【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种包含至少一个cd123结合域和结合人la表位e5b9的标签结合域的靶向模块，一种包含编码靶向模块的核苷酸序列的核酸、载体或细胞，一种包含靶向模块和包含编码可逆嵌合抗原受体的核苷酸序列的载体或细胞的药物组合物和试剂盒。
技术介绍
1、嵌合抗原受体(car)是由提供抗原特异性的结合部分和一条或几条源自免疫受体的信号传导链组成的人工受体(cartellieri等人，2010年)。经过基因修饰而能够表达嵌合抗原受体(car)的免疫细胞，可用于与带有car结合部分的合适靶标所对应的细胞或组织结构相结合。交联作用会通过嵌合抗原受体(car)的信号传导链诱导信号通路，这将改变移植car的免疫细胞的生物学特性。相反地，经基因修饰的调节性t细胞(tregs)中的car活化可引起treg特异性免疫调节和抑制机制，如白介素(il)-10或肿瘤生长因子-β(tgf-β)的分泌。目前，用嵌合抗原受体(car)工程改造的免疫细胞进行过继转移被认为是一种非常有前景的治疗选择，可用于治疗原本无法治愈的恶性肿瘤、传染病或自身免疫性疾病。
2、然而，传统的car技术伴随着许多关键问题，在这种治疗形式可以广泛应用于临床治疗之前，需要解决这些问题。首先，必须解决几个安全问题。到目前为止，用传统car工程改造的t细胞在输注到患者体内后的免疫反应很难控制，严重不良事件率很高(titov等人，2018年)。特别是正常组织上意外的靶基因表达可能引发经工程改造的t细胞对正常细胞的快速且强烈的免疫反应，这可能导致严重的副作用(morgan等人，201
3、模块可切换“通用”car t(unicar)方法可以通过将car的抗原识别域和活化结构域分成两个独立的操作单元来克服这些限制。t细胞经工程改造以表达具有识别标签的通用结合域的car(cartellieri等人，2016年)。抗原特异性由可溶性衔接蛋白提供，这些可溶性衔接蛋白由与通用car识别的标签融合的抗原结合域组成。cartellieri等人描述了体外和体内治疗cd33和/或cd123阳性急性骨髓性白血病细胞。
4、除了用于识别各种抗原的unicar方法(ep 2 990 416 a1)之外，还已知一种反向通用car(revcar)方法，该方法经由包含标签结合域和靶细胞结合域的衔接分子促进经工程改造以表达包含标签的revcar的免疫细胞与靶细胞的结合(ep 3 581 200 a1)。ep 3581 200a1公开了细胞外la/ssb衍生的标签以及包含cd123 scfv和与标签(5b9或7b6)结合的scfv的衔接分子，添加该衔接分子以桥接car和肿瘤细胞，从而产生抗原特异性细胞毒性。
5、darowski等人描述了用于募集嵌合抗原受体t细胞的柔性嵌合抗原受体衔接分子(car衔接子)，这些嵌合抗原受体t细胞具有标签如5b9、gcn4、fitc、亮氨酸拉链序列或生物素化的igg，以及靶标如cd33、cd123、cd19、cd20、cd22、her2、egfr、ccr4、g2d、mcsp、erbb2(darowski等人，2019年)。
6、feldmann等人公开了revcar t细胞有效地杀死肿瘤细胞，通过更换靶向模块，特别是针对psma和psca的靶向模块，灵活地针对多个靶标再次定向(feldmann等人，2020年)。
7、kittel-boselli等人描述了使用revcar平台靶向急性骨髓性白血病，特别是表达cd33和cd123的患者来源的aml细胞，其中revcar由细胞外肽表位e5b9或e7b6和cd28(28)铰链结构域(hid)、cd28跨膜结构域(tmd)、细胞内cd28共刺激结构域(csd)和cds zeta(3z)活化信号传导结构域(asd)组成(kittel-boselli等人，2021年)。靶向模块用衍生自单克隆抗体(mab)cd33、cd123、5b9或7b6的可变重链(vh)和轻链(vl)结构域构建，通过甘氨酸(g)-丝氨酸(s)接头连接。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种用于revcar系统的改进的靶向模块。
2、本专利技术通过包含至少一个cd123结合域和包含vl-接头-vh结构的结合人la表位e5b9的标签结合域的靶向模块实现。
3、本专利技术的靶向模块包含
4、i)至少一个cd123结合域，其包含与seq id no.22和seq id no.23具有至少95％一致性，或至少99％一致性的序列，和
5、ii)包含vl-接头-vh结构的结合人la表位e5b9的标签结合域，其中标签结合域的vl区包含与seq id no.19的序列具有至少95％一致性，或至少99％一致性的序列，和/或标签结合域的vh区包含与seq id no.20的序列具有至少95％一致性，或至少99％一致性的序列。
6、本说明书中，术语“靶向模块”是指具有至少两个不同结构域的分子，优选多肽或蛋白质，其中每个结构域分别对一个靶标或一组相同的靶标具有特异性，其中至少一个结构域对靶细胞具有特异性，特别是cd123结合域；并且一个结构域对可逆嵌合抗原受体，特别是标签结合域具有特异性。在某些实施例中，靶向模块是分离的。在某些实施例中，本专利技术的靶向模块被表达为重组蛋白。在某些实施例中，靶向模块是化学合成的。
7、术语“自身免疫性疾病”是指身体对体内正常存在的物质和组织的异常免疫反应(自身免疫)。
8、术语“结构域”是指蛋白质序列的一部分，其可以独立于蛋白质的其余部分存在并发挥功能。
9、术语“vl-接头-vh结构”是指一种结构，其中vl区的c端与接头连接，接头与vh区的n端连接。
10、术语“接头”(也称为间隔子)是指一种分隔至少两个要素的分子或分子部分，要素选自官能团、标签、结合域或结合域亚基，诸如vl和vh结构域。
11、术语“特异性”是指抗体或抗体片段或蛋白质、肽或低分子量有机配体识别并结合样品中存在的结合伴侣(例如肿瘤抗原)蛋白，但基本上不识别或结合样品中其他分子的能力。
12、术语“结合”是指非共价结合，特别是离子键、氢键、范德华力(van der waalsforce本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种靶向模块，其包含
