【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物检测，具体而言，涉及一种滋肾健脾化瘀片中成分含量测定方法。
技术介绍
1、滋肾健脾化瘀片是由酒萸肉、黄芪、三七、醋乳香、大黄、生地黄、蕤仁、石决明、粉葛、炒僵蚕、鸡血藤、山楂12味中药组成的中药复方制剂，具有滋肾健脾、滋阴益气、化瘀通络之功效，在临床上主要用于治疗糖尿病性视网膜病变。现代研究表明，该中药复方制剂中活性成分多样，主要包括皂苷类、黄酮类、萜类等。
2、目前，关于滋肾健脾化瘀片的质量标准研究仅为运用薄层色谱进行定性鉴别和液相色谱的方法对其单一成分葛根素进行定量的研究，而对其他活性成分的定量分析未见报道。因此，亟待建立一种分析方法，对滋肾健脾化瘀片的活性成分进行快速、准确的定量分析，以期为滋肾健脾化瘀片的质控方法建立和质量标准提高提供数据支持。
技术实现思路
1、为克服现有技术中关于滋肾健脾化瘀片的质量标准研究仅为运用薄层色谱进行定性鉴别和液相色谱的方法对其单一成分葛根素进行定量的研究，而对其他活性成分的定量分析未见报道的问题，本专利技术提供了一种滋肾健脾化瘀片中成分含量测定方法，包括以下步骤：
2、步骤一，供试品溶液制备，将滋肾健脾化瘀片溶解在75％甲醇中并经超声波混合、离心和微孔滤膜过滤处理后得到供试品溶液；
3、步骤二，对照品溶液制备，将甘草素、黄芪甲苷iv、芦荟大黄素、绿原酸、大黄酸、地黄苷d、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、人参皂苷re、三七皂苷r1、马钱苷、11-氧代-β-乳香酸、葛根素、莫诺苷、人参皂苷rg1、人参皂苷
4、步骤三：采用uplc-ims-q-tof-ms在相同的检测条件下分别测得对照品溶液和供试品溶液的色谱图，根据对照品溶液的浓度、对照品溶液在色谱图中的峰面积以及供试品溶液中与对照品溶液相对应成分在色谱图中的峰面积，计算滋肾健脾化瘀片供试品溶液中与对照品溶液相对应成分的含量。
5、优选地，超声混合时间为30-60min，微孔滤膜的孔径为0.22μm，供试品溶液的浓度为0.5mg/ml。
6、优选地，各成分的对照品溶液的浓度均为1mg/ml，并使用浓度为1mg/ml的各成分的对照品溶液制备成混合对照品溶液。
7、优选地，uplc-ims-q-tof-ms的色谱条件包括：色谱柱：waters acquityuplc behc18(2.1mm×100mm，1.7μm)；流动相：a为0.1％甲酸水溶液；b为乙腈；洗脱梯度：：0-0.5min，5-5％b相；0.5-1.0min，2-40％b相；1.0-4.5min，40-90％b相；4.5-6.0min，90-90％b相；6.0-6.1min，90-5％b相；6.1-8.0min，5-5％b相；流速：0.4ml/min；柱温：40℃；进样器温度：8℃；进样量：2μl。
8、优选地，uplc-ims-q-tof-ms的质谱条件包括：采用电喷雾离子源，负离子模式扫描模式，用亮氨酸脑啡肽作校正液，进行实时校正，负离子m/z为554.2620，mse全时段全信息数据采集；
9、质谱参数设置：毛细管电压为0.8kv；锥孔电压为30v；毛细管温度为120℃；辅助气加热温度为450℃；锥孔气体流量为50l/h；脱溶剂气体流量为900l/h；一级碰撞能量为6ev；二级碰撞能量为20-45ev；扫描范围为50-1500m/z。
10、优选地，步骤三包括标准曲线及线性关系考察：将混合对照品溶液梯度稀释至1.25、1.67、2、2.5、3.33、5、10、20、40、80、160倍并精密移取2-5μl进行uplc-ims-q-tof-ms检测，以梯度稀释后的混合对照品溶液的浓度为横坐标(x)，色谱峰面积的积分值为纵坐标(y)，绘制标准曲线，计算各对照品的回归方程和线性范围。
11、优选地，步骤三包括精密度试验：取同一份供试品溶液在相同检测条件下连续进样6次，测得15个对照品的峰面积并计算峰面积的rsd值。
12、优选地，步骤三包括稳定性试验：取一份供试品溶液，在室温下放置0、2、4、8、12、24h后在相同检测条件下进样、检测，记录15个对照品的峰面积并计算峰面积的rsd值。
13、优选地，步骤三包括重复性试验：取同一批号的滋肾健脾化瘀片样品6份平行制备供试品溶液，在相同检测条件下进样、检测，记录15个对照品的峰面积，并计算峰面积的rsd值。
14、优选地，步骤三包括加样回收率试验：取与重复性试验同一批号的滋肾健脾化瘀片样品6份制备浓度为0.5mg/ml的供试品溶液，并按1：1的比例加入各对照品溶液后在相同检测条件下进样、检测，记录各成分的峰面积并根据来计算回收率。
15、有益效果：
16、采用本专利技术技术方案产生的有益效果如下：
17、本专利技术采用超高效液相色谱-离子淌度-四级杆飞行时间质谱联用技术(uplc-ims-q-tof-ms)，建立鉴定滋肾健脾化瘀片的15个活性成分定量分析方法，并计算出滋肾健脾化瘀片中15个活性成分的含量，该测定方法高效简便，具有良好的重复性，可为滋肾健脾化瘀片药效物质基础及全面质量控制提供参考依据。
