【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于阻断剂生产，具体涉及一种一种高浓度主动型异嗜性抗体阻断剂公斤级自动生产装置及制备方法。
技术介绍
1、阻断剂，是一类能应用于在体外诊断试剂开发过程中，以达到减少来自患者样本中的蛋白质干扰或者试验过程中的其他因素影响并由此可能造成的假阳性、假阴性的错误检测结果的物料的统称。
2、在我国体外诊断试剂行业的发展初期，各体外诊断试剂生产厂家并没有充分认识到阻断剂的重要性，大多数体外诊断试剂公司一般根据生产需求简单配制，在重复性，稳定性，使用效果方面参差不齐，导致国内研发生产的体外诊断试剂在临床应用性能上与国外进口品牌有一定差距，假阳性，假阴性的结果难以消除。
3、阻断剂是诊断试剂原料中关键的辅料，且用途广泛，用量大。随着市场的变化，市场对高浓度及大批量阻断剂有较高需求。且生产成本需压低。
4、现有采用的是膜包进行换液浓缩，膜包对操作液体的澄清度较高，使用膜包前都需要过滤处理，生产规模小，而本领域中常用的是使用透析袋进行换液处理，该过程效率低，需要在固定时间段对透析液进行更换，且处理的批量小，在透析过程中损耗大。
5、阻断剂种类较多，免疫阻断剂可分为主动性阻断剂和被动性阻断剂。主动性阻断剂是一类对干扰抗体具有高亲和力的试剂，通过高亲和力与干扰抗体结合，形成位阻效应，从而阻止干扰抗体与检测抗体或捕获抗体的结合，减少检测中的干扰和假阳性结果，如rf阻断剂、hama阻断剂等。被动型阻断剂则是使用非特异性物质，如鼠igg、鼠血清、非特异性的单克隆抗体、聚合igg等，其工作原理是通过干扰
6、免疫阻断剂目前采用的纯化方法主要包括如下两种：
7、1、亲和层析法：如g柱亲和层析，利用抗原与抗体之间的特异性亲和力进行纯化。将含有阻断剂的样品通过g柱，阻断剂中的抗体成分会特异性地结合在柱子上，而其他杂质则被洗脱下来，然后再通过改变洗脱条件，如调整缓冲液的ph值或离子强度等，将结合的阻断剂洗脱下来，从而获得纯化的阻断剂。例如，在制备单克隆抗体阻断剂时，可使用proteing柱进行亲和层析，获得高纯度的抗体阻断剂。
8、2、离子交换层析法：通过离子交换树脂与阻断剂之间的离子相互作用来实现纯化。例如蓝胶+q柱离子交换层析，先将样品上样到离子交换柱上，阻断剂会根据其表面电荷与离子交换树脂发生吸附作用，然后用不同浓度的盐溶液进行梯度洗脱，根据阻断剂与杂质的电荷差异，在不同的盐浓度下依次被洗脱下来，从而达到分离纯化的目的。
9、现阶段主动型阻断剂一般浓度为20mg/ml，在使用过程中添加剂量较大，市场有高浓度样品需求(50mg/ml)，现阶段样品采用亲和层析法进行分离纯化，其解离条件酸性较高，容易对抗体造成损伤，在酸性条件下且igg之间易形成聚体，冻融时不稳定易析出。单批量100g，较小，在不同批次产品间存在批间差异，在下游生产时，不同批次需要进行验证，对下游生产影响较大。
技术实现思路
1、为了克服现有主动型阻断剂生产量小，批间差异大的缺陷，本专利技术提供一种高浓度主动型异嗜性抗体阻断剂公斤级自动生产装置及方法。
2、本专利技术采用的技术方案为：
