【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及具有改善的特性(例如稳定性)的长双歧杆菌(bifidobacteriumlongum)突变菌株。此外，本专利技术涉及生产长双歧杆菌突变菌株的方法，以及这些菌株用于改善肠道屏障功能和/或引发抗炎免疫反应的用途。
技术介绍
0、背景
1、双歧杆菌是胃肠道的自然栖息菌，具有遗传适应能力，能够在这一恶劣和复杂的栖息地定植。双歧杆菌与肠道功能的关键要素相互作用并有助于维持内环境稳态。最近的科学进展表明，双歧杆菌通过与宿主的菌株依赖性相互作用，可降低黏膜抗原负荷，改善肠道屏障，且诱导局部和全身免疫应答的调节。
2、由于对人类健康的公认益处，双歧杆菌被用作益生菌。益生菌是“活的微生物，当施用足够量时，给宿主带来健康益处”(fao/who,2001)。大约12种具有临床证明效果的双歧杆菌菌株在市场上有售。其中一半是动物双歧杆菌乳酸亚种(bifidobacterium animalissubsp.lactis)菌株，且其余是长双歧杆菌长亚种(bifidobacterium longumsubsp.longum)、长双歧杆菌婴儿亚种(b.longum subsp.infantis)、青春双歧杆菌(b.adolescentis)或短双歧杆菌(bifidobacterium breve)菌株。
3、ep 0 768 375描述了双歧杆菌亚种的特定菌株，这些菌株能够植入肠道菌群，并能够竞争性地排除致病菌对肠道细胞的黏附。据报道，这些双歧杆菌有助于免疫调节，且从而维持个体的健康。双歧杆菌的免疫调节作用甚至可
4、动物双歧杆菌乳酸亚种菌株相对稳定。这使得该菌株可以方便地掺入许多产品中。
5、然而，仍然需要具有高稳定性的其他双歧杆菌菌株。
技术实现思路
0、专利技术概述
1、本专利技术涉及在其多功能微生物i型脂肪酸合酶(fas)基因中具有单核苷酸多态性的双歧杆菌变异体。这种突变与变异体在缺乏脂肪酸来源(例如聚山梨醇酯/80)的情况下生长的能力相关，并且促成了变异体与其亲本菌株相比改善的适应性(robustness)和稳定性。
2、该变异体可能是长双歧杆菌菌株，其基因中的突变导致蛋白序列第407位的氨基酸置换。这个位置的野生型精氨酸被另一个不带电荷的小氨基酸(例如甘氨酸或丝氨酸)取代。
3、根据第一方面，提供了长双歧杆菌的分离菌株，其特征在于fas基因中的精氨酸被氨基酸，甘氨酸或丝氨酸取代。
4、在一个实施方案中，长双歧杆菌的分离菌株的特征在于fas基因序列包含seq idno:1；并且它能够在缺乏外源脂肪酸来源的情况下生长。
5、在一个实施方案中，长双歧杆菌的分离菌株的特征在于fas蛋白序列包含seq idno:2；并且它能够在缺乏外源脂肪酸来源的情况下生长。
6、在一个实施方案中，分离菌株与野生型菌株相比具有低不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸比例，例如大约1:1。
7、在一个实施方案中，菌株选自长双歧杆菌长亚种(b.longum subsp.longum)bb-46、长双歧杆菌长亚种af13-34或长双歧杆菌长亚种af13-41。
8、在一个实施方案中，菌株是长双歧杆菌长亚种bb-46。
9、根据第二方面，提供了益生菌产品，其包含根据权利要求1至6中任一项所述的分离菌株和冷冻保护剂。
10、在一个实施方案中，冷冻保护剂是糖或糖醇。
11、根据第三方面，提供了根据第一方面的分离菌株或根据第二方面的益生菌产品，用于预防以下疾病、减轻以下疾病的症状和/或治疗以下疾病的方法：肠道炎性疾患例如ibd和ibs，肝病例如nafld、nash、肝硬化或酒精相关性肝病，代谢紊乱例如代谢综合征、胰岛素抵抗、2型糖尿病、肥胖症、心血管动脉粥样硬化，自身免疫性疾病例如乳糜泻、1型糖尿病、多发性硬化症或类风湿性关节炎，和/或精神疾患例如重度抑郁症、情感障碍、认知障碍、慢性疲劳综合征或焦虑症。
12、根据第四方面，提供了生产长双歧杆菌菌株的方法，其中生长培养基是不含外源脂肪酸来源(例如80)的培养基。
13、根据第五方面，预防以下疾病、减轻以下疾病的症状和/或治疗以下疾病的方法：肠道炎性疾患例如ibd和ibs，肝病例如nafld、nash、肝硬化或酒精相关性肝病，代谢紊乱例如代谢综合征、胰岛素抵抗、2型糖尿病、肥胖症、心血管动脉粥样硬化，自身免疫性疾病例如乳糜泻、1型糖尿病、多发性硬化症或类风湿性关节炎，和/或精神疾患例如重度抑郁症、情感障碍、认知障碍、慢性疲劳综合征或焦虑症，该方法包括向需要其的个体施用治疗有效剂量的根据第一方面的分离菌株或根据第二方面的益生菌产品。
14、详述
15、本专利技术涉及长双歧杆菌分离菌株，例如长双歧杆菌长亚种，其特征在于a)该菌株包含根据seq id no:1的核酸序列；或b)编码与seq id no:2具有至少90％同一性且具有seq id no:2的407位氨基酸突变的蛋白质的序列。
