【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种组胺二盐酸盐的酶法制备方法，属于生物化学。
技术介绍
0、技术背景
1、组胺二盐酸盐，cas 56-92-8，白色固体，熔点249-252℃。其具有极强生物活性，也是一种重要的药物中间体和添加剂。组胺二盐酸盐用于持续缓解和防止急性髓细胞样白血病(aml)成人患者首次缓解治疗后复发。该药能够减少自吞噬细胞产生的氧基，抑制烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸氧化酶和防止白介素-2激活nk细胞和t细胞。组胺二盐酸盐注射剂获准上市是基于其与白介素-2联合用药完全缓解显著降低了aml患者复发。接受ceplene/白介素-2联合用药治疗患者长期无白血病比例大于50％，而且患者对本品耐受性好。因此，组胺及组胺类化合物的合成成为了当年研究的热点问题。组胺上存在两个可成盐的氨基，因此形成较为稳定的组胺二盐酸盐。
2、chemistry letters,1986,893-896公开了合成采用l-组氨酸为原料，经过脱羧、成盐步骤得到组胺二盐酸盐，采用反应方程式表示如下：
3、
4、该合成方法最早在中发表，其是以2-环己烯-1-酮为催化剂，160℃脱羧，但整体反应杂质较多，并不适合实际生产。
5、jp05255204以苯乙酮为催化剂/二甘醇为溶剂反应；cn1008594a专利申请以2,4-二羟基苯甲酮进行脱羧，产物同样含有较多未知杂质，不适合药用级别生产。
6、cn102477014a采用对甲基苯乙酮为催化剂在甲基环己醇170-175℃反应制备组胺，通过滴加氯化氢/甲基环己醇溶
7、cn104402825a采用催化剂溴化亚铜降低脱羧温度至100-110℃，可减少未知杂质的种类和含量，提高原料转化率。
8、cn106432089a以组氨酸为起始原料，在碱性条件下经强氯精氧化制备出腈甲基咪唑中间体，而后经过催化氢化和成盐制备出产物，该方法需要10mpa压力，或者雷尼镍和水合肼联用，危险性都相对很高。
9、综上所述，目前研发重点都集中在脱羧催化剂和配合的溶剂上，通过寻找不同的反应体系来提高反应纯度，降低反应温度，但总体来说上述方法都存在反应体系复杂，原料成本高，最终导致工艺繁琐，提纯困难，难以用于工业化生产的问题。
技术实现思路
1、为了克服上述技术缺陷，本专利技术的目的是提供生物酶方法来制备组胺二盐酸盐。即本专利技术提供了一个组氨酸脱羧酶的氨基酸序列，同时提供利用该酶来制备组胺二盐酸盐的工艺方法，进一步推动组胺二盐酸盐的产业化生产。
2、本专利技术方法以l-组氨酸为底物，以组氨酸脱羧酶突变体为生物催化剂，在合适的酶催化反应条件下，将底物脱羧转化成组胺，最后经过适当提取纯化工艺提取得到组胺二盐酸盐。其中，酶催化反应底物转化率达到99％以上，产物提取后纯度＞98％。这种酶催化方法具有转化率高，转化时间短，易于提取纯化等优点，具有极大的工业化前景。该方法具有高转化率和高收率的优点，得到的产品具备市场竞争优势。
3、本专利技术所述一种组氨酸脱羧酶突变体，所述突变体是将来源于发光杆菌属(photobacterium sp.)野生型组氨酸脱羧酶氨基酸序列(seq id no.2所示)第47位异亮氨酸和第340位半胱氨酸进行双突变获得。
4、进一步地，在上述技术方案中，所述组氨酸脱羧酶突变体序列如seq id no.3所示。
5、本专利技术还提供了上述组氨酸脱羧酶突变体序列构建的重组表达载体。
6、本专利技术还提供了上述重组表达载体转化制备的重组基因工程菌。
7、本专利技术还提供了上述组氨酸脱羧酶突变体在催化l-组氨酸制备组胺二盐酸盐的应用。
8、进一步地，在上述技术方案中，以粗酶液为生物催化剂，以l-组氨酸为底物，在ph＝6.5反应体系中进行酶催化反应。
9、进一步地，在上述技术方案中，含组氨酸脱羧酶突变体编码基因的重组工程菌经iptg诱导培养得到全细胞湿菌体，将菌体细胞经超声破碎后得到粗酶液。
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1.一种组氨酸脱羧酶突变体，其特征在于：所述突变体是将来源于发光杆菌属(Photobacterium sp.)野生型组氨酸脱羧酶氨基酸序列(SEQ ID NO.2所示)第47位异亮氨酸和第340位半胱氨酸进行双突变获得。
2.根据权利要求1所述组氨酸脱羧酶突变体，其特征在于：组氨酸脱羧酶突变体序列如SEQ ID NO.3所示。
3.一种由权利要求1或2所述组氨酸脱羧酶突变体序列构建的重组表达载体。
4.一种由权利要求3所述重组表达载体转化制备的重组基因工程菌。
5.如权利要求1或2所述组氨酸脱羧酶突变体在催化L-组氨酸制备组胺二盐酸盐的应用。
6.根据权利要求5所述组氨酸脱羧酶突变体在催化L-组氨酸制备组胺二盐酸盐的应用，其特征在于：以粗酶液为生物催化剂，以L-组氨酸为底物，在pH＝6.5反应体系中进行酶催化反应。
7.根据权利要求6所述组氨酸脱羧酶突变体在催化L-组氨酸制备组胺二盐酸盐的应用，其特征在于：含组氨酸脱羧酶突变体编码基因的重组工程菌经IPTG诱导培养得到全细胞湿菌体，将菌体细胞经超声破碎后得到粗
...【技术特征摘要】
1.一种组氨酸脱羧酶突变体，其特征在于：所述突变体是将来源于发光杆菌属(photobacterium sp.)野生型组氨酸脱羧酶氨基酸序列(seq id no.2所示)第47位异亮氨酸和第340位半胱氨酸进行双突变获得。
2.根据权利要求1所述组氨酸脱羧酶突变体，其特征在于：组氨酸脱羧酶突变体序列如seq id no.3所示。
3.一种由权利要求1或2所述组氨酸脱羧酶突变体序列构建的重组表达载体。
4.一种由权利要求3所述重组表达载体转化制备的重组基因工程菌。...
【专利技术属性】
技术研发人员：马士忠，周航成，
申请(专利权)人：上海瀚鸿科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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