【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，尤其涉及一种多肽、多聚体及其在免疫球蛋白亲和配体中的应用。
技术介绍
1、天然蛋白质由20种氨基酸残基组成，每个氨基酸残基的性质受其侧链官能团性质的影响。通常，蛋白质利用侧链在不溶性载体或类似物上的反应进行化学键合，并尝试固定化。但是，很多天然来源蛋白质的氨基酸残基数都远远超过一百个，如果着眼于某个特定的氨基酸残基，每个蛋白质分子中都存在多个氨基酸残基。这就是利用特定氨基酸的官能团进行固定化和化学修饰时难以控制反应的主要原因之一。
2、蛋白a来源于金黄色葡萄球菌，具有五个免疫球蛋白结合结构域(e、d、a、b、c)，这些结构域均可以单独结合免疫球蛋白，且均含有赖氨酸(lys，k)，均不含有半胱氨酸(cys)。因b结构域与免疫球蛋白具有较好结合特异性而应用较为广泛。将b结构域中第1位的丙氨酸和第29位的甘氨酸分别突变为缬氨酸和丙氨酸即衍生z结构域，z结构域具备更加突出的化学稳定性。目前，通过重组蛋白质工程技术产生的蛋白a变体和天然蛋白a被广泛作为配体固定在水不溶性载体上。
3、将蛋白a等配体固定在载体上即生成可结合免疫球蛋白的介质，单位重量或单位体积的介质应具备较大的免疫球蛋白结合量，此性质对于降低免疫球蛋白纯化的成本至关重要。为了解决此问题，提升免疫球蛋白结合蛋白的性能是其中重要的一个部分。将包括蛋白a在内的蛋白质配体固定到载体上时，单个位点固定在允许控制方向和有效利用载体表面积方面是有利的。目前已有的技术大多是在蛋白末端增加cys位点，而末端含有cys位点的蛋白质容易形成二聚体。鉴
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提出了一种多肽、多聚体及其在免疫球蛋白亲和配体中的应用，该多聚体可作为亲和层析介质，对免疫球蛋白具有较高的结合能力。
2、本专利技术的技术方案是这样实现的：第一方面，本专利技术提供了一种多肽，所述多肽包括seq id no:1所示的蛋白a的b结构域中的第49-58位氨基酸序列截断后的seq id no:2所示的氨基酸序列。
3、在以上技术方案的基础上，优选的，seq id no:2所示的氨基酸序列在第4位、第7位和第35位的lys残基均发生取代突变。
4、在以上技术方案的基础上，优选的，第4位、第7位和第35位的lys残基被取代为甘氨酸、苯丙氨酸、天冬酰胺、缬氨酸、组氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸、苏氨酸、酪氨酸、丝氨酸和精氨酸中的一种或多种。
5、具体的，第4位、第7位和第35位的三个lys残基被不同的氨基酸取代或者被相同的氨基酸取代。
6、在以上技术方案的基础上，优选的，第4位、第7位和第35位的三个lys残基均被甘氨酸取代，氨基酸序列如seq id no:3所示。
7、在以上技术方案的基础上，优选的，第4位、第7位和第35位的三个lys残基均被精氨酸取代，氨基酸序列如seq id no:4所示。
8、第二方面，本专利技术还提供了一种多聚体，所述多聚体包括2-6个连接的多肽，所述多肽为seq id no:2～4所示的任意一种多肽。
9、在以上技术方案的基础上，优选的，多肽之间通过c端和n端的肽键各自直接连接或通过接头连接。
10、接头是本领域常规使用的接头，其存在不影响多肽的结合活性。示例性的接头为含有g和s或由g和s组成的接头序列，通常长2-20个氨基酸残基。示例性的接头序列如(g)n、(gs)n、(gss)n、(gsss)n、(gssss)n以及(ggggs)n，n可为2-10的整数，但接头总长度通常不超过20个氨基酸残基。
11、在以上技术方案的基础上，优选的，所述多聚体的氨基酸序列的末端添加1-10个lys残基的修饰。
12、在以上技术方案的基础上，优选的，所述多聚体的氨基酸序列含有或者不含有标签。
13、标签是本领域常规使用的标签，其存在不影响多聚体的结合活性。示例性的标签包括his-tag(组氨酸标签)、gst-tag(谷胱甘肽巯基转移酶标签)、mbp-tag(麦芽糖结合蛋白标签)、sumo-tag(小分子泛素样修饰蛋白标签)等。
14、在以上技术方案的基础上，优选的，所述多聚体的氨基酸序列如seq id no:5～7、seq id no:15～17和seq id no:25～27所示。