3、一种高浓度主动型异嗜性抗体阻断剂公斤级自动生产装置，所述装置包括配液罐、处理罐、储液罐、上样罐、深层过滤系统、自动层析装置、第一超滤膜包设备循环罐、第二超滤膜包设备循环罐、离心设备、过滤设备以及与各罐体相连的管路及阀门；其中，配液罐与储液罐相连，储液罐与处理罐及自动层析装置相连，深层过滤系统与处理罐相连，处理罐与离心设备相连，离心设备与第一超滤膜包设备循环罐相连，第一超滤膜包设备循环罐与过滤设备相连，过滤设备与上样罐相连，上样罐与自动层析装置相连，自动化层析设备与第二超滤膜包设备循环罐相连。
4、所述配液罐为500l不锈钢罐，由plc控制系统实现自动控制加水、搅拌、电导率、调节ph，当系统检测ph达到设定值且持续一段时间，电导率符合要求时，自动对溶液进行出料至储液罐中；
5、储液罐为500l不锈钢罐，用于溶液的存储。
6、处理罐为500l不锈钢罐，储液罐中存储的溶液出料至处理罐中进行辛酸沉淀；
7、所述离心设备为连续流碟式离心机；
8、样品经连续流碟式离心机进行离心，收集上清至第一超滤膜包设备循环罐中静置、换液透析后进入过滤装置；
9、所述过滤装置为囊式过滤器；过滤的样品转移至上样罐中；使用自动化层析设备上样，收集流穿液；收集样品经第二超滤膜包设备循环罐进行换液并浓缩至50mg/ml，进行0.22μm除菌过滤后，进行分装。
10、采用上述装置进行高浓度主动型异嗜性抗体阻断剂公斤级生产方法，包括如下步骤：
11、1)配液：采用500l不锈钢罐为配液罐，可由plc控制系统实现自动控制加水、搅拌、电导率、调节ph，当系统检测ph达到设定值且持续一段时间，电导率符合要求时，自动对溶液进行出料至储液罐中；
12、2)将免疫小鼠获得的100l小鼠腹水经滤布初步过滤，再将样品经4-18μm深层过滤，处理澄清；
13、3)将处理澄清的原料转移至500l处理罐中，加入4倍原料体积的稀释液40mm naac(ph4.0)，搅拌均匀；根据原料体积添加10％正辛酸，缓慢加入，搅拌4小时；
14、4)将搅拌均匀的样品经连续流碟式离心机进行离心，收集上清至第一超滤膜包设备循环罐中静置2小时，同时将样品ph调节至7.2；
15、5)将调节ph后的样品在超滤膜包设备中经10mmpb+0.3m nacl(ph7.4)+5％甘油溶液换液透析，换盐比为1：10；
16、6)将换液样品经0.45μm囊式滤器过滤，过滤的样品转移至上样罐中；
17、7)准备hp弱阴离子交换介质200l，填装至层析柱中；hp deae柱用平衡缓冲液10mmpb+0.3m nacl(ph7.4)+5％甘油平衡5倍柱体积，柱平衡好后将蛋白紫外检测仪显示值调整为0，作为基线；
18、8)按照介质10mg/ml载量进行上样，使用自动化层析设备2l/min上样，收集流穿液，当蛋白紫外检测仪显示值大于0.2时开始收集蛋白；用10mmpb+0.3m nacl(ph7.4)+5％甘油进行平衡，当蛋白紫外检测仪显示值小于0.2时停止收集蛋白；9)将收集样品经第二超滤膜包进行换液(10mmpb+0.3m nacl(ph7.4)+2％吐温)，并浓缩至50mg/ml，将样品进行0.22μm除菌过滤后，进行分装；此时产品批量为1000g。
19、本专利技术所述的小鼠腹水为把产生异嗜性抗体阻断剂的细胞(如杂交瘤细胞)接种到小鼠腹腔后，在腹腔环境中生长繁殖，分泌异嗜性抗体阻断剂，形成的腹水，例如hbr-4、hbr-5、hbr-5/s等主动性阻断剂。
