【技术实现步骤摘要】
技术介绍
1、cd40(肿瘤坏死因子受体超家族5，或分化簇40)是tnf受体超家族(tnfrsf)的成员，并且是在抗原呈递细胞(apc)(诸如树突状细胞(dc)、b细胞和巨噬细胞)以及非免疫细胞和肿瘤上表达的共刺激分子。cd40在调节apc的活性以及连接先天免疫和适应性免疫中起重要作用。cd40通路不仅是有效的t细胞和b细胞免疫应答所需的，而且还在体液免疫和细胞免疫的发展中提供了关键的初始步骤。
2、在激活后，cd40可诱导树突状细胞促进抗肿瘤t细胞激活，并且重新诱导巨噬细胞破坏肿瘤基质。cd40的激活已与用于治疗癌症的其他疗法诸如免疫检查点抑制剂组合使用。化疗后cd40激活的组合起到原位疫苗的作用。此外，据报道，cd40激活的巨噬细胞迅速浸润肿瘤并促进肿瘤基质的耗竭，并进一步增强化疗递送。总之，cd40激活有助于将所谓的冷肿瘤转化为热肿瘤的重要机制。
3、已经制定了多种方法来激活癌症患者中的cd40。最初的cd40治疗激动剂基于其配体的多聚体形式，即cd40l。随后，该方法主要基于激动剂cd40抗体，其被设计成通过交联cd40来模拟cd40l。研究最广泛的一种抗体是塞鲁单抗(selicrelumab)(roche)，以前称为cp-870,893和ro7009789，它是一种完全人igg2 mab。其他抗体包括cdx-1140(celldex)、apx005m(apexigen)、sea-cd40(seattlegenetics)、chilob7/4(南安普敦大学)和adc-1013(janssen/a
4、对这些cd40激动剂的临床研究揭示了一组常见的剂量依赖性不良事件。其中，主要的不良事件是细胞因子释放综合征(crs)，其特征在于寒战、僵直、皮疹、恶心、发热、呕吐、肌肉疼痛和背痛的多种组合。另一个主要的安全性问题是剂量相关的血液毒性，诸如外周淋巴细胞、单核细胞和血小板的减少。此类报道的毒性被认为是cd40激动剂疗法的遗留问题，并阻止了专家推进这些候选物的临床开发。迫切需要开发具有有效治疗效果而没有相关毒性的cd40激动剂抗体。
技术实现思路
1、如所提供的，现有的cd40激动剂抗体尽管具有可接受的cd40激活功效，但与常见的不良事件诸如细胞因子释放综合征(crs)相关。这些不良作用与cd40激动作用的生物学机制有着内在联系，因此控制这些不良作用而不牺牲治疗功效是具有挑战性的。
2、然而，通过仔细的设计和选择，本专利技术人已经鉴定了新的cd40激动剂纳米抗体，其与现有的抗体(诸如塞鲁单抗)相比具有显著降低的cd40激活能力。然而，当以双特异性或多特异性格式使用时，新鉴定的抗体表现出有效的激活活性，该双特异性或多特异性格式还包含靶向靶细胞上表达的肿瘤相关抗原(taa)的抗体部分。因此，新鉴定的抗体的taa依赖性使得这些新抗体在需要活性的地方(例如，在靶肿瘤部位处)呈现高度治疗活性，而在其他地方呈现较低活性或者甚至无活性。后一种特性因此可减少或者甚至消除那些通常与其他cd40激动剂抗体相关的不良作用。
3、因此，根据本公开的一个实施方案，提供了单域抗体或包含该单域抗体的多肽，其中该单域抗体对人分化簇40(cd40)蛋白具有结合特异性并且包含互补决定区1(cdr1)、cdr2和cdr3。
4、在一些实施方案中，该cdr1、cdr2和cdr3分别包含(1)seq id no:14、15和16的氨基酸序列；(1a)seq id no:14、63和16的氨基酸序列；(1b)seq id no:14、64和16的氨基酸序列；(2)seq id no:17、18和19的氨基酸序列；(3)seq id no:20、21和22的氨基酸序列；(4)seq id no:23、24和25的氨基酸序列；(5)seq id no:26、27和28的氨基酸序列；(6)seqid no:29、30和31的氨基酸序列；(7)seq id no:32、33和34的氨基酸序列；(8)seq id no:35、36和37的氨基酸序列；(9)seq id no:38、39和40的氨基酸序列；(10)seq id no:41、42和43的氨基酸序列；(11)seq id no:44、45和46的氨基酸序列；(12)seq id no:47、48和49的氨基酸序列；或(13)seq id no:50、51和52的氨基酸序列。
5、在一些实施方案中，该cdr1包含seq id no:14的氨基酸序列，该cdr2包含seq idno:15、63或64的氨基酸序列，并且该cdr3包含seq id no:16的氨基酸序列。
6、在一些实施方案中，该cdr1包含seq id no:14的氨基酸序列，该cdr2包含seq idno:15的氨基酸序列，并且该cdr3包含seq id no:16的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗体或多肽包含选自seq id no:53、54、57和60的氨基酸序列。
7、在一些实施方案中，该cdr1包含seq id no:14的氨基酸序列，该cdr2包含seq idno:63的氨基酸序列，并且该cdr3包含seq id no:16的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗体或多肽包含选自seq id no:55、58和61的氨基酸序列。
