【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及超声造影，尤其是涉及一种高增强靶向超声纳米造影剂、其制备方法及其应用。
技术介绍
1、超声造影技术是目前临床上常用的诊断手段之一，主要从静脉注入微泡造影剂，增强组织器官的超声显像，通过观察病变部位超声显像的增强情况，从而对疾病进行诊断。
2、目前临床上常用的超声造影剂为声诺维，主要为脂质膜包裹六氟化硫的微米级气泡，平均直径约为2-4μm，可通过肺循环，能有效增强血池显像，然而却达不到组织细胞显像。随着制备技术的优化，超声造影剂已从微米级转为纳米级，且因其良好的纳米尺寸优势，可通过渗透和保留效应(enhanced permeation and retention effect,epr)穿过肿瘤血管内皮间隙被动靶向肿瘤组织显像。
3、除此之外，不少研究者通过在纳米超声造影剂上修饰不同的分子或药物，赋予其特定的靶向能力，如cn202311202674.5公开了通过在造影剂外壳上修饰vegfr2抗体，实现了对肿瘤新生血管中vegfr2因子的靶向；cn202110874092.6公开了通过在造影剂外壳上修饰双配体pna和ga双配体，实现纳米超声造影剂对肝癌的靶向。同时也有不少研究者通过在纳米超声造影剂上携带药物或基因，利用纳米超声造影剂良好的尺寸优势，对特定疾病进行治疗，如cn202111119809.2公开了通过将纳米超声造影剂与携带目的基因的质粒进行结合，用于治疗心肌梗死后心肌纤维化，为实现纳米超声造影剂诊疗一体化提供了众多途径。
4、然而，根据瑞利散射定律，当超声频率一定时，散射截面
5、因此，需要进一步研究如何提升超声纳米造影剂的性能，既能具有一定疾病的治疗效果，又能有效提高成像强度。
技术实现思路
1、为了上述不足，本专利技术提供了一种能联合光热和免疫治疗的高增强靶向超声纳米造影剂，其聚集了肿瘤靶向、光热转换、免疫增强和高增强四种性能。
2、本专利技术的另一目的是提供一种高增强靶向超声纳米造影剂的制备方法。
3、本专利技术的还一目的是提供一种高增强靶向超声纳米造影剂在用于联合光热和免疫治疗中的应用。
4、本专利技术通过对介孔二氧化硅进行苯基修饰荷载免疫佐剂雷西莫特(r848)后外层修饰光热剂聚多巴胺，再将得到的纳米颗粒包裹入修饰有近红外荧光染料的ir780中，充入惰性气体全氟丙烷(c3f8)，形成一种结构类似“无花果”型的超声纳米造影剂。
5、本专利技术的纳米造影剂包裹经过修饰的介孔二氧化硅后，当超声波经过后，有效增加了总散射半径，增加了散射截面，大大增强了超声纳米造影剂的超声成像对比度，弥补了临床诊断的不足。此外，本专利技术超声纳米造影剂脂质外壳修饰的近红外荧光染料ir780具有肿瘤靶向和光热转换作用，能有效的靶向肿瘤，在注入超声纳米造影剂后，在超声监测下，超声纳米造影剂通过被动和主动靶向到肿瘤组织，在看到超声纳米造影剂汇集于肿瘤组织后，用近红外激光对肿瘤部位进行照射，随着温度升高，造影剂脂质外壳破裂，释放出内部的介孔二氧化硅纳米粒子，介孔二氧化硅外层包裹的聚多巴胺同样为光热剂，在激光照射下持续升温并分解，露出内部荷载有r848的介孔二氧化硅，随着r848的逐渐释放，增强了温度升高杀伤肿瘤组织提供原位抗原的免疫原性，联合了光热和免疫治疗，同时荷载了r848、聚多巴胺和ir780三种类型的药物，聚集了肿瘤靶向、光热转换、免疫增强和高增强四种性能，形成了一种能联合光热和免疫治疗的高增强靶向超声纳米造影剂。
6、为实现上述目的，本专利技术提供一种能联合光热和免疫治疗的高增强靶向超声纳米造影剂，其采用如下方法制成：
7、1)将苯基修饰的介孔二氧化硅(pmsn)先溶于有机溶剂中，然后加入r848进行搅拌，离心、洗涤、冻干得到荷载r848的纳米颗粒(pmsn-r848)；
8、2)将载荷r848的纳米颗粒在碱性溶液下与盐酸多巴胺进行搅拌反应，得到修饰有聚多巴胺的纳米颗粒；
9、3)将二棕榈酰磷脂酰胆碱(dppc)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(dspe-peg 2000)和ir780溶于有机溶剂后于50-60℃进行旋转蒸发，得到修饰了ir780的脂质膜；
10、4)将步骤2)所得的纳米颗粒溶于pbs和甘油配制的水合液中，然后倒于带有所述脂质膜的旋蒸瓶中，在超声波下水化所述脂质膜得到混悬液，并充入惰性气体摇晃，制得超声纳米造影剂。
11、其中，步骤1)中所述有机溶剂为醇类溶剂，进一步可为无水乙醇。
12、所述苯基修饰介孔二氧化硅：r848的质量比为1:3-4；所述搅拌时间为12-24h，所述洗涤采用醇类溶剂进行，一般以2-3遍为宜。
