【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种用于肝纤维化和肝硬化检测的试剂盒。
技术介绍
1、肝硬化（cirrhosis）是指肝纤维化中晚期。它的形态学定义为弥漫性肝脏纤维化伴有异常结节形成。仅有弥漫性肝纤维化而无结节形成（如先天性肝纤维化），或仅有结节形成而无纤维化（如结节性再生性增生）均不能称为肝硬化。从临床的角度来看，肝硬化是指上述肝脏组织病理学改变所导致的肝功能衰竭和门脉高压症等表现。从病理学上来看，慢性炎症坏死首先导致肝脏纤维结缔组织增生和沉积（纤维化），继而导致肝小叶结构的破环和假小叶形成，最终发展为肝硬化。
2、肝硬化代偿期无明显临床症状，失代偿期以门静脉高压和肝功能严重损伤为特征，患者常因并发腹水、消化道出血、脓毒症、肝性脑病、肝肾综合征和癌变等导致多脏器功能衰竭而死亡。失代偿期肝硬化的预后通常较差，常规治疗下5年生存率仅为14-35%。失代偿期肝硬化患者经常发生慢加急性肝衰竭（aclf），这与高死亡率相关。
3、因此，及时并且准确地对肝纤维化、肝硬化，以及代偿期肝硬化和失代偿期肝硬化进行检测对肝硬化的诊断和治疗具有重要意义。目前对肝硬化检测有很多方法，例如中国专利cn103160575a公开了saa1β/β纯合子基因型在肝硬化预后诊断及肝硬化诊断中的应用，该专利通过实时荧光定量等位基因特异性pcr检测人saa1 β/β纯合子基因型和非saa1β/β纯合子基因型，从而实现对肝硬化易感人群的检测；中国专利cn103160507a公开了检测肝硬化的mirna血清标志物及其应用。这些方法从基因或mrna层面
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种肝纤维化和肝硬化的试剂盒，本专利技术试剂盒具有良好的标准品，能够有效保证测定结果的准确性；本专利技术试剂盒除了能够准确区分患者是否患有肝纤维化或肝硬化，还能够用于准确区分肝硬化患者处于代偿期、失代偿期或再代偿期。
2、为达到上述专利技术目的，采用如下技术方案。
3、本专利技术公开了同位素标记的chi3l1，chi3l1的特异性多肽片段序列为：ilgqqvpyatk；同位素包括15n和/或13c。
4、优选地，同位素标记的chi3l1标记位点在赖氨酸。
5、本专利技术还公开了一种chi3l1标准品，包括来自于乙肝患者肝硬化血清的chi3l1或化学合成的chi3l1。乙肝患者肝硬化血清即为由乙肝病毒引起的肝硬化患者的血清，包含壳酶蛋白的所有结构变异体，特别是乙肝相关纤维化过程中的壳酶蛋白变异体。乙肝患者肝硬化血清中的各种蛋白修饰、表位、免疫原性等更符合实际蛋白特点，是更好的标准品和赋值来源。
6、优选地，上述标准品的用途包括：通过溯源链赋值得到适用于肝纤维化肝硬化试剂盒的校准品和质控品。
7、优选地，化学合成的chi3l1、同位素标记的chi3l1与乙肝患者肝硬化血清的chi3l1的溯源链的比值为：
8、合成的chi3l1：同位素标记的chi3l1：乙肝患者肝硬化血清的chi3l1=150-250:700-850:150-250。
9、更优选地，化学合成的chi3l1、重同位素标记的chi3l1与乙肝患者肝硬化血清的chi3l1的溯源链的比值为：
10、合成的chi3l1：重同位素标记的chi3l1：乙肝患者肝硬化血清的chi3l1=200-220:770-780:200-220。
11、更进一步优选地，化学合成的chi3l1、重同位素标记的chi3l1与乙肝患者肝硬化血清的chi3l1的溯源链的比值为：
12、合成的chi3l1：重同位素标记的chi3l1：乙肝患者肝硬化血清的chi3l1=218:780: 220。
13、本专利技术还公开了同位素标记的chi3l1作为参考物质在标准品溯源和/或赋值中的用途，同位素标记的chi3l1，由重同位素标记或轻同位素标记，标记位点在赖氨酸。
14、优选地，同位素包括15n和/或13c。
15、优选地，chi3l1特异性序列为ilgqqvpyatk。该序列为chi3l1特异性多肽序列，与其他蛋白无交叉，可以很好地代表chi3l1，使检测更加准确。
16、优选地，同位素标记的chi3l1作为二级参考物质。
17、优选地，称重法为一级参考方法。
18、优选地，二级参考方法为同位素稀释法。通过使用反应监测和质谱比较重同位素标记的ilgqqvpyatk和轻同位素标记得ilgqqvpyatk，来对重同位素标记的多肽进行精确赋值。
19、优选地，上述用途中，化学合成的chi3l1、重同位素标记的chi3l1与乙肝患者肝硬化血清的chi3l1的溯源链的比值为：
20、合成的chi3l1：重同位素标记的chi3l1：乙肝患者肝硬化血清的chi3l1=150-250:700-850:150-250。
21、更优选地，上述用途中，化学合成的chi3l1、重同位素标记的chi3l1与乙肝患者肝硬化血清的chi3l1的溯源链的比值为：
22、合成的chi3l1：重同位素标记的chi3l1：乙肝患者肝硬化血清的chi3l1=200-220:770-780:200-220。
23、更进一步优选地，上述用途中，化学合成的chi3l1、重同位素标记的chi3l1与乙肝患者肝硬化血清的chi3l1的溯源链的比值为：
