【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及兽用生物制品，尤其涉及一种牛副流感病毒3型阳性血清及其制备方法和应用。
技术介绍
1、研究表明牛传染性鼻气管炎病毒(ibrv)、牛副流感病毒3型(bpiv3)、牛病毒性腹泻病毒(bvdv)和牛呼吸道合胞体病毒(brsv)是目前已知的引发牛呼吸道传染病的主要病毒性病原，其中牛副流感病毒3型是引起犊牛呼吸道疾病的主要病原之一，目前广泛流行于世界各国，在美洲、欧洲、亚洲各国均不断发生或流行。
2、近年来，我国山东、黑龙江、辽宁和内蒙古等多个省份发生了严重的犊牛呼吸道疾病综合征，造成很大的经济损失。经流行病学调查和病原学检测，表明bpiv3在犊牛呼吸道疾病综合征中起重要作用。牛体感染bpiv3后潜伏期一般为2～5日。病牛出现体温升高，可达41℃以上，食欲不振，精神萎靡，流泪，流粘性鼻液，并有脓性结膜炎。bpiv3感染对牛可渐进式的造成组织损伤和免疫抑制，可继发细菌或支原体感染，从而引起严重的支气管肺炎，导致呼吸道疾病综合征，使死亡率大大增加。血清流行病学调查显示，我国部分地区bpiv3的血清阳性率高达91.08％，严重危害着我国养牛业的发展。其诊断制品及血清制品的开发成为当务之急，目前市场上缺乏商品化的牛副流感病毒3型高免血清，也未见牛副流感病毒3型特异性高效价阳性血清制备方法的相关报道。
技术实现思路
1、(一)解决的技术问题
2、本专利技术提供了一种牛副流感病毒3型阳性血清及其制备方法和应用，旨在提供一种高效价的牛副流感病毒3型阳性血清，可用于牛副
3、(二)技术方案
4、本专利技术第一方面提供了一种牛副流感病毒3型阳性血清的制备方法，包括：第一次免疫，选择牛副流感病毒3型抗体、口蹄疫病毒抗体、牛病毒性腹泻-粘膜病病毒抗体、牛传染性鼻气管炎抗体、牛流行热抗体均为阴性的牛接种牛副流感病毒3型灭活疫苗，每头牛接种2ml；第二次免疫，第一次免疫的21天后，给牛继续接种牛副流感病毒3型灭活疫苗，每头牛接种2ml；于第二次免疫十四天后采集牛副流感病毒3型阳性血清，当牛副流感病毒3型阳性血清的效价不低于1：1024，即收获牛副流感病毒3型阳性血清。
5、进一步地，第一方面中所述灭活疫苗的制备方法包括：
6、步骤1，疫苗生产种毒的制备：利用mdbk细胞悬浮传代培养牛副流感病毒3型病毒株，获得种毒；
7、步骤2，将步骤1中获得的种毒按照培养液2‰～5‰v/v的比例接种于mdbk悬浮细胞中，悬浮培养48～72小时，获得病毒液；
8、步骤3，对步骤2中获得的病毒液进行灭活处理，获得灭活病毒液；
9、步骤4，利用步骤3中的灭活病毒液进行乳化配苗，制备得到牛副流感病毒3型灭活疫苗。
10、优选地，所述牛副流感病毒3型病毒株的保藏编号为cgmcc no.21115。
11、进一步地，在上述制备方法的步骤2中，病毒接种时调整细胞密度为2.0×106个/ml，按培养体积2‰种毒，设置培养参数转速为80rpm、温度37℃、40％溶氧量、ph值7.4。
12、进一步地，上述制备方法的步骤3中，离心处理病毒液获得抗原，然后按照β丙内酯：抗原＝1:4000的体积比加入β丙内酯，置于4℃灭活28h，收获灭活液37℃水解2h，离心处理。
13、进一步地，离心处理灭活病毒液后还包括抗原浓缩纯化步骤：包括将离心后的灭活病毒液经过进行浓缩去除杂蛋白，浓缩后的病毒抗原血凝效价不低于1:256，然后进入步骤4。
14、进一步地，将抗原与206佐剂按照质量比1：1在32～34℃温度条件下进行乳化。
15、进一步地，将收获牛副流感病毒3型阳性血清先经0.45μm无菌滤膜加压过滤，再经0.22μm无菌滤膜加压过滤，随后经过冻干后保存。
16、第二方面，本专利技术还提出了一种采用所述的制备方法制得的牛副流感病毒3型阳性血清。
17、进一步地，本专利技术还包括了所述牛副流感病毒3型阳性血清在以下方式中的应用：制备用于牛副流感病毒检验或鉴定的试剂或试剂盒；牛副流感病毒的特异性检验、鉴别检验、血凝血抑实验、外源病毒检验或诊断；制备牛副流感病毒血清标准品，与常规方案相比，本专利技术只需2次免疫即可获得高效价的牛副流感病毒3型阳性血清，无需再进行三次及以上的免疫方案，也无需进行病毒原液攻毒，可实现牛副流感病毒3型阳性血清产品的高效制备。
18、(三)有益效果
19、与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供了一种牛副流感病毒3型阳性血清及其制备方法，得到了一种高效价的牛副流感病毒3型阳性血清，阳性血清效价大于1:1024，可用于牛副流感病毒3型疫苗的特异性检验、鉴别检验、血凝血抑实验外源病毒检验以及诊断检测等用途。
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1.一种牛副流感病毒3型阳性血清的制备方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述灭活疫苗的制备方法包括：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述牛副流感病毒3型病毒株的保藏编号为CGMCC No.21115。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤2中，病毒接种时调整细胞密度为2.0×106个/ml，按培养体积2‰种毒，设置培养参数转速为80rpm、温度37℃、40％溶氧量、pH值7.4。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤3中，离心处理病毒液获得抗原，然后按照β丙内酯：抗原＝1:4000的体积比加入β丙内酯，置于4℃灭活28h，收获灭活液37℃水解2h，离心处理。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，离心处理灭活病毒液后还包括抗原浓缩纯化步骤：包括将离心后的灭活病毒液经过进行浓缩去除杂蛋白，浓缩后的病毒抗原血凝效价不低于1:256，然后进入步骤4。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，将抗原与206佐剂按照质量比1
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，将收获牛副流感病毒3型阳性血清先经0.45μm无菌滤膜加压过滤，再经0.22μm无菌滤膜加压过滤，随后经过冻干后保存。
9.一种采用如权利要求1至8中任意一项所述的制备方法制得的牛副流感病毒3型阳性血清。
10.一种如权利要求9所述的牛副流感病毒3型阳性血清在以下方式中的应用：
...【技术特征摘要】
1.一种牛副流感病毒3型阳性血清的制备方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述灭活疫苗的制备方法包括：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述牛副流感病毒3型病毒株的保藏编号为cgmcc no.21115。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤2中，病毒接种时调整细胞密度为2.0×106个/ml，按培养体积2‰种毒，设置培养参数转速为80rpm、温度37℃、40％溶氧量、ph值7.4。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤3中，离心处理病毒液获得抗原，然后按照β丙内酯：抗原＝1:4000的体积比加入β丙内酯，置于4℃灭活28h，收获灭活液37℃水解2h，离心处理。
【专利技术属性】
技术研发人员：张静，陈坚，贺瑶，李晓艳，王秉坤，吉格木德，
申请(专利权)人：金宇保灵生物药品有限公司，
类型：发明
国别省市：
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