【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学，具体涉及一种用于评估非小细胞肺癌对铁死亡及免疫治疗敏感性的试剂盒。
技术介绍
1、肺癌作为最为常见、死亡率最高的肿瘤，发病率和死亡率均排名所有肿瘤第一位。肺癌主要分为非小细胞肺癌和小细胞肺癌，其中非小细胞肺癌是最常见的一种亚型。近年来，免疫治疗被广泛应用到非小细胞肺癌的诊治中：通过免疫检查点抑制剂激活肿瘤微环境中免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤作用，从而达到消灭肿瘤、延长患者生存的作用，为非小细胞肺癌患者带来福音。但是，只有一部分患者能从免疫治疗中获益，而许多患者仍存在免疫治疗抵抗的问题。因此，目前亟需一系列可靠的生物标记物来辅助临床医生预判非小细胞肺癌患者对免疫治疗的敏感程度，对提高患者的治疗效果、减轻社会的负担有极为重要的意义。
2、目前，已有部分报道提出一些可能的生物标志物(如肿瘤突变负荷等)用于预判非小细胞肺癌患者对免疫治疗的敏感性，但由于检测流程繁琐、准确率低、仅在细胞或动物模型中验证等原因，其在临床上的应用仍十分受限，仍需开发具备更高敏感性、特异性和应用价值的标志物应用于非小细胞肺癌患者个体化免疫治疗。
3、铁死亡(ferroptosis)最早由哥伦比亚大学dr.brent r.stockwell在2012年提出，是一种铁依赖性的，区别于细胞凋亡、细胞坏死、细胞焦亡的一种新型程序性死亡方式，其主要机制是，外界刺激通过诱导细胞内活性氧(ros)平衡失调，从而在二价铁所催化的芬顿反应(fenton reaction)中引起生物膜上的多不饱和脂肪酸(pufa)发生过氧化，从而引发磷脂
技术实现思路
1、针对现有技术的上述不足，本专利技术的目的是提供一种用于评估非小细胞肺癌对铁死亡及免疫治疗敏感性的试剂盒，通过检测乙醛脱氢酶16a1(aldh16a1)表达量的试剂盒，判断非小细胞患者对免疫治疗所致肿瘤细胞铁死亡的敏感性，评估该患者使用免疫治疗非小细胞肺癌的适用性。
2、本专利技术基于一系列细胞实验及临床数据验证，发现基因aldh16a1对铁死亡具有重要的介导作用，其表达水平与非小细胞肺癌细胞对铁死亡诱导剂及免疫治疗的敏感性具有相关性，可作为一种生物标志物用于辅助预判非小细胞患者对免疫治疗的敏感性，从而填补这一领域的空白。
3、为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：
4、本专利技术提供检测aldh16a1表达量的试剂在制备评估非小细胞肺癌对铁死亡及免疫治疗敏感性的试剂盒中的应用，其中aldh16a1基因的ensembl登记号为enst00000293350.9。
5、作为优选，所述试剂盒用于评估非小细胞肺癌患者对免疫治疗是否敏感或耐受。
6、作为优选，所述试剂盒用于评估小细胞肺癌患者对铁死亡诱导剂erastin的耐受能力。
7、作为优选，所述试剂盒还包括检测aldh16a1表达的扩增引物，序列如seq id no:1和seq id no:2所示。
8、本专利技术提供一种用于评估非小细胞肺癌对铁死亡及免疫治疗敏感性的试剂盒，其包含检测aldh16a1表达量的试剂，其中aldh16a1基因的ensembl登记号为enst00000293350.9。
9、作为优选，检测样本来自于非小细胞肺癌患者肿瘤组织。
10、作为优选，所述试剂盒还包括检测aldh16a1表达的扩增引物，序列如seq id no:1和seq id no:2所示。
11、本专利技术还提供一种评估非小细胞肺癌对铁死亡及免疫治疗敏感性的方法，包括以下步骤：
12、步骤a：提取非小细胞肺癌患者肿瘤组织样本中的总rna；
13、步骤b：采用qrt-pcr检测上述总rna中aldh16a1的表达，同时以gapdh作为内参基因，其中检测aldh16a1的引物序列如seq id no:1和seq id no:2所示，检测gapdh的引物序列如seq id no:3和seq id no:4所示；
14、步骤c：随访患者生存情况，随访周期为每年一次，取aldh16a1相对内参gapdh的△ct值中位数10.589为截断值，区分高表达和低表达，△ct＞10.589为低表达，△ct≤10.589为高表达，如果组织样本中aldh16a1低表达提示非小细胞肺癌患者对免疫治疗耐受，aldh16a1高表达提示非小细胞肺癌患者对免疫治疗敏感。
15、作为优选，随访患者生存情况总周期大于5年。
16、与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：首先采用高通量技术全面系统地分析a549非小细胞细胞在随机敲除某个基因后对铁死亡诱导剂erastin的敏感情况改变，发现aldh16a1敲除后细胞对erastin更耐受，并进一步在共培养模型中验证在非小细胞肺癌细胞中敲除aldh16a1导致对免疫细胞的杀伤作用更加耐受，说明aldh16a1表达水平适合于预判非小细胞肺癌患者对免疫治疗的敏感程度。随后，进一步证实该基因在非小细胞肺癌患者中的表达差异以及在判断对免疫治疗敏感程度中稳健的应用价值。
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1.检测ALDH16A1表达量的试剂在制备评估非小细胞肺癌对铁死亡及免疫治疗敏感性的试剂盒中的应用，其中ALDH16A1基因的Ensembl登记号为ENST00000293350.9。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒用于评估非小细胞肺癌患者对免疫治疗是否敏感或耐受。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒用于评估小细胞肺癌患者对铁死亡诱导剂Erastin的耐受能力。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括检测ALDH16A1表达的扩增引物，序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。
5.一种用于评估非小细胞肺癌对铁死亡及免疫治疗敏感性的试剂盒，其特征在于，其包含检测ALDH16A1表达量的试剂，其中ALDH16A1基因的Ensembl登记号为ENST00000293350.9。
6.根据权利要求5所述用于评估非小细胞肺癌对铁死亡及免疫治疗敏感性的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括检测ALDH16A1表达的扩增引物，序列如SEQ ID NO:1和SE
7.根据权利要求5所述用于评估非小细胞肺癌对铁死亡及免疫治疗敏感性的试剂盒，其特征在于，检测样本来自于非小细胞肺癌患者肿瘤组织。
8.一种评估非小细胞肺癌对铁死亡及免疫治疗敏感性的方法，其特征在于，包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.检测aldh16a1表达量的试剂在制备评估非小细胞肺癌对铁死亡及免疫治疗敏感性的试剂盒中的应用，其中aldh16a1基因的ensembl登记号为enst00000293350.9。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒用于评估非小细胞肺癌患者对免疫治疗是否敏感或耐受。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒用于评估小细胞肺癌患者对铁死亡诱导剂erastin的耐受能力。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括检测aldh16a1表达的扩增引物，序列如seq id no:1和seq id no:2所示。
5.一种用于评估非小...
【专利技术属性】
技术研发人员：毕国澍，詹成，梁嘉琪，卞赟艺，单光耀，
申请(专利权)人：复旦大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：
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