【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程领域，具体涉及mitf基因增强子及其在提高耳蜗血管纹细胞基因表达特异性及其上的应用。
技术介绍
1、耳聋是最常见的感觉障碍性疾病，严重影响人类生活质量。由遗传因素引起的耳聋称为遗传性耳聋，根据伴随症状又分为综合征型耳聋(shl)和非综合征型耳聋(nshl)。waardenburg综合征(waardenburg syndrome,ws)又称听力-色素综合征，人群中发病率为1/42000，是最常见的综合征型耳聋之一；约2～5％的语前聋由ws引起。ws的主要临床表现为感音神经性聋，伴随虹膜、头发和皮肤色素分布异常，四肢发育异常和先天性巨乙状结肠。
2、目前已知mitf、pax3、sox10、ednrb、snai2和edn3基因是ws的致病基因，其中最重要的是mitf基因(microphthalmia-associated transcription factor，小眼畸形相关转录因子)。对ws相关分子遗传学临床研究回顾分析发现：ws患者中mitf基因突变的携带率约为28％；携带mitf基因突变的ws患者主要表现为ws2型，其发生耳聋的比例高达89.6％，且60％为重度以上耳聋。ws2型患者以感音神经性聋和色素分布异常为主要临床特征、通常不伴随其他症状。人类mitf基因位于染色体3p13，其9个外显子可以通过选择性剪切形成多种剪切型；黑色素细胞中主要的剪切型是m-mitf，由419个氨基酸组成。mitf基因属于myc超家族，是一种含有碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链(bhlh-zip)结构的转录因子。其基本
3、在ws2患者中，mitf基因突变所致的ws主要是由于单倍体剂量不足所致。理论上可以通过基因替代治疗策略，通过递送正常基因提供充足的正常功能蛋白进行基因治疗。哺乳动物的耳蜗是由多种不同类型细胞组成的复杂体系，这些细胞类型因独特的基因表达模式而具有不同的功能。耳蜗中mitf基因主要表达在血管纹细胞中，其中血管纹细胞由边缘细胞(marginal cells，mcs)、中间细胞(intermediate cells，ics)和基底细胞(basalcells，bcs)组成，通过离子通道将钾离子从外淋巴泵到内淋巴；血管纹产生的内淋巴液电位是高灵敏度听觉传导所必需的。
4、目前耳聋基因治疗的主要靶细胞为毛细胞，靶向血管纹细胞的基因治疗研究较少。为了通过aav病毒实现靶向血管纹细胞的高效转染，我们鉴定了一个mitf基因的增强子。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题为：提供一个mitf基因增强子。
2、本专利技术的技术方案为：mitf基因增强子，其核苷酸序列如seq id no.1所示。
3、扩增上述所述的增强子的引物对，所述引物对的核苷酸序列如seq id no.2和seqidno.3所示。
4、扩增上述所述的增强子的方法，以小鼠基因组dna为模板，以seq id no.2和seqid no.3所示的引物对进行pcr扩增，得到seq id no.1所示的lhfpl5基因的增强子。
5、含有上述所述的增强子的生物材料，所述生物材料为重组dna、载体、腺病毒或工程菌。
6、上述所述的增强子或生物材料在增强耳蜗血管纹细胞基因特异性表达上的应用。
7、进一步地，所述基因为mitf基因或egfp基因。
8、上述所述的增强子或生物材料在制备增强耳蜗血管纹细胞基因特异性表达的产品上的应用。
9、进一步地，所述基因为mitf基因或egfp基因。
10、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
11、利用小鼠显微注射系统证实该序列为增强子，能在内耳中显著增强egfp蛋白基因的转录活性。所述增强子序列片段与其他近似尺寸大小的其他序列相比，能驱动报告基因或mitf基因在内耳中表达能力明显增强，并特异性表达在耳蜗血管纹细胞中，适用于重组dna、载体或腺病毒等生物材料，用于促进egfp基因或其他基因在内耳中的转录。
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1.Mitf基因增强子，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
2.扩增权利要求1所述的增强子的引物对，其特征在于，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示。
3.扩增权利要求1所述的增强子的方法，其特征在于，以小鼠基因组DNA为模板，以SEQID No.2和SEQ ID No.3所示的引物对进行PCR扩增，得到SEQ ID No.1所示的Mitf基因的增强子。
4.含有权利要求1所述的增强子的生物材料，所述生物材料为重组DNA、载体、腺病毒或工程菌。
5.权利要求1所述的增强子或权利要求4所述的生物材料在增强耳蜗血管纹细胞基因特异性表达上的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述基因为Mitf基因或EGFP基因。
7.权利要求1所述的增强子或权利要求4所述的生物材料在制备增强耳蜗血管纹细胞基因特异性表达的产品上的应用。
8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述基因为Mitf基因或EGFP基因。
【技术特征摘要】
1.mitf基因增强子，其核苷酸序列如seq id no.1所示。
2.扩增权利要求1所述的增强子的引物对，其特征在于，所述引物对的核苷酸序列如seq id no.2和seq id no.3所示。
3.扩增权利要求1所述的增强子的方法，其特征在于，以小鼠基因组dna为模板，以seqid no.2和seq id no.3所示的引物对进行pcr扩增，得到seq id no.1所示的mitf基因的增强子。
4.含有权利要求1所述的增强子的生...
【专利技术属性】
技术研发人员：冯永，冯志礼，曾湘瑶，颜梦珍，冯丽颖，敬前程，文杰，刘贤霖，龚巍，康晓明，胡一晗，马璐，李俊，
申请(专利权)人：长沙市中心医院，
类型：发明
国别省市：
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