【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程和抗体药物领域；具体而言，涉及一种抗cd47单克隆抗体。
技术介绍
1、cd47抗体又称为整合素相关蛋白(integrin associatedprotein，iap)，是免疫球蛋白超家族成员，在结构上包括一个氨基端细胞外可变区域，由3～5个高度疏水的跨膜片段构成的跨膜区域和一个亲水的羧基端胞质尾区组成。cd47广泛表达于各种组织细胞的表面，尤其在肿瘤细胞表面呈现高表达，包括非霍奇金淋巴瘤(nhl)、急性淋巴细胞性白血病(all)、急性骨髓性白血病(aml)、卵巢癌、胶质瘤、胶质母细胞瘤等。斯坦福大学的weissman等人系统的研究了多种实体瘤中cd47的表达水平，结果表明，所有人类实体瘤细胞中的cd47都呈高表达，其平均表达水平是对应正常细胞的3.3倍左右。而且，他们发现实体瘤病人cd47的水平与预后指数呈负相关。此外，cd47被确认为白血病和实体瘤两者的癌干细胞标记(majeti，等人，2009cell，138:286-99；rendtlew等人，2007br j haematal138:756-60；chan等人，2009proc acad sci usa,106:14016-21；majeti,等人2011oncogene,30:1009-19)。
2、sirpα(信号调节蛋白α(signal regulatory proteinα))，又称shps-1(含src同源2结构域蛋白酪氨酸激酶底物-1(src homology 2domain-containing protein tyros
3、cd47是sirpα的配体，二者通过胞外结构域相互作用，形成细胞间的通讯复合物。cd47与sirpα结合后，诱导sirpα胞内itim磷酸化，磷酸化位点结合进而激活含有sh2(src同源2(src homology 2))结构域的酪氨酸磷酸酶shp-1和shp-2，引发信号传递的级联反应。shp-1主要表达于造血细胞，负向调节这些细胞的功能；而shp-2表达非常广泛，调节小g蛋白ras和rho，正向控制细胞生长和增殖。
4、sirpα在神经元以及髓系造血细胞(如巨噬细胞和树突细胞)中表达丰富，而cd47则表达于多数细胞中。cd47-sirpα信号系统对调节巨噬细胞对成熟血细胞的吞噬具有重要作用。正常健康细胞(如红细胞或血小板)表面的cd47分子与巨噬细胞上的受体sirpα相互作用产生抑制性信号，抑制其吞噬活性，达到调节血细胞的生命周期及其在血液中的数量的目的。单核细胞上的sirpα与红细胞上的cd47作用，通过肌球蛋白-iia去磷酸化抑制fcγ受体依赖的吞噬作用。cd47-sirpα信号系统抑制树突细胞激活，参与神经系统发育、中性粒细胞趋化激活和基质细胞支持的造血细胞生成等多种生理活动，同时在诱导t细胞免疫耐受、活化、凋亡等方面也发挥着多种调节作用。
5、近年来，cd47-sirpα信号系统通过调节巨噬细胞的肿瘤免疫监视中发挥的作用受到重视。cd47在许多恶性肿瘤，如卵巢癌、急性骨髓白血病(aml)、b细胞淋巴瘤和实体瘤中的表达水平显著上调，而且这种上调与恶性肿瘤患者的不良预后直接相关。在人髓性白血病细胞(低水平表达内源cd47，不能移植于rag2-i12rg-小鼠)中表达小鼠cd47，可以抑制巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用，促进肿瘤细胞成功移植。可以推断，肿瘤细胞上的cd47与巨噬细胞上的sirpα作用，抑制巨噬细胞对肿瘤细胞的清除，促进肿瘤在体内的生长和转移，高表达cd47是肿瘤细胞逃逸免疫监视的普遍机制，阻断cd47-sirpα作用，可能是新的肿瘤免疫治疗策略。
6、抗cd47抗体单独使用或者与其他肿瘤抗原抗体联合应用，在人急性骨髓性白血病、非霍奇金淋巴瘤(nhl)以及许多实体瘤的小鼠移植模型上都显示了很好的抑制肿瘤生长的作用。人源化抗cd47单克隆抗体诱导巨噬细胞对人原代aml细胞的吞噬作用，在体内彻底清除人aml细胞，使得移植小鼠长期无病生存；与利妥昔单抗联合作用，能清楚nhl肿瘤，治愈异种移植小鼠。而且，抗cd47抗体的安全性在猴体内得到证实。除了抗cd47抗体，高亲和力的sirpα突变体(cd172a)也可以拮抗cd47进而阻断cd47-sirpα信号通路，在aml模型上能显著增加巨噬细胞对aml细胞的吞噬作用，并抑制肿瘤的生长。
7、然而，针对该靶点的抗体主要研究瓶颈是开发出不与红细胞结合或者不具有显著凝集作用的单克隆抗体药物。
技术实现思路
1、本专利技术基于现有技术的不足，提供一种人鼠嵌合与cd47特异性结合，阻断cd47与sirpα的相互作用，并且不具有显著血细胞凝集活性。
2、本专利技术第一方面是提供一种人鼠嵌合与cd47特异性结合的抗体，
3、所述抗cd47抗体包含hcdr1、hcdr2和hcdr3序列的重链可变区和含lcdr1、lcdr2和lcdr3序列的轻链可变区。
4、其中hcdr1的序列为seq id no：3、seq id no：6、seq id no：7或seq id no：10；
5、hcdr2的序列为seq id no：4、seq id no：8或seq id no：11；
