【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化学分析，具体来说，本专利技术是一种梗膏中淀粉含量的测定方法。
技术介绍
1、来自烟草的梗膏中的淀粉含量测定目前没有标准方法。通常借鉴烟草中淀粉含量的测定方法，采用分光光度法和连续流动法显色来分析梗膏中的淀粉；但是，有三个方面的原因导致这种分析的结果并不准确：一是难以排除梗膏自身复杂基质以及较深的颜色带来的干扰；二是烟草中淀粉的检测前处理对象为固体，而梗膏中淀粉含量的分析目标为烟梗提取物，其为溶液，而该溶液利用80％乙醇-饱和氯化钠溶液洗糖，经过c3砂心烧结玻璃漏斗的过程中，无法使其中的淀粉充分沉淀，而且颗粒物容易进入砂芯部分，堵塞砂芯中的微孔，无法完全提取梗膏中的淀粉，测定误差较大；三是因在通过砂芯时淀粉被截留部分无法掌控，检测结果会造成低于流动分析的检测出限，并且结果不稳定。因此，目前采用的梗膏中淀粉含量测定方法的稳定性和准确性都比较差。
2、因此，需要提供一种新型的梗膏中淀粉含量测定和分析方法。
技术实现思路
1、为了解决上述技术问题，本专利技术的目的是提供一种梗膏中淀粉含量的测定分析方法。
2、本专利技术的技术方案如下。
3、本专利技术提供一种梗膏中淀粉含量的测定方法，所述测定方法包括以下步骤：
4、(1)向1.500g梗膏中加入25ml 80％乙醇-饱和氯化钠溶液，300w超声25min，然后离心弃上清，向所得沉淀中加入75％乙醇溶液反复振摇洗涤沉淀，离心得到沉淀；
5、(2)向步骤(1)所得沉淀中
6、(3)取步骤(2)所得溶液1ml，用水定容至250ml，然后通过c18小柱除去杂质，并用0.22μm水系膜过滤，然后将滤过液进行离子色谱-脉冲安培法分析，所述分析包括：
7、采用pa-10糖柱，柱温30℃，流速1.0ml/min，进样量25μl；
8、流动相a为超纯水，流动相b为250mmol/l的naoh溶液；
9、以80％体积的流动相a和20％体积的流动相b，等度洗脱13分钟；
10、计算得到色谱峰面积(y)；
11、(4)按照以下公式，计算葡萄糖浓度x：
12、y＝1.6432x–0.0431，r2＝0.9992，其中，x代表葡萄糖浓度，y代表色谱峰面积；然后计算得到葡萄糖含量w葡萄糖；
13、进一步地，按照以下公式，计算淀粉含量：
14、w淀粉＝w葡萄糖×0.9
15、其中，w淀粉为淀粉含量，w葡萄糖为酶解后的葡萄糖含量，0.9为葡萄糖含量换算为淀粉含量的换算系数。
16、优选地，步骤(1)中，超声后的离心为在5000r/min的转速下离心5min。
17、优选地，步骤(1)中，加入乙醇溶液洗涤沉淀后的离心为在5000r/min的转速下离心5min。
18、优选地，步骤(1)中，加入8-12ml 75％乙醇溶液反复振摇洗涤沉淀并离心3-5次。其中在5000r/min的转速下离心5min。
19、优选地，步骤(2)中，α-淀粉酶、糖化酶、普鲁兰酶的加入总量为每g梗膏加入200u。
20、优选地，步骤(2)中，α-淀粉酶、糖化酶、普鲁兰酶的加入量以1:1:1个酶活单位计。
21、优选地，步骤(2)中，在恒温水浴中进行所述酶解。
22、以下是本专利技术的详细描述。
23、为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：一种梗膏中淀粉含量的分析方法，步骤包括：
24、a.标准工作溶液配制：
25、a1.准确称取0.1000g的葡萄糖标准品，超纯水溶解后将其定容至100ml容量瓶中，摇匀，得到1.00mg/ml的混标储备液；
26、a2.准确移取1ml的混标储备液，定容至25ml容量瓶中，得到0.040mg/ml的混标溶液；
27、a3.准确移取0.05、0.125、0.25、0.5、1ml标准液，分别定容至5ml容量瓶中，得到一系列浓度的混标溶液，浓度分别为0.4、1、2、4、8mg/l；
28、a4.标准曲线建立
29、用离子色谱测定标准溶液中的葡萄糖浓度，得到标准曲线方程为：
30、y＝1.6432x–0.0431，r2＝0.9992
31、其中，x代表葡萄糖浓度，y代表色谱峰面积；
32、根据信噪比(s/n＝3)计算得到葡萄糖的检出限lod为0.79mg/g梗膏，根据信噪比(s/n＝10)计算得到定量限loq为2.56mg/g梗膏，换算为淀粉的检出限lod和定量限loq分别为0.72mg/g梗膏、2.30mg/g梗膏；
33、b.梗膏样品前处理
