【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物技术和分子育种，具体涉及与bns系列小麦雄性不育主效基因位点紧密连锁的kasp分子标记及其应用。
技术介绍
1、小麦光温敏雄性不育(ptsms)的利用是杂交小麦研究的一个重大进步。我国发现的小麦光温敏不育系，如es、c49s、zp、bs、ys和bns等类型，已成为杂交小麦研究的重要试材。
2、温敏核不育小麦bns，由茹振钢2002年培育成功，bns具有不育彻底和育性转换彻底的特性，育性变化趋势为：完全败育-半不育-完全可育。低温是影响bns育性转换的主要原因，表现为低温不育、高温可育。bns感受低温的敏感部位为发育的幼穗。bns育性转换敏感期在抽穗前5-18d，即雌雄蕊分化期至四分体形成期，在温度敏感期内，日最低温度低于8℃时表现彻底不育，形成不育系；8-12℃是育性转换温度；高于12℃时表现完全可育，形成可育系即为保持系。在豫北地区，9月23日至10月17日播种，表现彻底不育，可用于生产杂交种；11月18日以后播种均表现完全可育，可以自交繁殖不育系种子。bns不育系在我国的黄淮小麦主产地区表现不育性好、转换容易、有特定恢复性的优良特性，是一个非常有利用价值的可用于杂交小麦的不育系材料。bns366由bns与郑麦366饱和回交培育而成，具有与bns一致的不育特性和育性转换规律，且不育特性更稳定，以bns和bns366等系列类似温敏核不育材料(统称为bns系列)为亲本，可以转育创建出更多新的不育系，为杂交小麦高效制种体系提供丰富的种质资源。
3、以bns系列小麦为亲本创建新的不育系过程中，
4、传统的连锁标记操作复杂、通量小、劳动力消耗量大。kasp基因分型技术是一项独特的竞争型等位基因特异性pcr，可对各种基因组核酸样品进行snps和indels(insertiondeletion)高精度双等位基因分型。kasp技术操作简单，分析稳定、准确，并且成本较低。以bns366(雄性不育)为母本，以周麦18(雄性可育)为父本，进行杂交后的种子在正常秋季播种条件下(在河南新乡地区播种，10月10日至10月13日)和晚播条件下(12月1日至12月3日)，f1自交后国际法自交结实率[＝(穗粒数/(2*小穗数)*100％)均低于5％，以在正常秋季播种条件下更低，接近于零，表明周麦18中没有bns366的恢复基因，然后收集f1代产生的种子种植形成f2代的不同单株，保存叶片提取dna，检测其国际法自交结实率，按单株单穗收集f2代形成的种子后，在正常秋季播种条件下种植形成f3代植株，检测f3代穗行每单株的国际法自交结实率，以判断f2代单株雄性可育表型在后代是否会出现分离现象。将经判断f2代雄性不育单株、雄性可育单株(其f3代均保持雄性可育表型的对应单株)、bns366和周麦18的dna构建成雄性不育池、雄性可育池、雄性不育亲本和雄性可育亲本四种样品，采用660k芯片进行检测，检测出雄性不育池与雄性不育亲本一致，与雄性可育亲本不一致的snp位点即数据1，同时检测出雄性可育池与雄性可育亲本一致，与雄性不育亲本不一致的snp位点即数据2，再得到数据1和数据2的交集即数据3，然后根据数据3设计kasp引物，用设计的kasp引物检测其在bns366、周麦18、雄性不育单株、雄性可育单株中分型情况，筛选出与一套bns366雄性不育主效基因紧密连锁的功能分子标记，可以对bns366雄性不育主效基因位点进行定位和检测，对bns系列小麦或以其为原始材料转育创建新的不育系过程中的中间材料进行不育基因的鉴别，进行不育基因的转移和聚合，可以避免传统育种中的盲目性，极大地减小群体规模，节省成本，同时增加选择的准确性和效率。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供了与bns系列小麦雄性不育主效基因位点紧密连锁的kasp分子标记及其应用，以利用该分子标记对bns系列小麦雄性不育主效基因位点进行定位和检测，在bns系列雄性不育小麦新种质转育创制中对后代进行有目的的选择，为创制具备bns系列雄性不育特性的小麦新品系提供了指导依据。
