【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种特定种类微生物的富集和分离，尤其涉及从人体肠道菌中分离有研究和应用价值的菌种，结合专门设计的体外培养装置和操作方法，适合普通实验室在常规实验条件下开展工作。
技术介绍
1、人体肠道内存在复杂微生态系统，影响消化、营养吸收、能量供应、脂肪代谢、免疫及抗病功能。经黏液真杆菌属 blautia是一种重要的肠道细菌属，属于毛螺菌科，在哺乳动物肠道内发挥着关键作用。近年来，随着对肠道微生物研究的深入， blautia菌因其对缓解炎症性疾病、代谢疾病的贡献以及对特定微生物的抗菌活性而备受关注。blautia菌最初是将几种丰富的胃肠道细菌归类而得出的，这些细菌以前被归类于 ruminococcus属。随着研究的深入，梭菌属和瘤胃球菌属中的一些物种也被重新归类为 blautia。该属的组成通过不断增加新的种和品系而不断更新，但总体上， blautia中的种仍形成一个相对稳定和连贯的单系分支。目前，根据公布的有效名称， blautia属已包含多个物种，如 b. hydrogenotrophica、b. coccoides、b. wexlerae、b. hansenii和 b. producta等。 blautia菌在肠道微生物群中扮演着重要角色。它们严
2、（1）样本复杂性：肠道微生物群落极为复杂，包含多种细菌、真菌、病毒等微生物。 blautia菌只是其中的一部分，且其数量可能相对较少。因此，在从肠道样本中富集和分离 blautia菌时，需要克服样本复杂性的挑战，确保能够准确、高效地筛选出目标菌；
3、（2）生长条件苛刻： blautia菌属于严格厌氧菌，对生长环境的要求较高。在富集和分离过程中，需要严格控制氧气浓度、温度、ph值等条件，以确保其正常生长和繁殖。这增加了操作的复杂性和成本；
4、（3）选择性培养基缺乏：目前，针对 blautia菌的选择性培养基尚不完善。传统的培养基可能无法完全满足 blautia菌的生长需求，导致富集效果不佳。因此，开发针对 blautia菌的高效选择性培养基是富集与分离技术的关键之一。
技术实现思路
1、针对上述技术问题，本专利技术目的是在普通实验室缺乏厌氧工作站等专业仪器设备的情况下，利用独特的装置、流程和培养基配方富集和分离 blautia属，具体包括如下步骤：
2、（1）基本厌氧培养基配制；
3、（2）富集培养物配制；
4、（3）富集培养；
5、（4）肠道菌核酸提取；
6、（5）高通量测序和分析；
7、（6）菌株分离和培养；
8、（7）肠道菌分子鉴定；
9、作为优选，所述的步骤（1）基本厌氧培养基配制，包括以下的步骤：
10、①根据多数肠道菌的生长规律配制基本培养基成分，调整好ph值；这些培养基一般包含必要的糖分、蛋白质、维生素、还有一些短链脂肪酸；
11、②加入千分之一浓度的刃天青作为氧气指示剂，充氮，高压灭菌或过滤灭菌。氧气指示剂虽然不是所有肠道菌培养时所必须的，但为各种肠道菌培养的操作提供重要依据。在氧气指示剂显红色时，其培养基条件无法满足严格厌氧菌的生长，但仍然可以满足兼性厌氧菌和微需氧菌的生长；
12、③单独配制1%以上浓度的半胱氨酸溶液，充氮，高压或过滤灭菌，接种前使用。半胱氨酸是常用的水溶性去氧剂，可以直接加入半胱氨酸，也可以加入半胱氨酸盐酸盐，其效果是等同的；
13、作为优选，所述的步骤（2）特殊富集培养物配制，按如下步骤进行：
14、①将1-5g新鲜核桃类干果与100ml无菌蒸馏水混合，使用研磨钵以正常速度研磨5min；约50mgα-淀粉酶（活性380 u/mg）溶解在20ml过滤灭菌后的cacl2溶液（1m mol/l，ph=7.0）中；将5ml的淀粉酶-cacl2溶液和研磨后的混合液放置到500ml的烧杯中，在37℃水浴锅上，将混合物无搅拌孵育30min；
15、②用6mol/l hcl溶液将上述①混合物酸化至ph=2.8（±0.1），胃蛋白酶约80mg（活性>3000u/mg）加入到混合物中，并在37℃下进一步110rpm震荡孵育2-4h；
16、③在上述溶液中加入6 mol/l naoh溶液将上述②混合物调节至ph=5.5，将0.1g胰酶（活性>227u/mg的胰蛋白酶、胰脂肪酶本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种富集和筛选Blautia属肠道菌的方法，其特征在于，该方法包括以下的步骤：
【技术特征摘要】
1.一种富集和筛选blautia属肠道菌的...
【专利技术属性】
技术研发人员：彭华正，叶华琳，朱玲琴，
申请(专利权)人：浙江省林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：
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