20、本专利技术由原小规模生产扩大10倍以上，大规模生产与小规模生产不同，在样品回本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种高浓度主动型异嗜性抗体阻断剂公斤级自动生产装置，其特征在于：所述装置包括配液罐、处理罐、储液罐、上样罐、深层过滤系统、自动层析装置、第一超滤膜包设备循环罐、第二超滤膜包设备循环罐、离心设备、过滤设备以及与各罐体相连的管路及阀门；其中，配液罐与储液罐相连，储液罐与处理罐及自动层析装置相连，深层过滤系统与处理罐相连，处理罐与离心设备相连，离心设备与第一超滤膜包设备循环罐相连，第一超滤膜包设备循环罐与过滤设备相连，过滤设备与上样罐相连，上样罐与自动层析装置相连，自动化层析设备与第二超滤膜包设备循环罐相连。
2.根据权利要求1所述一种高浓度主动型异嗜性抗体阻断剂公斤级自动生产装置，其特征在于：所述配液罐为500L不锈钢罐，由PLC控制系统实现自动控制加水、搅拌、电导率、调节pH，当系统检测pH达到设定值且持续一段时间，电导率符合要求时，自动对溶液进行出料至储液罐中。
3.根据权利要求1所述一种高浓度主动型异嗜性抗体阻断剂公斤级自动生产装置，其特征在于：储液罐为500L不锈钢罐。
4.根据权利要求1所述一种高浓度主动型异嗜性抗体阻断剂公斤级自动生
5.根据权利要求1所述一种高浓度主动型异嗜性抗体阻断剂公斤级自动生产装置，其特征在于：所述离心设备为连续流碟式离心机。
6.根据权利要求1所述一种高浓度主动型异嗜性抗体阻断剂公斤级自动生产装置，其特征在于：所述过滤装置为囊式过滤器。
7.采用权利要求1至6中任意一项所述的装置进行高浓度主动型异嗜性抗体阻断剂公斤级生产方法，其特征在于，包括如下步骤：
8.根据权利要求7所述的高浓度主动型异嗜性抗体阻断剂公斤级生产方法，其特征在于，步骤5）中超滤膜包设备中经10mmPB+0.3M NaCl (pH7.4)+5%甘油溶液换液透析，换盐比为1：10。
9.根据权利要求7所述的高浓度主动型异嗜性抗体阻断剂公斤级生产方法，其特征在于，步骤7）中HP弱阴离子交换介质为琼脂糖、聚甲基丙烯酸酯中的任意一种。
...【技术特征摘要】
1.一种高浓度主动型异嗜性抗体阻断剂公斤级自动生产装置，其特征在于：所述装置包括配液罐、处理罐、储液罐、上样罐、深层过滤系统、自动层析装置、第一超滤膜包设备循环罐、第二超滤膜包设备循环罐、离心设备、过滤设备以及与各罐体相连的管路及阀门；其中，配液罐与储液罐相连，储液罐与处理罐及自动层析装置相连，深层过滤系统与处理罐相连，处理罐与离心设备相连，离心设备与第一超滤膜包设备循环罐相连，第一超滤膜包设备循环罐与过滤设备相连，过滤设备与上样罐相连，上样罐与自动层析装置相连，自动化层析设备与第二超滤膜包设备循环罐相连。
2.根据权利要求1所述一种高浓度主动型异嗜性抗体阻断剂公斤级自动生产装置，其特征在于：所述配液罐为500l不锈钢罐，由plc控制系统实现自动控制加水、搅拌、电导率、调节ph，当系统检测ph达到设定值且持续一段时间，电导率符合要求时，自动对溶液进行出料至储液罐中。
3.根据权利要求1所述一种高浓度主动型异嗜性抗体阻断剂公斤级自动生产装置，其特征在于：储液罐为500l不锈钢罐...
【专利技术属性】
技术研发人员：李永刚，肖佳伟，
申请(专利权)人：江苏帆博生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：
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