如史蒂文斯-约翰逊综合征和中毒性表皮坏死松解症。这些不良反应的发生与hla-b*58:01等位基因的存在密切相关。
2、hla-b*58:01是一种人类白细胞抗原(hla)的等位基因，它在某些人群中与痛风的高发病率相关联。具体来说，携带hla-b*58:01等位基因的个体，痛风的发病风险显著增加。hla-b*58:01等位基因在中国人群中的比例约为12％。这种关联性在亚洲人群中尤为明显，尤其是在中国、韩国和泰国等国家的研究中得到了证实。此外，hla-b*58:01等位基因携带者在服用别嘌呤醇时，可能会出现严重的过敏反应，这也提示了该基因与痛风治疗的复杂关系。
3、鉴于hla-b*58:01等位基因与痛风的关联性，对于携带该基因的个体，医生在治疗痛风时可能需要采取更为谨慎的策略。这包括在使用别嘌呤醇等药物前进行基因检测，以避免不必要的药物不良反应，并可能需要探索其他更为安全有效的治疗方案。同时，这也为痛风的预防和个性化治疗提供了新的思路，即通过基因检
4、hla-b*58:01基因与hla-b*15:02、hla-b*15:25、hla-b*57:01、hla-b*15:17和hla-b*18:02等多种等位基因序列相似，传统的检测方法在特异性和准确性上存在不足，影响下步的用药准确度。
技术实现思路
1、为解决上述问题，本专利技术的目的是提供一种用于检测hla-b*58:01等位基因的双探针和引物组合物，以提高检测hla-b*58:01等位基因的特异性和准确性。该方法可以有效避免痛风患者在药物治疗中出现的严重不良反应，提高治疗的安全性和有效性。
2、本专利技术为实现上述目的，通过以下技术方案实现：
3、一种用于检测hla-b*58:01等位基因的双探针和引物组合物，所述双探针和引物根据hla-b*58:01等位基因特异位点设计，序列如下：
4、第一探针：5’6-fam-accgagagaacctgcggatcgcgctcc-3’bhq-x；
5、第二探针：5’hex-tccgagatccgcctccctgaggcc-3’bhq-x；
6、正向引物：5’-gggccggagtattgggatg-3’；
7、反向引物：5’-tgaaaccgggtaaacgcg-3’。
8、优选的，用于检测hla-b*58:01等位基因的双探针和引物组合物还包括内参探针、内参正向引物和内参反向引物，序列如下；
9、所述内参探针：
10、β-globin-探针：5’cy5-agtctgccgttactgccctgtgg-3’bhq-x；
11、所述内参正向引物(β-globin-f)：5’-agtcagggcagagccatcta-3’；
12、所述内参反向引物(β-globin-r)：5’-ttagggttgcccataacagc-3’。
13、优选的，所述双探针和引物组合物通过下述步骤以非诊断和非治疗为目的检测hla-b*58:01等位基因：
14、步骤一，在抗凝血中提取模板dna；
15、步骤二，以步骤一提取的dna为样本dna进行qpcr扩增；扩增时准备内参探针和内参引物组合物；
16、qpcr扩增中的双探针、探针引物、内参探针和内参引物组合物如下：
17、第一探针：5’6-fam-accgagagaacctgcggatcgcgctcc-3’bhq-x；
18、第二探针：5’hex-tccgagatccgcctccctgaggcc-3’bhq-x；
19、正向引物：5’-gggccggagtattgggatg-3’；
20、反向引物：5’-tgaaaccgggtaaacgcg-3’；
21、步骤三，qpcr扩增过程中，分别实时采集fam、hex和cy5三通道荧光信号，对待测样本hla-b*58:01等位基因和内参基因进行分析。
22、进一步优选的，步骤二中，
23、所述内参探针：
24、β-globin-探针：5’cy5-agtctgccgttactgccctgtgg-3’bhq-x；
25、所述内参正向引物：5’-agtcagggcagagccatcta-3’；
26、所述内参反向引物：5’-ttagggttgcccataacagc-3’。
27、优选的，步骤二中qpcr扩增反应体系包括：
28、
29、优选的，步骤二中qpcr扩增反应条件：预变性：94℃，3min；变性：94℃，5s，60℃，30s，40个循环。
30、本专利技术还包括将上述双探针和引物组合物，制备成检测hla-b*58:01等位基因的试剂盒。
31、本专利技术相比现有技术具有以下优点：
32、本专利技术的用于检测hla-b*58:01等位基因的双探针和引物组合物，相比现有的单探针检测，通过同时使用两种特异性探针，能显著提高检测的准确性和可靠性。这种方法不仅可以减少误报率和漏检率，还能更加精准的识别目标基因，提高了hla-b*58:01等位基因检测的特异性和准确性。
33、本专利技术的用于检测hla-b*58:01等位基因的双探针和引物组合物，将内参基因置于同一管中反应，不仅减少了操作步骤，还避免了不同管间反应效率的差异对实验结果的影响，进一步提高了实验的准确性和重复性。此外，本专利技术的双探针和引物组合物设计合理，具有高度的特异性和敏感性，能够准确识别hla-b*58:01等位基因，降低了假阳性和假阴性的发生率。因此，本专利技术的双探针和引物组合物在hla-b*58:01等位基因的检测中具有广泛的应用前景，特别是在痛风患者的个体化治疗和预防中具有重要价值。同时，本专利技术提供的试剂盒制备方便，操作简单，易于推广和应用。
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1.一种用于检测HLA-B*58:01等位基因的双探针和引物组合物，其特征在于：所述双探针和引物根据HLA-B*58:01等位基因特异位点设计，序列如下：
2.根据权利要求1所述的用于检测HLA-B*58:01等位基因的双探针和引物组合物，其特征在于：还包括内参探针、内参正向引物和内参反向引物，序列如下；
3.根据权利要求1所述的双探针和引物组合物，其特征在于：所述双探针和引物组合物通过下述步骤以非诊断和非治疗为目的检测HLA-B*58:01等位基因：
4.根据权利要求3所述的双探针和引物组合物，其特征在于：
5.根据权利要求3或4所述的双探针和引物组合物，其特征在于：步骤二中qPCR扩增反应体系包括：
6.根据权利要求3所述的双探针和引物组合物，其特征在于：步骤二中qPCR扩增反应条件：预变性：94℃，3min；变性：94℃，5s，60℃，30s，40个循环。
7.根据权利要求1所述的双探针和引物组合物，其特征在于：制备成检测HLA-B*58:01等位基因的试剂盒。
【技术特征摘要】
1.一种用于检测hla-b*58:01等位基因的双探针和引物组合物，其特征在于：所述双探针和引物根据hla-b*58:01等位基因特异位点设计，序列如下：
2.根据权利要求1所述的用于检测hla-b*58:01等位基因的双探针和引物组合物，其特征在于：还包括内参探针、内参正向引物和内参反向引物，序列如下；
3.根据权利要求1所述的双探针和引物组合物，其特征在于：所述双探针和引物组合物通过下述步骤以非诊断和非治疗为目的检测hla-b*58:01等位基...
【专利技术属性】
技术研发人员：王文娟，田雨，高成磊，刘小信，
申请(专利权)人：山东第一医科大学第一附属医院山东省千佛山医院，
类型：发明
国别省市：
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