【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及胶原蛋白检测，特别是涉及一种交联重组胶原蛋白特征多肽及其应用。
技术介绍
1、交联重组胶原蛋白是指通过化学或物理手段将胶原蛋白分子之间进行结合后的产物。交联方法主要分为物理交联和化学交联。物理交联是通过冷冻干燥、紫外光照射和热处理等方法改变胶原蛋白分子的空间排布和结构，形成交联网络，从而增强其稳定性和生物相容性，该方法的优点是操作简单，无需引入化学物质，但缺点是交联程度难以控制。化学交联是通过在胶原蛋白分子中引入化学交联剂，使胶原蛋白分子之间发生共价结合，从而增强胶原蛋白的机械性能和抗降解能力。化学交联的优点是可以精确控制交联程度和交联位置，缺点是可能引入有毒物质或产生副产物。
2、交联重组胶原蛋白由于具有相对较长的降解周期而广泛作为体内植入材料，应用于组织修复、再生等领域。交联重组胶原植入体内之后，其降解速度是影响应用效果的关键，降解速度太快可能无法起到机械支撑的作用，降解太慢可能会影响组织修复及再生。因此，重组胶原蛋白的体内降解动态评价是预测和评价其预期临床效果的重要手段。金属、陶瓷、聚合物材料和其他难以在体内降解的材料可以通过传统的方法进行评估，如微计算机断层扫描(micro-ct)、质量损失法和he染色等。但交联重组胶原蛋白植入动物体内后，会与动物本身的组织融为一体，逐渐被组织中的蛋白酶降解并被新生组织代替，剩余的材料会失去原来的结构和形状，无法将其与动物本身的组织进行分离。因此，传统的方法均无法实现植入动物体内的交联重组胶原蛋白残留量进行分析及其降解过程进行评价。
3、传统的胶原蛋
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种交联重组胶原蛋白特征多肽及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，本专利技术提供的交联重组胶原蛋白特征多肽专属性强、具有唯一性，可用于交联重组胶原蛋白产品质量控制及其在动物体内的残留量分析和降解过程评价。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
3、本专利技术提供一种交联重组胶原蛋白特征多肽，所述交联重组胶原蛋白特征多肽的氨基酸序列为gesgpagpagapgpagsr。
4、本专利技术还提供所述的交联重组胶原蛋白特征多肽在以下任一项中的应用：
5、(1)在交联重组胶原蛋白产品质量控制中的应用；
6、(2)在制备用于交联重组胶原蛋白产品质量控制的检测产品中的应用；
7、(3)在制备用于交联重组胶原蛋白产品体内残留量和/或降解过程分析的产品中的应用；
8、(4)在制备区分交联重组胶原蛋白与动物来源的胶原蛋白的产品中的应用。
9、可选的是，以所述交联重组胶原蛋白特征多肽作为标准品检测所述交联重组胶原蛋白产品，对所述交联重组胶原蛋白产品进行质量控制或者分析体内残留量和/或降解过程。
10、可选的是，所述交联重组胶原蛋白特征多肽作为标准品检测所述交联重组胶原蛋白产品包括以下步骤：
11、将所述交联重组胶原蛋白特征多肽溶解后，配制成系列浓度标准工作液；
12、将待测交联重组胶原蛋白产品溶解加入胰蛋白酶进行酶解，酶解液离心取上清，作为待测溶液；
13、将所述标准工作液和所述待测溶液注入液相色谱-质谱仪进行检测，以确定所述待测交联重组胶原蛋白产品中是否含有所述交联重组胶原蛋白特征多肽或者定量检测所述待测交联重组胶原蛋白产品中重组胶原蛋白的含量。
14、可选的是，所述液相色谱-质谱仪中，液相条件为：色谱柱：zorbax c18柱；流动相a：含0.1％甲酸的水溶液，流动相b：含0.1％甲酸和60％乙腈的水；梯度洗脱：0～2min，5％～15％ b；2～6min，15％～90％ b；6～8min，90％ b；8～8.1min，90％～5％ b；8.1～10min，5％b。
15、可选的是，所述液相色谱-质谱仪中，质谱分析用电喷雾电离，电离条件为：m/z746.94→641.20、994.80；
16、质谱条件为：离子源喷雾电压为3.5kv，毛细管温度为320℃，蒸发温度为350℃，鞘气流速为19.8ml/min，辅助器流速为0.55bar；采用正离子模式扫描，srm监测模式：m/z746.94→641.20、m/z 732.84→994.80。
17、可选的是，如果所述待测交联重组胶原蛋白产品中的目标离子的保留时间和子离子与所述交联重组胶原蛋白特征多肽标准品的保留时间和子离子均一致，则确定所述待测交联重组胶原蛋白产品中含有所述重组胶原蛋白特征多肽。
18、可选的是，通过所述交联重组胶原蛋白特征多肽与所述交联重组胶原蛋白产品分子量的对应关系，计算所述待测交联重组胶原蛋白产品中重组胶原蛋白的含量。
19、计算公式为：