34、b1.准确称取1.500g梗膏，加入25ml的80％乙醇-饱和氯化钠溶液放在500ml的三角瓶中超声25min，在5000r/min的转速下离心5min，弃去上清液，下层沉淀先用75％的乙醇溶液洗涤3-5次，反复振摇洗涤沉淀离心；
35、b2.直支链淀粉测定：称取10mg直链淀粉作为标准品，加入0.1ml无水乙醇和0.9ml水混匀后封口膜封口，沸水浴至溶解，即10mg/ml的直链淀粉标准溶液。标准溶液的稀释：取40μl的10mg/ml标准溶液，加入960μl直链淀粉酶(液体)和dns显色剂的混合溶液充分混匀，配制成0.4mg/ml标准溶液。
36、准确称取1.500g梗膏，加入25ml的80％乙醇-饱和氯化钠溶液，放在500ml的三角瓶中超声300w，25min，在5000r/min的转速下离心5min，弃去上清，下层沉淀用约10ml 75％乙醇溶液洗涤3-5次，反复振摇洗涤沉淀，离心，得到沉淀。
37、称取1g沉淀物加入25ml ph为5.5的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液和普鲁兰酶，80℃酶解20分钟后，水浴提取30min，然后5000r/min，25℃离心5min，弃上清，沉淀中加入1ml直链淀粉酶和ph为5.5的磷酸盐缓冲液，振荡5min，90℃水浴10min，冷却后离心5min，取上清即梗膏沉淀酶解液，采用dns法显色测定。
38、用分光光度计测定在550nm和485nm处的吸光值。550nm下的测定管、标准管、空白管分别记为a测定、a标准和a空白，485nm下的分别记为a1测定、a1标准、a1空白，计算δa测定＝(a测定-a空白)-(a1测定-a1空白)，δa标准＝(a标准-a空白)-(a1标准-a1空白)。
39、直链淀粉含量计算：直链淀粉含量(mg/g梗膏质量)＝2×δa测定/(δa标准×w)，“w”表示梗膏的总质量。经测定梗膏中直链淀粉/支链淀粉＝1:5。
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【技术保护点】
1.一种梗膏中淀粉含量的测定方法，其特征在于，所述测定方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤(1)中，超声后的离心为在5000r/min的转速下离心5min。
3.根据权利要求1或2所述的测定方法，其特征在于，步骤(1)中，加入乙醇溶液洗涤沉淀后的离心为在5000r/min的转速下离心5min。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的测定方法，其特征在于，步骤(1)中，加入8-12mL75％乙醇溶液反复振摇洗涤沉淀并离心3-5次。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的测定方法，其特征在于，步骤(2)中，α-淀粉酶、糖化酶、普鲁兰酶的加入总量为每g梗膏加入200U。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的测定方法，其特征在于，步骤(2)中，α-淀粉酶、糖化酶、普鲁兰酶的加入量以1:1:1个酶活单位计。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的测定方法，其特征在于，步骤(2)中，在恒温水浴中进行所述酶解。
【技术特征摘要】
1.一种梗膏中淀粉含量的测定方法，其特征在于，所述测定方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤(1)中，超声后的离心为在5000r/min的转速下离心5min。
3.根据权利要求1或2所述的测定方法，其特征在于，步骤(1)中，加入乙醇溶液洗涤沉淀后的离心为在5000r/min的转速下离心5min。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的测定方法，其特征在于，步骤(1)中，加入8-12ml...
【专利技术属性】
技术研发人员：何声宝，张威，王英元，刘楠，罗安娜，冯晓民，
申请(专利权)人：国家烟草质量监督检验中心，
类型：发明
国别省市：
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