【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程，具体涉及一株杂交瘤细胞株1d6及其单克隆抗体和应用。
技术介绍
1、小麦光腥黑穗病是由光腥黑粉菌引起的一种毁灭性植物真菌病害。小麦光腥黑粉菌侵染小麦后，会导致麦穗变黑、籽粒皱缩，严重影响小麦的产量和品质。据统计，感染光腥黑穗病的小麦产量可降低20%-30%，严重时可达到50%以上。受感染的籽粒在加工过程中会释放三甲胺，产生强烈的鱼腥味，导致面粉无法食用，严重降低其经济价值。此外，病原菌孢子具有极强的环境耐受性和传播能力，能在土壤中可存活多年，易造成病害的反复爆发和大范围扩散。
2、目前，光腥黑穗病的检测方法主要包括形态学鉴定、分子生物学检测和免疫学检测等。形态学鉴定依赖于显微镜观察孢子的形态特征，但该方法耗时且准确性受操作者经验影响。分子生物学方法（如pcr、qpcr）具有较高的灵敏度和特异性，但存在操作复杂，依赖专业人员、耗时长等问题。传统的免疫学检测方法也存在一些缺点，如：对于某些低浓度或复杂样本中的目标分子，其检测灵敏度可能不够；由于交叉反应的存在，传统免疫检测可能会出现假阳性或假阴性的结果，影响检测的特异性。现有光腥黑穗病检测方法中共有问题是目标物提取困难和检测灵敏度不够。
3、利用单碱基序列的dna单链作为质谱免疫检测的质量标签，在核酸序列被标记到单克隆抗体上后，通过核酸外切酶与碱性磷酸酶将dna核酸链酶解为单个碱基，通过液相色谱-串联质谱方法检测酶解后碱基的浓度，从而实现目标物的定量，小麦光腥黑穗病对全球小麦生产构成严重威胁，开发快速、准确的检测方法对病害防控至关重要。
4、在单碱基序列dna单链与单克隆抗体结合的技术探索中，我们面临几项关键性挑战：首先是实现高效的定向偶联，其次是确保结合的稳定性，再次是提升信号放大能力，此外还包括规模化生产的可行性以及在不同复杂场景下的适配性问题。要攻克这些难题，必须融合材料科学、分子生物学和工程学等多学科技术，进行综合性的创新与突破。
技术实现思路
1、专利技术目的：本专利技术所要解决的技术问题是提供了一株杂交瘤细胞株1d6。
2、本专利技术还要解决的技术问题是提供了所述的杂交瘤细胞株在制备抗光腥黑粉菌的单克隆抗体中的应用。
3、本专利技术还要解决的技术问题是提供了一种抗光腥黑粉菌的单克隆抗体。
4、本专利技术还要解决的技术问题是提供了抗光腥黑粉菌的单克隆抗体在光腥黑粉菌冬孢子检测中的应用。
5、本专利技术还要解决的技术问题是提供了一种单碱基序列dna单链标记光腥黑粉菌单克隆抗体。
6、本专利技术还要解决的技术问题是提供了一种检测试剂盒。
7、本专利技术最后要解决的技术问题是提供了一种能够高灵敏、高特异性检测光腥黑粉菌冬孢子的检测方法。
8、技术方案：本专利技术提供了一株杂交瘤细胞株1d6，所述杂交瘤细胞株1d6于2024年10月22日保藏于中国典型培养物保藏中心（cctcc），其分类命名为抗光腥黑粉菌的单克隆抗体的杂交瘤细胞株1d6 monoclonal antibody hybridoma cell line against tilletia foetida1d6，保藏编号为cctcc no:c2024295，保藏单位地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内，邮编：430072。
9、本
技术实现思路
还包括所述的杂交瘤细胞株1d6在制备抗光腥黑粉菌的单克隆抗体中的应用。
10、本
技术实现思路
还包括一种抗光腥黑粉菌的单克隆抗体，所述抗光腥黑粉菌的单克隆抗体是由所述的杂交瘤细胞株1d6分泌得到。
11、其中，所述抗光腥黑粉菌的单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括氨基酸序列如seq id no.1所示的cdrh1、氨基酸序列如seq id no.2所示的cdrh2和氨基酸序列如seq id no.3所示的cdrh3，所述轻链可变区包括氨基酸序列如seqid no.4所示的cdrl1、氨基酸序列为sas的cdrl2和氨基酸序列如seq id no.5所示的cdrl3。
12、其中，所述重链可变区的氨基酸序列为seq id no.6所示，所述轻链可变区氨基酸序列为seq id no.7所示。
13、其中，所述重链的核苷酸序列为seq id no.8所示，所述轻链的核苷酸序列为seqid no.9所示。
14、其中，所述重链的氨基酸序列为seq id no.10所示，所述轻链的氨基酸序列为seqid no.11所示。
15、本
技术实现思路
还包括所述的抗光腥黑粉菌的单克隆抗体在光腥黑粉菌冬孢子检测中的应用。
16、本
技术实现思路
还包括一种单碱基序列dna单链修饰光腥黑粉菌的单克隆抗体，其含有所述的抗光腥黑粉菌的单克隆抗体。
17、本
技术实现思路
还包括一种检测试剂盒，其包括所述的抗光腥黑粉菌的单克隆抗体或所述的单碱基序列dna单链标记光腥黑粉菌的单克隆抗体。
18、本
技术实现思路
还包括一种检测光腥黑粉菌冬孢子的检测方法，具体包括如下步骤：
19、1）在纳米免疫磁珠中加入不同浓度的含有小麦光腥黑粉菌冬孢子溶液孵育得到不同浓度的免疫磁珠-冬孢子的复合物体系溶液，
20、2）将单碱基序列dna单链修饰光腥黑粉菌的单克隆抗体得到dna链修饰抗体；
21、3）将dna链修饰抗体分别与步骤1）的不同浓度的免疫磁珠-冬孢子的复合物体系孵育反应，从而得到免疫磁珠-冬孢子-dna链修饰抗体溶液；