16、在具体实施方案中，该菌株包含编码与seq id no:2具有至少90％同一性的蛋白质的核酸序列，例如编码与seq id no:2具有至少91％同一性、至少92％同一性、至少93％同一性、至少94％同一性、至少95％同一性、至少96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性或至少99％同一性的蛋白质的序列。在一个实施方案中，该菌株包括编码seq id no:2的氨基酸序列的核苷酸序列。
17、在一个具体实施方案中，seq id no:2的407位氨基酸是甘氨酸或丝氨酸。
18、为了本专利技术的目的，使用clustal omega的序列比对方法分别对核苷酸序列(dna)或氨基酸序列(蛋白质)进行成对比对，以确定两个核苷酸序列或两个氨基酸序列之间的序列同一性程度。
19、如本文所用的细菌“菌株”是指生长或增殖时基因保持不变的细菌。包括多个相同的细菌。“野生型菌株”是指自然界中发现的细菌的非突变形式。
20、在本上下文中，术语“衍生菌株”应理解为通过例如基因工程、辐射和/或化学处理和/或选择、适应、筛选等手段从野生型菌株衍生的菌株。在具体实施方案中，衍生菌株是功能等同的突变体，例如，具有与母菌株基本相同或改善的性质(例如，关于益生菌性质)的突变体。此类衍生菌株是本专利技术的一部分。术语“衍生菌株”包括通过使本专利技术的菌株经受任何常规使用的诱变处理(包括用例如甲磺酸乙酯(ems)或n-甲基-n'-硝基-n-硝基胍(ntg)等化学诱变剂、uv光处理)而获本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)的分离菌株，其特征在于所述野生型脂肪酸合酶(FAS)基因中的精氨酸被替换为选自甘氨酸和丝氨酸的氨基酸。
2.一种长双歧杆菌的分离菌株，其特征在于
3.一种长双歧杆菌的分离菌株，其特征在于
4.根据权利要求1所述的分离菌株，其与野生型菌株相比具有低的不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸比例，例如1:1。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的分离菌株，其选自长双歧杆菌长亚种(B.longumsubsp.longum)BB-46、长双歧杆菌长亚种AF13-34或长双歧杆菌长亚种AF13-41。
6.根据权利要求5所述的分离菌株，其是保藏为DSM 15955的长双歧杆菌长亚种BB-46。
7.一种益生菌产品，其包含根据权利要求1至6中任一项所述的分离菌株和冷冻保护剂。
8.根据权利要求7所述的益生菌产品，其中所述冻存保护剂是糖。
9.根据权利要求1至6中任一项所述的分离菌株或一种根据权利要求7或8所述的益生菌产品，其用于预防以下疾病、减轻以
10.一种生产根据前述权利要求中任一项所述的长双歧杆菌菌株的方法，其中生长培养基是没有外源脂肪酸来源例如80的培养基。
11.一种用于预防以下疾病、减轻以下疾病的症状和/或治疗以下疾病的方法：肠道炎性疾患例如IBD和IBS，肝病例如NAFLD、NASH、肝硬化或酒精相关性肝病，代谢紊乱例如代谢综合征、胰岛素抵抗、2型糖尿病、肥胖症、心血管动脉粥样硬化，自身免疫性疾病例如乳糜泻、1型糖尿病、多发性硬化症或类风湿性关节炎，和/或精神疾患例如重度抑郁症、情感障碍、认知障碍、慢性疲劳综合征或焦虑症，所述方法包括向需要其的个体施用治疗有效剂量的根据权利要求1至6中任一项所述的分离菌株或根据权利要求7或8所述的益生菌产品。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种长双歧杆菌(bifidobacterium longum)的分离菌株，其特征在于所述野生型脂肪酸合酶(fas)基因中的精氨酸被替换为选自甘氨酸和丝氨酸的氨基酸。
2.一种长双歧杆菌的分离菌株，其特征在于
3.一种长双歧杆菌的分离菌株，其特征在于
4.根据权利要求1所述的分离菌株，其与野生型菌株相比具有低的不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸比例，例如1:1。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的分离菌株，其选自长双歧杆菌长亚种(b.longumsubsp.longum)bb-46、长双歧杆菌长亚种af13-34或长双歧杆菌长亚种af13-41。
6.根据权利要求5所述的分离菌株，其是保藏为dsm 15955的长双歧杆菌长亚种bb-46。
7.一种益生菌产品，其包含根据权利要求1至6中任一项所述的分离菌株和冷冻保护剂。
8.根据权利要求7所述的益生菌产品，其中所述冻存保护剂是糖。
9.根据权利要求1至6中任一项所述的分离菌株或一种根据权利要求7或8所述的益生菌产品，其用于预防以下疾病、...
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