2、本专利技术为实现上述目的采用如下技术方案：与bns系列小麦雄性不育主效基因位点紧密连锁的kasp分子标记，其特征在于：所述bns系列小麦雄性不育主效基因位点位于小麦2a染色体上，与其紧密连锁的kasp分子标记为ax-174216228和ax-109413735；
3、所述ax-174216228的kasp分子标记引物分别是核苷酸序列如seq id no:1所示的上游引物al1(fam)、核苷酸序列如seq id no:2所示的上游引物al2(vic)、核苷酸序列如seq id no:3所示的下游引物c(com)；
4、所述ax-109413735的kasp分子标记引物分别是核苷酸序列如seq id no:4所示的上游引物al1(fam)、核苷酸序列如seq id no:5所示的上游引物al2(vic)、核苷酸序列如seq id no:6所示的下游引物c(com)。
5、本专利技术所述的与bns系列小麦雄性不育主效基因位点紧密连锁的kasp分子标记在bns系列小麦雄性不育主效基因定位和检测中的应用。
6、本专利技术所述的与bns系列小麦雄性不育主效基因位点紧密连锁的kasp分子标记在创制具备bns系列雄性不育特性的小麦新品系中的应用。
7、本专利技术所述的与bns系列小麦雄性不育主效基因位点紧密连锁的kasp分子标记在温敏核不育小麦选择育种中的应用。
8、本专利技术所述上述与bns系列小麦雄性不育主效基因位点紧密连锁的kasp分子标记的应用具体包括以下步骤：
9、(1)提取待测小麦样品的dna；
10、(2)收到引物合成后的干粉分别用ddh2o稀释成100mmol·l-1，并充分涡旋振荡溶解，分别得到引物al1(fam)溶液、al2(vic)溶液和c(com)溶液，取2d管和caps加入10mmtris-hcl 230μl，取al1(fam)溶液和al2(vic)溶液各60μl、c(com)溶液150μl，混匀离心后得到引物混液，并入库；其中ax-174216228的kasp分子标记引物分别是核苷酸序列如seqid no:1所示的上游引物al1(fam)、核苷酸序列如seq id no:2所示的上游引物al2本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.与BNS系列小麦雄性不育主效基因位点紧密连锁的KASP分子标记，其特征在于：所述BNS系列小麦雄性不育主效基因位点位于小麦2A染色体上，与其紧密连锁的KASP分子标记为AX-174216228和AX-109413735；
2.权利要求1所述的与BNS系列小麦雄性不育主效基因位点紧密连锁的KASP分子标记在BNS系列小麦雄性不育主效基因定位和检测中的应用。
3.权利要求1所述的与BNS系列小麦雄性不育主效基因位点紧密连锁的KASP分子标记在创制具备BNS系列雄性不育特性的小麦新品系中的应用。
4.权利要求1所述的与BNS系列小麦雄性不育主效基因位点紧密连锁的KASP分子标记在温敏核不育小麦选择育种中的应用。
5.根据权利要求2-4中任意一项所述的应用，其特征在于具体过程为：
6.一种BNS系列小麦雄性不育相关分型检测试剂盒，其特征在于包括如权利要求1所述的与BNS系列小麦雄性不育主效基因位点紧密连锁的KASP分子标记。
7.权利要求6所述的BNS系列小麦雄性不育相关分型检测试剂盒在在创制具备BNS系列雄性不
...【技术特征摘要】
1.与bns系列小麦雄性不育主效基因位点紧密连锁的kasp分子标记，其特征在于：所述bns系列小麦雄性不育主效基因位点位于小麦2a染色体上，与其紧密连锁的kasp分子标记为ax-174216228和ax-109413735；
2.权利要求1所述的与bns系列小麦雄性不育主效基因位点紧密连锁的kasp分子标记在bns系列小麦雄性不育主效基因定位和检测中的应用。
3.权利要求1所述的与bns系列小麦雄性不育主效基因位点紧密连锁的kasp分子标记在创制具备bns系列雄性不育特性的小麦新品系...
【专利技术属性】
技术研发人员：茹振钢，刘海英，崔长海，陈向东，董娜，王亚楠，
申请(专利权)人：河南科技学院，
类型：发明
国别省市：
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