6、hcdr3的序列为seq id no：5、seq id no：9或seq id no：12；
7、lcdr1的序列为seq id no：13、seq id no：16或seq id no：20；
8、lcdr2的序列为seq id no：14、seq id no：17、seq id no：18或seq id no：21；
9、lcdr3的序列为seq id no：15或seq id no：19或seq id no：22。
10、cdr(互补决定区，complementarity determining region)通常指抗体中在空间结构上可以与抗原决定簇形成互补的区域。抗体中的可变性通常并不均匀地分布在整个抗体的可变区中，单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区通常具有3个超变区(hypervariable region，hvr)，这些区域在空间结构上通常可以与抗原决定簇形成互补，所以超变区也被称为互补决定区(complementarity determining region，cdr)即重链可变区通常包括三个互补决定区，即cdrh1、cdrh2和cdrh3，轻链可变区通常包括三个互补决定区，即cdrl1、cd本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗CD47单克隆抗体，其特征在于，所述抗CD47抗体包括HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重链可变区和含LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的轻链可变区；其中，所述抗体的重链可变区的的互补决定区包括氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示的HCDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示的HCDR2，氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示的HCDR3；轻链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示的LCDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO：18所示的LCDR2，氨基酸序列如SEQ ID NO：19所示的LCDR3。
2.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗CD47抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：25所示，轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：29所示。
3.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体的重链的多核苷酸序列如SEQ IDNO：33所示；其轻链的多核苷酸序列如SEQ ID NO：37所示。
4.一种多核苷酸分子，编码如权利要求1-3任一项权利要求所述的抗CD47单克隆
5.一种表达载体，含有权利要求4所述的多核苷酸分子。
6.一种宿主细胞，转化如权利要求5所述的表达载体。
7.如权利要求1-3任一项所述的CD47单克隆抗体在制备抗肿瘤治疗药物中的用途、或制备诊断肿瘤药物中的用途；所述肿瘤为非霍奇金淋巴瘤、急性淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、卵巢癌、胶质瘤、胶质母细胞瘤、肺癌、胃癌、宫颈癌或B淋巴瘤。
...【技术特征摘要】
1.一种抗cd47单克隆抗体，其特征在于，所述抗cd47抗体包括hcdr1、hcdr2和hcdr3序列的重链可变区和含lcdr1、lcdr2和lcdr3序列的轻链可变区；其中，所述抗体的重链可变区的的互补决定区包括氨基酸序列如seq id no：7所示的hcdr1，氨基酸序列如seq id no：8所示的hcdr2，氨基酸序列如seq id no：9所示的hcdr3；轻链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如seq id no：16所示的lcdr1，氨基酸序列如seq id no：18所示的lcdr2，氨基酸序列如seq id no：19所示的lcdr3。
2.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗cd47抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq id no：25所示，轻链...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵丽丽，张娜，李振宇，刘忠，沈素芹，
申请(专利权)人：鲁南制药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。