15、第三方面，本专利技术还提供了一种多聚体在免疫球蛋白亲和配体中的应用。
16、本专利技术的一种多肽、多聚体及其在免疫球蛋白亲和配体中的应用相对于现有技术具有以下有益效果：
17、本专利技术提供了一种免疫球蛋白亲和配体，其具有较高的免疫球蛋白结合能力。通过修饰seq id no:1所示的蛋白a的b结构域，首先，使第49-58位的氨基酸截断生成截短体，接着将截短体中的所有lys做取代突变，最后将截短体的赖氨酸突变体做多次串联重复构建多聚体并在多聚体末端添加1-10个lys作为偶联元件。改造后的配体可以通过偶联元件的氨基固定在不溶性载体上。与截短体相比，其赖氨酸突变体在载体上的取向得到改善，单位重量或单位体积的载体能够结合更多的免疫球蛋白，从而提高了与免疫球蛋白的结合能力。本专利技术的优点是可以改善配体取向，提高配体的免疫球蛋白结合能力。
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1.一种多肽，其特征在于：所述多肽包括SEQ ID NO:1所示的蛋白A的B结构域多肽的第49-58位氨基酸序列截断后的SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
2.如权利要求1所述的一种多肽，其特征在于：SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列在第4位、第7位和第35位的赖氨酸残基均发生取代突变。
3.如权利要求2所述的一种多肽，其特征在于：第4位、第7位和第35位的赖氨酸残基被取代为甘氨酸、苯丙氨酸、天冬酰胺、缬氨酸、组氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸、苏氨酸、酪氨酸、丝氨酸和精氨酸中的一种或多种。
4.如权利要求3所述的一种多肽，其特征在于：第4位、第7位和第35位的三个赖氨酸残基均被甘氨酸取代，氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。
5.如权利要求3所述的一种多肽，其特征在于：第4位、第7位和第35位的三个赖氨酸残基均被精氨酸取代，氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。
6.一种多聚体，其特征在于：所述多聚体包括2-6个连接的多肽，所述多肽为权利要求1-5任一项所述的多肽。
7.如权利要求6所述的一种
8.如权利要求6所述的一种多聚体，其特征在于：所述多聚体的氨基酸序列的末端添加1-10个赖氨酸残基的修饰。
9.如权利要求6所述的一种多聚体，其特征在于：所述多聚体的氨基酸序列如SEQ IDNO:5～7、SEQ ID NO:15～17和SEQ ID NO:25～27所示。
10.如权利要求6-9任一项所述的一种多聚体在免疫球蛋白亲和配体中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种多肽，其特征在于：所述多肽包括seq id no:1所示的蛋白a的b结构域多肽的第49-58位氨基酸序列截断后的seq id no:2所示的氨基酸序列。
2.如权利要求1所述的一种多肽，其特征在于：seq id no:2所示的氨基酸序列在第4位、第7位和第35位的赖氨酸残基均发生取代突变。
3.如权利要求2所述的一种多肽，其特征在于：第4位、第7位和第35位的赖氨酸残基被取代为甘氨酸、苯丙氨酸、天冬酰胺、缬氨酸、组氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸、苏氨酸、酪氨酸、丝氨酸和精氨酸中的一种或多种。
4.如权利要求3所述的一种多肽，其特征在于：第4位、第7位和第35位的三个赖氨酸残基均被甘氨酸取代，氨基酸序列如seq id no:3所示。
5.如权利要求3所述的一种多肽，...
【专利技术属性】
技术研发人员：高双双，陶新园，蔡晓宾，闫天慧，许远，张淦，王业富，
申请(专利权)人：武汉瑞法医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：
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