20、
21、其中，mi为待测样品中交联重组胶原蛋白的含量，μg/mg；x为待测样品中交联重组胶原蛋白特征多肽浓度，μg/ml；v为样品最终定容体积，ml；m1为交联重组胶原蛋白分子量，da；m2为交联重组胶原蛋白特征多肽的分子量，da；m为待测样品的质量，mg；n为交联重组胶原蛋白中特征多肽的重复次数。
22、可选的是，所述交联重组胶原蛋白产品包括重组胶原蛋白植入剂。
23、本专利技术公开了以下技术效果：
24、本专利技术提供的交联重组胶原蛋白特征多肽可用于区分重组胶原蛋白与其它动物来源的胶原蛋白，该方法不受样本状态的限制，可用于植入动物体内的交联重组胶原的降解过程分析，为交联重组胶原蛋白的体内降解评价提供了准确的评价方法。
25、本专利技术提供的交联重组胶原蛋白特征多肽专属性强。以该交联重组胶原蛋白酶解产物作为标准品，以特征多肽为检测目标，提供的检测方法操作简单，灵敏度高，能够对交联重组胶原蛋白进行定量分析，该方法可用于交联重组胶原蛋白产品质量控制及其在动物体内的残留量分析和降解过程评价。
26、本专利技术提供的交联重组胶原蛋白特征多肽具有唯一性，以该特征多肽作为标志物本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种交联重组胶原蛋白特征多肽，其特征在于，所述交联重组胶原蛋白特征多肽的氨基酸序列为GESGPAGPAGAPGPAGSR。
2.如权利要求1所述的交联重组胶原蛋白特征多肽在以下任一项中的应用：
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，以所述交联重组胶原蛋白特征多肽作为标准品检测所述交联重组胶原蛋白产品，对所述交联重组胶原蛋白产品进行质量控制或者分析体内残留量和/或降解过程。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述交联重组胶原蛋白特征多肽作为标准品检测所述交联重组胶原蛋白产品包括以下步骤：
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述液相色谱-质谱仪中，液相条件为：色谱柱：Zorbax C18柱；流动相A：含0.1％甲酸的水溶液，流动相B：含0.1％甲酸和60％乙腈的水；梯度洗脱：0～2min，5％～15％B；2～6min，15％～90％B；6～8min，90％B；8～8.1min，90％～5％B；8.1～10min，5％B。
6.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述液相色谱-质谱仪中，质谱分析用电喷雾电离，
7.如权利要求4所述的应用，其特征在于，如果所述待测交联重组胶原蛋白产品中的目标离子的保留时间和子离子与所述交联重组胶原蛋白特征多肽标准品的保留时间和子离子均一致，则确定所述待测交联重组胶原蛋白产品中含有所述重组胶原蛋白特征多肽。
8.如权利要求4所述的应用，其特征在于，通过所述交联重组胶原蛋白特征多肽与所述交联重组胶原蛋白产品分子量的对应关系，计算所述待测交联重组胶原蛋白产品中重组胶原蛋白的含量。
9.如权利要求2-8任一项所述的应用，其特征在于，所述交联重组胶原蛋白产品包括重组胶原蛋白植入剂。
...【技术特征摘要】
1.一种交联重组胶原蛋白特征多肽，其特征在于，所述交联重组胶原蛋白特征多肽的氨基酸序列为gesgpagpagapgpagsr。
2.如权利要求1所述的交联重组胶原蛋白特征多肽在以下任一项中的应用：
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，以所述交联重组胶原蛋白特征多肽作为标准品检测所述交联重组胶原蛋白产品，对所述交联重组胶原蛋白产品进行质量控制或者分析体内残留量和/或降解过程。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述交联重组胶原蛋白特征多肽作为标准品检测所述交联重组胶原蛋白产品包括以下步骤：
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述液相色谱-质谱仪中，液相条件为：色谱柱：zorbax c18柱；流动相a：含0.1％甲酸的水溶液，流动相b：含0.1％甲酸和60％乙腈的水；梯度洗脱：0～2min，5％～15％b；2～6min，15％～...
【专利技术属性】
技术研发人员：凡孝菊，储筠，翟源心，王欣慧，汤鼎，乐浩，钱松，
申请(专利权)人：江苏创健医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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