【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医学，尤其涉及一种天然携带荧光聚多巴胺纳米颗粒的外泌体体系的制备方法。
技术介绍
1、系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,sle)是一种全身性多系统自身免疫性疾病，其特征是存在针对核抗原的自身抗体、免疫复合物沉积以及皮肤、关节和肾脏等经典靶器官的慢性炎症。尽管系统性红斑狼疮的诊断和治疗取得了巨大进步，但疾病负担仍然很高。了解典型表现和诊断过程对于促进患者早期转诊和诊断非常重要。对于大多数患者来说，最早的主诉是全身症状、皮肤粘膜症状和肌肉骨骼症状。这些症状可能包括疲劳、狼疮特异性皮疹、口腔溃疡、脱发、关节疼痛和肌痛。目前糖皮质激素、抗疟药、环磷酰胺和甲氨蝶呤等已广泛用于sle患者的治疗,然而此类药物并不能完全控制疾病,并且长期使用可能会导致严重毒性反应和并发症。此外,生物制剂如贝利木单抗、利妥昔单抗等已被用于治疗sle。然而生物制剂目前在sle中疗效有限,可能导致严重血液系统副作用,以及高昂的价格令患者难以负担。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了解决现有技术中生物制剂目前在sle中疗效有限,可能导致严重血液系统副作用,以及高昂的价格令患者难以负担的技术问题。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
3、一种天然携带荧光聚多巴胺纳米颗粒的外泌体体系的制备方法，包括以下步骤：
4、s1：制备荧光pda：
5、将盐酸多巴胺溶于ph为8.5的tris-hcl溶液中，磁
6、s2：制备外泌体：
7、培养巨噬细胞，并诱导成m2，同时加入s1中制备的荧光pda，使用无外泌体血清配置的完全培养基进行培养，取上清，使用超速离心法获得外泌体体系。
8、优选的，所述s1中反应温度均为22℃-28℃。
9、优选的，所述s1中搅拌器搅拌反应时长为2min，加入谷胱甘肽后反应时间为2h，加入dntb后反应时间为1h。
10、优选的，所述s1中透析时间为24h，透析使用1000da的透析袋进行使用。
11、优选的，所述s2中超速离心法为密度梯度超速离心法。
12、优选的，所述密度梯度超速离心法具体步骤如下
13、以300×g离心15分钟，取上清；
14、以2000×g离心15分钟，取上清；
15、10000×g离心30分钟，取上清；
16、150000×g，持续离心90分钟，去掉上清，留下的沉淀pbs重悬后，用0.22μm的滤器过滤，以获得天然携带荧光聚多巴胺纳米颗粒外泌体。
17、优选的，所述s2中加入荧光pda后，当细胞汇合密度达到70％以上，用pbs洗涤细胞2-3遍去除残留牛血清，再使用无外泌体血清配置的完全培养基进行培养，培养时长为24h。
18、本申请还提供了一种天然携带荧光聚多巴胺纳米颗粒的外泌体体系，所述外泌体体系使用上述所述的制备方法制备获得。
19、优选的，包括包括荧光聚多巴胺、外泌体及抗炎成分。
20、本申请还提供了一种如上述所述的天然携带荧光聚多巴胺纳米颗粒的外泌体体系在制备减轻系统性红斑狼疮验证水平的产品中的应用。
21、与现有技术相比，本申请具备以下有益效果：
22、本专利技术提供一种天然携带荧光聚多巴胺纳米颗粒的外泌体体系的制备方法，该外泌体在sle治疗中具有独特的优势，其半衰期长，在体内存在较长时间，可以在4℃和-20℃下短期储存，或在-80℃长期保存，外泌体可以在细胞之间运输蛋白质和核酸，保护它们在进入细胞时不被降解，它是体内各种细胞分泌产生的膜囊泡，失活后被酶分解，不会长期大量积累，毒副作用小，并且足够小，可以穿过生物膜，甚至有能力穿过血脑屏障(blood-brainbarrier,bbb)和血脑脊液屏障(blood-cerebrospinal fluidbarrier,bcsfb)等。
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1.一种天然携带荧光聚多巴胺纳米颗粒的外泌体体系的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种天然携带荧光聚多巴胺纳米颗粒的外泌体体系的制备方法，其特征在于：所述S1中反应温度均为22℃-28℃。
3.根据权利要求2所述的一种天然携带荧光聚多巴胺纳米颗粒的外泌体体系的制备方法，其特征在于：所述S1中搅拌器搅拌反应时长为2min，加入谷胱甘肽后反应时间为2h，加入DNTB后反应时间为1h。
4.根据权利要求3所述的一种天然携带荧光聚多巴胺纳米颗粒的外泌体体系的制备方法，其特征在于：所述S1中透析时间为24h，透析使用1000Da的透析袋进行使用。
5.根据权利要求4所述的一种天然携带荧光聚多巴胺纳米颗粒的外泌体体系的制备方法，其特征在于：所述S2中超速离心法为密度梯度超速离心法。
6.根据权利要求5所述的一种天然携带荧光聚多巴胺纳米颗粒的外泌体体系的制备方法，其特征在于：所述密度梯度超速离心法具体步骤如下
7.根据权利要求6所述的一种天然携带荧光聚多巴胺纳米颗粒的外泌体体系的制备方法，其特
8.一种天然携带荧光聚多巴胺纳米颗粒的外泌体体系，其特征在于：所述外泌体体系使用权利要求1-7任意一项所述的制备方法制备获得。
9.根据权利要求8所述的一种天然携带荧光聚多巴胺纳米颗粒的外泌体体系，其特征在于：包括包括荧光聚多巴胺、外泌体及抗炎成分。
10.一种如权利要求8所述的天然携带荧光聚多巴胺纳米颗粒的外泌体体系在制备减轻系统性红斑狼疮验证水平的产品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种天然携带荧光聚多巴胺纳米颗粒的外泌体体系的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种天然携带荧光聚多巴胺纳米颗粒的外泌体体系的制备方法，其特征在于：所述s1中反应温度均为22℃-28℃。
3.根据权利要求2所述的一种天然携带荧光聚多巴胺纳米颗粒的外泌体体系的制备方法，其特征在于：所述s1中搅拌器搅拌反应时长为2min，加入谷胱甘肽后反应时间为2h，加入dntb后反应时间为1h。
4.根据权利要求3所述的一种天然携带荧光聚多巴胺纳米颗粒的外泌体体系的制备方法，其特征在于：所述s1中透析时间为24h，透析使用1000da的透析袋进行使用。
5.根据权利要求4所述的一种天然携带荧光聚多巴胺纳米颗粒的外泌体体系的制备方法，其特征在于：所述s2中超速离心法为密度梯度超速离心法。
6.根据权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱玉娟，顾志峰，叶汇源，董晨，
申请(专利权)人：南通大学附属医院，
类型：发明
国别省市：
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