8、在一些实施方案中，该cdr1包含seq id no:14的氨基酸序列，该cdr2包含seq idno:64的氨基酸序列，并且该cdr3包含seq id no:16的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗体或多肽包含选自seq id no:56、59和62的氨基酸序列。
9、在一个实施方案中，还提供了多特异性抗体，其包含本公开的抗体和对非cd40的第二靶抗原具有结合特异性的第二抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，该第二靶抗原是肿瘤相关抗原(taa)。
10、另一个实施方案提供了多特异性抗体，其包含对人cd40具有结合特异性的第一抗体或抗原结合片段，和对第二靶抗原具有结合特异性的第二抗体或抗原结合片段，该第二靶抗原是肿瘤相关抗原(taa)，其中与不表达taa的参考细胞上的cd40相比，该多特异性抗体更有效地激活表达taa的靶细胞上的cd40。
11、另一个实施方案提供了多特异性抗体，其包含对人cd40具有结合特异性的第一抗体或抗原结合片段，和对第二靶抗原具有结合特异性的第二抗体或抗原结合片段，该第二靶抗原是肿瘤相关抗原(taa)，其中该多特异性抗体不激活不表达taa的参考细胞上的cd40。
12、在一些实施方案中，该多特异性抗体激活表达taa的靶细胞上的cd40的效果是不表达taa的参考细胞上的cd4本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种单域抗体或包含所述单域抗体的多肽，其中所述单域抗体对人分化簇40(CD40)蛋白具有结合特异性并且包含互补决定区1(CDR1)、CDR2和CDR3，其中所述CDR1、CDR2和CDR3分别包含：
2.根据权利要求1所述的抗体或多肽，其中所述CDR1包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列，所述CDR2包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列，并且所述CDR3包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的抗体或多肽，所述抗体或多肽包含选自SEQ ID NO:53、54、57和60的氨基酸序列。
4.根据权利要求1所述的抗体或多肽，其中所述CDR1包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列，所述CDR2包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列，并且所述CDR3包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列。
5.根据权利要求4所述的抗体或多肽，所述抗体或多肽包含选自SEQ ID NO:55、58和61的氨基酸序列。
6.根据权利要求1所述的抗体或多肽，其中所述CDR1包含SEQ ID NO:14的氨基酸
7.根据权利要求6所述的抗体或多肽，所述抗体或多肽包含选自SEQ ID NO:56、59和62的氨基酸序列。
8.一种或多种多核苷酸，所述多核苷酸编码根据权利要求1至7中任一项所述的抗体或多肽。
9.根据权利要求8所述的多核苷酸，所述多核苷酸是一种或多种mRNA；其中所述mRNA是经化学修饰的。
10.一种细胞，所述细胞包含根据权利要求9所述的多核苷酸。
...【技术特征摘要】
1.一种单域抗体或包含所述单域抗体的多肽，其中所述单域抗体对人分化簇40(cd40)蛋白具有结合特异性并且包含互补决定区1(cdr1)、cdr2和cdr3，其中所述cdr1、cdr2和cdr3分别包含：
2.根据权利要求1所述的抗体或多肽，其中所述cdr1包含seq id no:14的氨基酸序列，所述cdr2包含seq id no:15的氨基酸序列，并且所述cdr3包含seq id no:16的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的抗体或多肽，所述抗体或多肽包含选自seq id no:53、54、57和60的氨基酸序列。
4.根据权利要求1所述的抗体或多肽，其中所述cdr1包含seq id no:14的氨基酸序列，所述cdr2包含seq id no:63的氨基酸序列，并且所述cdr3包含seq id no:16的氨...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘芳，杨园园，巩文词，蔡知见，蒋雯卿，方磊，
申请(专利权)人：乐普创一生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：
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