【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种用于猪精液常温保存的抗菌肽及制备方法和应用。
技术介绍
1、由于猪精子细胞质膜中胆固醇与磷脂比率显著低于其他哺乳动物，其更易受到低温的伤害，全球范围内99％人工授精使用常温保存(17℃)的液态精液。猪精液在采集和运输过程中极易被细菌污染，同时精液含有丰富的营养成分，这些营养成分及较高的保存温度为细菌提供了有利的生长条件。研究表明，75％的猪精液至少被一种细菌污染，细菌性精子症已是猪精液保存的主要问题之一。为了控制细菌污染，通常会在精液稀释液中添加抗生素，据统计，全世界每年约有1280万升含有抗生素的精液被使用。然而，近年来细菌耐药性逐年增加，从精液中分离出的细菌中，有超过90％对添加到精液中的抗生素具有耐药性。因此，为了维持猪精液保存技术的长久发展及保障人类健康，绿色安全、无残留的非抗生素型抑菌策略，已是未来发展的大势所趋。抗菌肽(antimicrobial peptides，amps)是一种具有广谱抗菌、抗病毒和抗真菌活性的两亲性小分子寡肽，通常是由不超过50个带正电荷氨基酸和疏水性氨基酸组成。在多细胞真核生物的上皮屏障和系统诱导防御中普遍存在，是多细胞生物体免疫的第一道防线。抗菌肽生物学功能多样，可直接杀死细菌、真菌、病毒甚至癌细胞。抗菌肽可能具有多种作用机制，除了破坏细菌膜外，抗菌肽还可能通过诱导细菌程序性死亡途径或与dsdna结合来杀死细菌。该作用机制使细菌很难对抗菌肽产生耐药性，抗菌肽已成为最具潜力的抗生素替代物之一。但是抗菌肽在猪精液液态保存技术中的替抗使用也面临着生物活性低，对精子毒
技术实现思路
1、基于以上不足之处，本专利技术提供一种用于猪精液常温保存的抗菌肽c8-tat9，该抗菌肽c8-tat9抗菌活性高，可有效抑制精液中细菌的生长，对精子活率和活力无明显影响。
2、本专利技术所采用的技术方案如下：一种用于猪精液常温保存抗菌肽c8-tat9，其氨基酸序列如seq idno.1所示。
3、进一步的，如上所述的抗菌肽c8-tat9的分子式如式(ι)所示：
4、
5、本专利技术的另一目的在于提供如上所述的抗菌肽c8-tat9的制备方法，如下：使用中链饱和脂肪酸正辛酸c8与淀粉样β蛋白自组装核心序列：klvffk连接，以提供疏水性，再利用赖氨酸的α氨基和r基上的-nh2分别作为主链和侧链的链接位点，将聚乙二醇peg8连接在侧链以降低细胞毒性，将细胞穿透肽tat9的序列：rkkrrqrrr连接在主链上提供正电荷，得到的多肽的氨基酸序列如seq id no.1所示，将所述的多肽采用固相化学合成法进行合成，再经过反相高效液相色谱纯化和质谱鉴定后，再通过体外抑菌活性、抑制猪精液细菌生长能力以及精子活率进行检测，最后命名为抗菌肽c8-tat9。
6、本专利技术的另一目的在于提供如上所述的抗菌肽c8-tat9在制备抑制猪精液常温保存中革兰氏阴性菌和/或革兰氏阳性菌生长的药物的应用。
7、进一步的，如上所述的革兰氏阴性菌为大肠杆菌、沙门氏菌或铜绿假单胞菌。
8、进一步的，如上所述的革兰氏阳性菌为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌或粪肠球菌。
9、本方面的优点及有益效果：本专利技术通过使用中链饱和脂肪酸正辛酸和淀粉样β蛋白(aβ)自组装核心序列klvffk两种基序同时提供抗菌所需的疏水性，避免了单独使用长链脂肪酸或大量疏水性氨基酸带来的高细胞毒性，同时进一步利用细胞穿透肽tat9在提供抗菌肽分子所需的正电荷的同时，增加抗菌肽分子的细胞穿透能力，有效避免膜损伤带来的细胞毒性，进一步通过赖氨酸核心添加peg8分支序列，达到降低细胞毒性的目的。对得到的抗菌肽进行抗菌活性、在精液常温保存中抑制细菌生长能力及对精子活率的影响，发现抗菌肽c8-tat9不但对大肠杆菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌，金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌、粪肠球菌等革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌有明显的抑制作用，而且对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌有高效的抑制作用；抗菌肽c8-tat9可高效抑制精液常温保存中细菌的生长，且对猪精子活率无显著影响。因此，综合来看，抗菌肽c8-tat9是一种在猪精液常温保存应用中具有较高潜力的抗菌肽。
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1.一种用于猪精液常温保存的抗菌肽C8-TAT9，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ IDNo.1所示。
2.根据权利要求1所述的一种用于猪精液常温保存的抗菌肽C8-TAT9，其特征在于，其分子式如式(Ι)所示：
3.根据权利要求1所述的一种用于猪精液常温保存的抗菌肽C8-TAT9的制备方法，其特征在于，方法如下：使用中链饱和脂肪酸正辛酸C8与淀粉样β蛋白自组装核心序列：KLVFFK连接，以提供疏水性，利用赖氨酸的α氨基和R基上的-NH2分别作为主链和侧链的链接位点，将聚乙二醇PEG8连接在侧链以降低细胞毒性，将细胞穿透肽TAT9的序列：RKKRRQRRR连接在主链上提供正电荷，得到的多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，将所述的多肽采用固相化学合成法进行合成，再经过反相高效液相色谱纯化和质谱鉴定后，再通过体外抑菌活性、抑制猪精液细菌生长能力以及精子活率进行检测，最后命名为抗菌肽C8-TAT9。
4.如权利要求1所述的一种用于猪精液常温保存的抗菌肽C8-TAT9在制备抑制猪精液常温保存中革兰氏阴性菌和/或革兰氏阳性菌生长的药物的应用。p>
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的革兰氏阴性菌为大肠杆菌、沙门氏菌或铜绿假单胞菌。
6.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的革兰氏阳性菌为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌或粪肠球菌。
...【技术特征摘要】
1.一种用于猪精液常温保存的抗菌肽c8-tat9，其特征在于，其氨基酸序列如seq idno.1所示。
2.根据权利要求1所述的一种用于猪精液常温保存的抗菌肽c8-tat9，其特征在于，其分子式如式(ι)所示：
3.根据权利要求1所述的一种用于猪精液常温保存的抗菌肽c8-tat9的制备方法，其特征在于，方法如下：使用中链饱和脂肪酸正辛酸c8与淀粉样β蛋白自组装核心序列：klvffk连接，以提供疏水性，利用赖氨酸的α氨基和r基上的-nh2分别作为主链和侧链的链接位点，将聚乙二醇peg8连接在侧链以降低细胞毒性，将细胞穿透肽tat9的序列：rkkrrqrrr连接在主链上提供正电荷，得到...
【专利技术属性】
技术研发人员：庞卫军，来振衡，张海泽，蔡瑞，秦雪，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：
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