13、步骤2)中所述载荷r848的纳米颗粒与盐酸多巴胺通常在tris-hcl缓冲液(ph＝8.5)下进行搅拌。
14、步骤2)中，所述荷载r848的纳米颗粒(pmsn-r848)与盐酸多巴胺的质量比为1-2:1。
15、步骤3)中，二棕榈酰磷脂酰胆碱(dppc)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(dspe-peg 2000)和ir780的用量比为50：20：1。
16、所述有机溶剂可采用氯仿。
17、步骤4)中，所述水合液为pbs和甘油9:1体积比配制而成。
18、所述惰性气体为全氟丙烷(c3f8)。
19、所述苯基修饰的介孔二氧化硅(pmsn)可市售获得，也可以采用如下方法制成：
20、1)先将十六烷基三甲基溴化铵溶于碱性溶液中在80-90℃下进行搅拌溶解，并在搅拌下滴加正硅酸乙酯，继续搅拌2-4小时，冷却、离心、洗涤、沉淀，所得沉淀物晾干后在550-600℃下煅烧，得到介孔二氧化硅纳米颗粒；
21、2)所得的介孔二氧化硅纳米颗粒溶于有机溶剂中，在80-90℃下滴加苯基三乙氧基硅烷，所述介孔二氧化硅纳米颗粒与所述苯基三乙氧基硅烷搅拌反应，离心、洗涤、冻干得到苯基修饰的介孔二氧化硅。
22、其中，所述碱性溶液为氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液，浓度为1-2mol/l。
23、所述十六烷基三甲基溴化铵(catb)与所述正硅酸乙酯(teos)的用量比为200:1。
24、所述搅拌速度为800-1000r；离心速度为1000-13000r。洗涤可采用无水乙醇或纯水，洗涤次数为2-3次。
25、所述有机溶剂为醇类溶剂，比如无水乙醇。
26、本专利技术还提供一种高增强靶向超声纳米造影剂的制备方法，包括如下步骤：本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种能联合光热和免疫治疗的高增强靶向超声纳米造影剂，其特征在于，其采用如下方法制成：
2.根据权利要求1所述的高增强靶向超声纳米造影剂，其特征在于，步骤1)中，所述苯基修饰的介孔二氧化硅与R848的质量比为1：3-4。
3.根据权利要求1所述的高增强靶向超声纳米造影剂，其特征在于，步骤2)中，所述载荷R848的纳米颗粒与盐酸多巴胺的质量比为1-2:1。
4.根据权利要求1所述的高增强靶向超声纳米造影剂，其特征在于，步骤3)中，二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000和IR780的质量比为50：20：1。
5.根据权利要求1所述的高增强靶向超声纳米造影剂，其特征在于，步骤4)中，所述PBS和甘油的水合液为PBS和甘油9:1体积比配制而成。
6.根据权利要求1所述的高增强靶向超声纳米造影剂，其特征在于，所述苯基修饰的介孔二氧化硅采用如下方法制成：
7.根据权利要求6所述的高增强靶向超声纳米造影剂，其特征在于，所述十六烷基三甲基溴化铵与所述正硅酸乙酯的用量比为200:1。
8.权
9.根据权利要求8所述的高增强靶向超声纳米造影剂的制备方法，其特征在于，所述苯基修饰的介孔二氧化硅采用如下方法制成：
10.权利要求1-7任意一项所述的高增强靶向超声纳米造影剂在用于联合光热和免疫治疗中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种能联合光热和免疫治疗的高增强靶向超声纳米造影剂，其特征在于，其采用如下方法制成：
2.根据权利要求1所述的高增强靶向超声纳米造影剂，其特征在于，步骤1)中，所述苯基修饰的介孔二氧化硅与r848的质量比为1：3-4。
3.根据权利要求1所述的高增强靶向超声纳米造影剂，其特征在于，步骤2)中，所述载荷r848的纳米颗粒与盐酸多巴胺的质量比为1-2:1。
4.根据权利要求1所述的高增强靶向超声纳米造影剂，其特征在于，步骤3)中，二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000和ir780的质量比为50：20：1。
5.根据权利要求1所述的高增强靶向超声纳米造影剂，其特征在于，步骤4)中，所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：张莉，张延美，马政君，范黎，雷小楠，梁潇，
申请(专利权)人：中国人民解放军空军军医大学，
类型：发明
国别省市：
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