【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物化学领域，特别是一种蛋白质荧光素标记方法。更具体地说，本专利技术提供了一种基于动态响应(如ph、温度和酶活性)的蛋白质荧光素标记方法，用于实现蛋白质标记的可控性和灵敏性，广泛应用于生物标记、细胞成像、疾病诊断及生物传感器等领域。
技术介绍
1、蛋白偶联荧光素的原理和方案在生物化学研究中至关重要，广泛应用于细胞成像、分子标记以及生物学研究中。这些方法通常用于标记抗体、酶、蛋白质等分子，以便后续分析、成像、检测等。蛋白质自身的检测信号主要有来自蛋白质本身的紫外吸收，有些蛋白质也有较弱的荧光，但是，这些检测信号强度都较弱，由此使得检测灵敏度较低，对于一些痕量的蛋白质，通过蛋白质自身的信号，难以实现有效的检测。
2、常见的蛋白质标记方法有异硫氰酸酯类荧光素，如fitc(异硫氰酸荧光素)、cy3、cy5等，是最常用的荧光素修饰试剂。这类荧光素能够与蛋白质的氨基(–nh2)基团发生反应，形成稳定的共价键。nhs(n-hydroxysuccinimide)酯法是另一种常见的蛋白标记方法，广泛应用于不同种类的修饰试剂。nhs酯反应通常与蛋白质中的氨基反应，形成稳定的酰胺键。二硫键桥联法(disulfide bond crosslinking)，此方法通常用于偶联带有巯基(–sh)基团的修饰试剂(如bodipy、fluorescein thiocyanate等)，通过二硫键桥联，可以在两种蛋白质或蛋白与荧光素之间形成稳定的共价结合。亲和层析法(affinity chromatographymethod)，此方法通过亲
3、蛋白质标记方法主要依赖静态标记，这些方法固定了标记的荧光性质，无法对生物环境的变化做出响应。然而，在很多实际应用中，生物环境(如ph、温度、酶活性等)会影响蛋白质的结构和功能，传统的静态标记方法无法适应这种变化。因此，亟需一种能够响应生物环境变化、实现“动态标记”或“可控标记”的创新方法。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本专利技术提供了一种基于动态响应的蛋白质荧光素标记方法，包括如下步骤：
2、步骤1、选择多种响应类型荧光素修饰剂；
3、步骤2、将目标蛋白质分子分别标记所述不同响应类型的荧光素修饰剂。
4、步骤3、监测标记蛋白在细胞培养过程中，随生物环境变化的动态响应荧光信号。
5、进一步的，所述响应类型荧光素修饰剂包括ph响应型荧光素修饰剂、温度响应型荧光素修饰剂和酶活性响应型荧光素修饰剂。
6、进一步的，所述ph响应型荧光素修饰剂为带有咪唑基团的荧光素。
7、进一步的，所述温度响应型荧光素修饰剂为带有热敏基团的荧光素。
8、进一步的，所述酶活性响应型荧光素修饰剂为含有蛋白酶识别位点的荧光素。
9、进一步的，随ph值增大，荧光强度逐渐降低。
10、进一步的，随温度升高，荧光强度逐渐增加。
11、进一步的，加入特定酶后，荧光强度增加。
12、一种所述的基于动态响应的蛋白质荧光素标记方法的应用，应用于生物标记、细胞成像、疾病诊断及生物传感器。
13、本专利技术提出了一种动态响应型标记技术，能够响应生物环境中的特定信号(如ph、温度、酶活性等)，使得标记的荧光强度发生变化，能够更精确地反映生物系统中蛋白质的行为和状态，尤其在实时监测和生物传感器等领域具有巨大优势。将多种响应型标记剂(例如，ph响应型、温度响应型、酶活性响应型)集成到一个标记体系中，赋予了标记系统更广泛的适用性和灵活性，尤其在细胞成像、疾病监测等多领域应用中具有重要价值。
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1.一种基于动态响应的蛋白质荧光素标记方法，其特征在于包括如下步骤：
2.步骤3、监测标记蛋白在细胞培养过程中，随生物环境变化的动态响应荧光信号。
3.如权利要求1所述的基于动态响应的蛋白质荧光素标记方法，其特征在于：所述响应类型荧光素修饰剂包括pH响应型荧光素修饰剂、温度响应型荧光素修饰剂和酶活性响应型荧光素修饰剂。
4.如权利要求2所述的基于动态响应的蛋白质荧光素标记方法，其特征在于：所述pH响应型荧光素修饰剂为带有咪唑基团的荧光素。
5.如权利要求2所述的基于动态响应的蛋白质荧光素标记方法，其特征在于：所述温度响应型荧光素修饰剂为带有热敏基团的荧光素。
6.如权利要求2所述的基于动态响应的蛋白质荧光素标记方法，其特征在于：所述酶活性响应型荧光素修饰剂为含有蛋白酶识别位点的荧光素。
7.如权利要求2所述的基于动态响应的蛋白质荧光素标记方法，其特征在于：随pH值增大，荧光强度逐渐降低。
8.如权利要求2所述的基于动态响应的蛋白质荧光素标记方法，其特征在于：随温度升高，荧光强度逐渐增加。
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1.一种基于动态响应的蛋白质荧光素标记方法，其特征在于包括如下步骤：
2.步骤3、监测标记蛋白在细胞培养过程中，随生物环境变化的动态响应荧光信号。
3.如权利要求1所述的基于动态响应的蛋白质荧光素标记方法，其特征在于：所述响应类型荧光素修饰剂包括ph响应型荧光素修饰剂、温度响应型荧光素修饰剂和酶活性响应型荧光素修饰剂。
4.如权利要求2所述的基于动态响应的蛋白质荧光素标记方法，其特征在于：所述ph响应型荧光素修饰剂为带有咪唑基团的荧光素。
5.如权利要求2所述的基于动态响应的蛋白质荧光素标记方法，其特征在于：所述温度响应型荧光素修饰剂为带有热敏基团的荧光素。
【专利技术属性】
技术研发人员：高阳，韩改净，
申请(专利权)人：北京航空航天大学杭州创新研究院，
类型：发明
国别省市：
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