22、4）在免疫磁珠-冬孢子-dna链修饰抗体溶液中加入dna外切酶exonuclease i与碱性磷酸酶溶液混合反应，反应结束后，收集上清溶液，并对单碱基序列进行检测反，从而得到小麦光腥黑粉菌冬孢子的浓度与腺嘌呤单碱基序列检测信号的标准曲线；
23、5）将含有光腥黑粉菌冬孢子的待测溶液加入纳米免疫磁珠孵育得到待测溶液，将dna链修饰抗体、dna外切酶exonuclease i与碱性磷酸酶溶液加入到待测溶液中混合反应，检测腺嘌呤单碱基序列的信号，将其带入标准曲线的线性方程进行计算，即得对应的小麦光腥黑粉菌冬孢子的浓度。
24、有益效果：与现有技术相比，本专利技术具备以下优点：本专利技术的抗光腥黑粉菌的单克隆抗体在光腥黑粉菌冬孢子检测中的应用，为小麦光腥黑穗病的早期诊断和防控提供了强有力的工具。本专利技术的单克隆抗体能够特异性地识别光腥黑粉菌冬孢子，大大提高了检测的准确性和效率，有助于及时采取防治措施，减少农业生产损；本专利技术的单碱基序列dna单链标记技术结合该单克隆抗体进行光腥黑粉菌冬孢子的检测，进一步增强了检测信号本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一株杂交瘤细胞株1D6，其特征在于，所述杂交瘤细胞株1D6于2024年10月22日保藏于中国典型培养物保藏中心，其分类命名为抗光腥黑粉菌的单克隆抗体杂交瘤细胞株1D6Monoclonal antibody hybridoma cell line against Tilletia foetida 1D6，保藏编号为CCTCC NO:C2024295。
2.权利要求1所述的杂交瘤细胞株1D6在制备抗光腥黑粉菌的单克隆抗体中的应用。
3.一种抗光腥黑粉菌的单克隆抗体，其特征在于，所述抗光腥黑粉菌的单克隆抗体是由权利要求1所述的杂交瘤细胞株1D6分泌得到。
4.根据权利要求3所述的抗光腥黑粉菌的单克隆抗体，其特征在于，所述抗光腥黑粉菌的单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示的CDRH1、氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的CDRH2和氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的CDRH3，所述轻链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示的CDRL1、氨基酸序列为SAS的CDRL2和氨基酸
5.根据权利要求4所述的抗光腥黑粉菌的单克隆抗体，其特征在于，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.6所示，所述轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO.7所示。
6.根据权利要求4所述的抗光腥黑粉菌的单克隆抗体，其特征在于，所述重链的核苷酸序列为SEQ ID NO.8所示，所述轻链的核苷酸序列为SEQ ID NO.9所示。
7.根据权利要求4所述的抗光腥黑粉菌的单克隆抗体，其特征在于，所述重链的氨基酸序列为SEQ ID NO.10所示，所述轻链的氨基酸序列为SEQ ID NO.11所示。
8.权利要求3~7任一项所述的抗光腥黑粉菌的单克隆抗体在光腥黑粉菌冬孢子检测中的应用。
9.一种单碱基序列DNA单链修饰光腥黑粉菌单克隆抗体，其特征在于，其含有权利要求3~7任一项所述的抗光腥黑粉菌的单克隆抗体。
10.一种检测试剂盒，其特征在于，其包括权利要求3~7任一项所述的抗光腥黑粉菌的单克隆抗体或权利要求9所述的单碱基序列DNA单链修饰光腥黑粉菌单克隆抗体。
...【技术特征摘要】
1.一株杂交瘤细胞株1d6，其特征在于，所述杂交瘤细胞株1d6于2024年10月22日保藏于中国典型培养物保藏中心，其分类命名为抗光腥黑粉菌的单克隆抗体杂交瘤细胞株1d6monoclonal antibody hybridoma cell line against tilletia foetida 1d6，保藏编号为cctcc no:c2024295。
2.权利要求1所述的杂交瘤细胞株1d6在制备抗光腥黑粉菌的单克隆抗体中的应用。
3.一种抗光腥黑粉菌的单克隆抗体，其特征在于，所述抗光腥黑粉菌的单克隆抗体是由权利要求1所述的杂交瘤细胞株1d6分泌得到。
4.根据权利要求3所述的抗光腥黑粉菌的单克隆抗体，其特征在于，所述抗光腥黑粉菌的单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括氨基酸序列如seq idno.1所示的cdrh1、氨基酸序列如seq id no.2所示的cdrh2和氨基酸序列如seq id no.3所示的cdrh3，所述轻链可变区包括氨基酸序列如seq id no.4所示的cdrl1、氨基酸序列为sas的cdrl2和氨基酸...
【专利技术属性】
技术研发人员：张驰，梅秀明，杨淼，强雨薇，纪晗旭，吴肖肖，李雨枫，徐婧婧，蒋迪尧，
申请(专利权)人：南京市产品质量监督检验院南京市质量发展与先进技术应用研究院，
类型：发明
国别省市：
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