2.根据权利要求1所述的靶向模块，其中
3.根据权利要求1或2所述的靶向模块，其中所述标签结合域的接头包含20至30个氨基酸，优选25个氨基酸。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的靶向模块，其中所述标签结合域的接头包含如SEQID No.25或SEQ ID No.26所示的序列之一的接头。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的靶向模块，其中所述CD123结合域是抗体或抗原结合片段。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的靶向模块，其中所述CD123结合域包含如SEQIDNo.27所示的序列。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的靶向模块，其中所述靶向模块的长度在500至800个氨基酸范围内。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的靶向模块，其包含如SEQ ID No.3至SEQ IDNo.10所示序列的其中一条序列。
9.一种核酸、载体或细胞，其包含编码根据权利要求1至8中任一项所述的靶向模块的核苷酸序列。
10.根据权利要求9所述的核酸、载体或细胞
11.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至8中任一项所述的靶向模块和药学上可接受的稀释剂或载体。
12.根据权利要求1至8中任一项所述的靶向模块，包含编码根据权利要求1至8中任一项所述的靶向模块的核苷酸序列的核酸、载体或细胞，或包含根据权利要求1至8中任一项所述的靶向模块和药学上可接受的稀释剂或载体的药物组合物，其用于刺激哺乳动物的嵌合抗原受体介导的免疫反应的方法中，或用于治疗癌症、传染病或自身免疫性疾病。
13.根据权利要求12所述的用于刺激哺乳动物的嵌合抗原受体介导的免疫反应的方法中的靶向模块，
14.根据权利要求12所述的用于刺激哺乳动物的嵌合抗原受体介导的免疫反应的方法中的药物组合物，其还包括包含编码可逆嵌合抗原受体的核苷酸序列的载体或细胞，其中所述可逆嵌合抗原受体包含
15.一种试剂盒，其包含
16.根据权利要求15所述的试剂盒，其中所述细胞外铰链和跨膜结构域选自下列之一：人CD28分子的铰链和跨膜结构域、CD8a链、NK细胞受体、抗体恒定区的部分，及上述结构域之间的组合。
17.根据权利要求15或16所述的试剂盒，其中所述信号转导结构域选自下列之一：CD28、CD137(4-1BB)、CD134(OX40)、CD278(ICOS)、DAP10和CD27的胞质区、程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)、细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA-4)、CD3链的胞质区、DAP12、CD122(白介素-2受体β)、CD132(白介素-2受体γ)、CD127(白介素-7受体α)、CD360(白介素-21受体)、活化Fc受体，及上述各结构域的突变体。
18.根据权利要求15至17中任一项所述的试剂盒，其还包含至少一种其他靶向模块或编码所述其他靶向模块的核酸、载体或细胞，
19.根据权利要求15至18中任一项所述的试剂盒，其中所述靶向模块和/或所述包含编码可逆嵌合抗原受体的核苷酸序列的载体或细胞为药物组合物的形式。
20.根据权利要求15至19中任一项所述的试剂盒，其用于刺激哺乳动物的嵌合抗原受体介导的免疫反应的方法中，优选用于治疗癌症、传染病或自身免疫性疾病。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种靶向模块，其包含
2.根据权利要求1所述的靶向模块，其中
3.根据权利要求1或2所述的靶向模块，其中所述标签结合域的接头包含20至30个氨基酸，优选25个氨基酸。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的靶向模块，其中所述标签结合域的接头包含如seqid no.25或seq id no.26所示的序列之一的接头。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的靶向模块，其中所述cd123结合域是抗体或抗原结合片段。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的靶向模块，其中所述cd123结合域包含如seqidno.27所示的序列。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的靶向模块，其中所述靶向模块的长度在500至800个氨基酸范围内。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的靶向模块，其包含如seq id no.3至seq idno.10所示序列的其中一条序列。
9.一种核酸、载体或细胞，其包含编码根据权利要求1至8中任一项所述的靶向模块的核苷酸序列。
10.根据权利要求9所述的核酸、载体或细胞，其包含如seq id no.11至seq id no.18所示所示序列的其中一条序列。
11.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至8中任一项所述的靶向模块和药学上可接受的稀释剂或载体。
12.根据权利要求1至8中任一项所述的靶向模块，包含编码根据权利要求1至8中任一项所述的靶向模块的核苷酸序列的核酸、载体或细胞，或包含根据权利要求1至8中任一项所述的靶向模块和药学上可接受的稀释剂或载体的药物组合物，其用于刺激哺乳动物的嵌合抗原受体介导的免疫反应的方法中，或用于治疗癌症...
【专利技术属性】
技术研发人员：约翰内斯·斯佩尔，阿尔明·恩宁格尔，
申请(专利权)人：艾威赛尔生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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