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1.一种滋肾健脾化瘀片中成分含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1的一种滋肾健脾化瘀片中化学成分含量测定的方法，其特征在于，超声混合时间为30-60min，微孔滤膜的孔径为0.22μm，所述供试品溶液的浓度为0.5mg/mL。
3.根据权利要求1的一种滋肾健脾化瘀片中化学成分含量测定的方法，其特征在于，各成分的所述对照品溶液的浓度均为1mg/mL，并使用浓度为1mg/mL的各成分的所述对照品溶液制备成所述混合对照品溶液。
4.根据权利要求1的一种滋肾健脾化瘀片中化学成分含量测定的方法，其特征在于，UPLC-IMS-Q-TOF-MS的色谱条件包括：色谱柱：Waters ACQUITYUPLC BEH C18(2.1mm×100mm，1.7μm)；流动相：A为0.1％甲酸水溶液；B为乙腈；洗脱梯度：0-0.5min，5-5％B相；0.5-1.0min，5-40％B相；1.0-4.5min，40-90％B相；4.5-6.0min，90-90％B相；6.0-6.1min，90-5％B相；6.1-8.0min，5-5％B相；流速：0
5.根据权利要求1的一种滋肾健脾化瘀片中化学成分含量测定的方法，其特征在于，UPLC-IMS-Q-TOF-MS的质谱条件包括：采用电喷雾离子源，负离子模式扫描模式，用亮氨酸脑啡肽作校正液，进行实时校正，负离子m/z为554.2620，MSE全时段全信息数据采集；
6.根据权利要求1的一种滋肾健脾化瘀片中化学成分含量测定的方法，其特征在于，所述步骤三包括标准曲线及线性关系考察：将所述混合对照品溶液梯度稀释至1.25、1.67、2、2.5、3.33、5、10、20、40、80、160倍并精密移取2-5μL进行UPLC-IMS-Q-TOF-MS检测，以梯度稀释后的所述混合对照品溶液的浓度为横坐标(x)，色谱峰面积的积分值为纵坐标(y)，绘制标准曲线，计算各所述对照品的回归方程和线性范围。
7.根据权利要求1的一种滋肾健脾化瘀片中化学成分含量测定的方法，其特征在于，所述步骤三包括精密度试验：取同一份所述供试品溶液在相同检测条件下连续进样6次，测得15个所述对照品的峰面积并计算峰面积的RSD值。
8.根据权利要求1的一种滋肾健脾化瘀片中化学成分含量测定的方法，其特征在于，所述步骤三包括稳定性试验：取一份所述供试品溶液，在室温下放置0、2、4、8、12、24h后在相同检测条件下进样、检测，记录15个所述对照品的峰面积并计算峰面积的RSD值。
9.根据权利要求1的一种滋肾健脾化瘀片中化学成分含量测定的方法，其特征在于，所述步骤三包括重复性试验：取同一批号的滋肾健脾化瘀片样品6份平行制备供试品溶液，在相同检测条件下进样、检测，记录15个所述对照品的峰面积，并计算峰面积的RSD值。
10.根据权利要求9的一种滋肾健脾化瘀片中化学成分含量测定的方法，其特征在于，所述步骤三包括加样回收率试验：取与所述重复性试验同一批号的滋肾健脾化瘀片样品6份制备浓度为0.5mg/mL的供试品溶液，并按1：1的比例加入各所述对照品溶液后在相同检测条件下进样、检测，记录各成分的峰面积并根据来计算回收率。
...【技术特征摘要】
1.一种滋肾健脾化瘀片中成分含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1的一种滋肾健脾化瘀片中化学成分含量测定的方法，其特征在于，超声混合时间为30-60min，微孔滤膜的孔径为0.22μm，所述供试品溶液的浓度为0.5mg/ml。
3.根据权利要求1的一种滋肾健脾化瘀片中化学成分含量测定的方法，其特征在于，各成分的所述对照品溶液的浓度均为1mg/ml，并使用浓度为1mg/ml的各成分的所述对照品溶液制备成所述混合对照品溶液。
4.根据权利要求1的一种滋肾健脾化瘀片中化学成分含量测定的方法，其特征在于，uplc-ims-q-tof-ms的色谱条件包括：色谱柱：waters acquityuplc beh c18(2.1mm×100mm，1.7μm)；流动相：a为0.1％甲酸水溶液；b为乙腈；洗脱梯度：0-0.5min，5-5％b相；0.5-1.0min，5-40％b相；1.0-4.5min，40-90％b相；4.5-6.0min，90-90％b相；6.0-6.1min，90-5％b相；6.1-8.0min，5-5％b相；流速：0.4ml/min；柱温：40℃；进样器温度：8℃；进样量：2μl。
5.根据权利要求1的一种滋肾健脾化瘀片中化学成分含量测定的方法，其特征在于，uplc-ims-q-tof-ms的质谱条件包括：采用电喷雾离子源，负离子模式扫描模式，用亮氨酸脑啡肽作校正液，进行实时校正，负离子m/z为554.2620，mse全时段全信息数据采集；
6.根据权利要求1的一种滋肾健脾化瘀片中化学成分含量测定的方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：林宝琴，林俊粒，郑玉莹，刘方乐，
申请(专利权)人：广州中医药大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：
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