24、合成的chi3l1：重同位素标记的chi3l1：乙肝患者肝硬化血清的chi3l1=218:780:220。
25、本专利技术还公开了上述的同位素标记的chi3l1作为参考物质在chi3l1标准品蛋白溯源或赋值中的用途，同位素标记的chi3l1作为二级参考物质。化学合成的chi3l1多肽采用称重法定量；同位素标记的chi3l1为重同位素标记的chi3l1多肽，重同位素标记的chi3l1多肽采用lc-ms定量；chi3l1标准蛋白采用lc-ms定量，通过lc-ms定量上溯到重同位素标记的chi3l1多肽，重同位素标记的chi3l1多肽通过lc-ms定量上溯到化学合成的chi3l1多肽，而化学合成的chi3l1多肽通过直接称重法确定质量，可以精准定量到国际单位制(international system of units, si)的质量单位。
26、优选地，化学合成的chi3l1多肽ilgqqvpyatk为一级参考物质，称重法为一级参考级方法。
27、优选地，同位素标记的chi3l1为重同位素标记的chi3l1多肽。
28、更本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于鉴别和/或预后监测肝纤维化和肝硬化的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括标准品和/或质控品；所述标准品包括经溯源方法赋值的CHI3L1标准品多肽和/或以所述CHI3L1标准品多肽为参照制备的下一级标准品；所述溯源方法中使用同位素标记的CHI3L1多肽，同位素标记的CHI3L1多肽的特异性多肽片段序列为：ILGQQVPYATK，所述同位素包括15N和/或13C，标记位点在赖氨。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，所述同位素标记的CHI3L1多肽为ILGQQVPYAT（K*）[K（13C6；15N2）]。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，在标准品的溯源和/或赋值过程中，所述标准品包括来自于乙肝患者肝硬化血清的CHI3L1多肽和/或化学合成的CHI3L1多肽。
4. 根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，在标准品溯源和/或赋值过程中，所述化学合成的CHI3L1多肽、重同位素标记的CHI3L1多肽与所述乙肝患者肝硬化血清的CHI3L1多肽的溯源链的比值为：化学合成的CHI3L1多肽：重同位素标记的CHI3L1多肽：乙肝患者肝硬化血
5.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述质控品包括经溯源方法赋值的CHI3L1标准品多肽。
6.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒通过测定血清内所述CHI3L1的含量鉴别和/或预后监测肝纤维化和肝硬化。
7.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于，所述鉴别和/或预后监测肝纤维化和肝硬化包括区分肝硬化的代偿期、失代偿期以及再代偿期。
8. 根据权利要求7所述试剂盒，其特征在于，所述区分肝硬化的代偿期、失代偿期以及再代偿期的阈值为120-200 ng/mL。
9.根据权利要求8所述试剂盒，，其特征在于，所述区分肝硬化的代偿期、失代偿期以及再代偿期的灵敏度为70-97%，特异性为70-83%。
...【技术特征摘要】
1.一种用于鉴别和/或预后监测肝纤维化和肝硬化的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括标准品和/或质控品；所述标准品包括经溯源方法赋值的chi3l1标准品多肽和/或以所述chi3l1标准品多肽为参照制备的下一级标准品；所述溯源方法中使用同位素标记的chi3l1多肽，同位素标记的chi3l1多肽的特异性多肽片段序列为：ilgqqvpyatk，所述同位素包括15n和/或13c，标记位点在赖氨。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，所述同位素标记的chi3l1多肽为ilgqqvpyat（k*）[k（13c6；15n2）]。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，在标准品的溯源和/或赋值过程中，所述标准品包括来自于乙肝患者肝硬化血清的chi3l1多肽和/或化学合成的chi3l1多肽。
4. 根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，在标准品溯源和/或赋值过程中，所述化学合成的chi3l1多肽、重同位素标记的chi3l1多肽与所述乙肝患...
【专利技术属性】
技术研发人员：林标扬，
申请(专利权)人：元典天津新技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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