【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及种质资源鉴定，具体来说是一种鉴定锦屏鹅和太湖鹅的分子标记、引物及试剂盒和应用。
技术介绍
1、随着肉鹅产业的发展，对优质肉鹅品种资源的纯种繁育需求量越来越大，贵州锦屏鹅和太湖鹅都属于我国优质肉鹅种质资源，都属于国家畜禽品种资源中的地方肉鹅品种资源。针对贵州本地白鹅和太湖白鹅的鹅蛋、具有体形外貌相近的特点，在种鹅生产中存在本地肉鹅种质资源与外地品种资源不容易早期鉴别的问题，然而等肉鹅长大以后再进行鉴别既耽误时间又增加鹅的饲养成本。所以在肉鹅新品种的培育过程中需要进行种质资源的纯种繁殖。进而在选育过程中需要用到对本地肉鹅种质资源的一些具有特殊功能的基因进行筛选与鉴定，特别是与本地资源的基因特有的分子特性基因序列进行精准选育。一个新品种的培育包括纯种繁育和杂交两个方面的技术，无论是利用本品种的纯种繁育和还是利用杂交优势都需要首先对种质资源的品种进行准确判断，有了好的种鹅，才能繁育出优质的肉鹅新品种。但是，目前用于繁殖和选育的过程中多采用传统的根据体形外貌来判断品种资源的选育方法，需要种鹅品种长大了以后具有典型的体形外貌特征了才好判断：这种传统的繁殖选育方式所需要的时间周期就很长，并且不利于优势基因的保留，很难精准选择出性状优良的种鹅和后代。
2、太湖鹅原产于长江三角洲的太湖地区，遍布于江浙两省太湖周边地区、上海市郊县以及江苏省大部，溧阳常武等地区。太湖鹅体态中小，体质细致紧凑，全身羽毛紧贴。没有肉瘤，无皱褶。颈细长呈弓形，无咽袋，无包。从外表看，公母差异不大，公鹅体型较高大雄伟，常昂首挺胸展翅行走，叫声宏亮，
3、锦屏鹅是近年来贵州省锦屏县重点培育的肉鹅新品种选育集成群体，锦屏县把生态鹅产业作为“一县一业”主导产业来发展，着力打造以鹅培育、鹅养殖、鹅销售及鹅绒产品加工为一体的产业发展体系，带动农民增收致富。锦屏鹅包括了贵州织金白鹅、四川白鹅、渝州白鹅等肉鹅品种资源的血源。全身羽毛洁白，偶在眼梢、头顶、腰背部有少量灰褐色斑点；喙、胫、蹼均橘红色，喙端色较淡，爪白色；眼睑淡黄色，虹彩灰蓝色。雏鹅全身乳黄色，喙、胫、蹼橘黄色。
4、随着分子技术的发展，分子技术已经应用到不同的领域，本技术就是利用分子生物学技术，从种蛋或者雏鹅阶段就对于贵州本地的锦屏鹅和太湖鹅进行早期的分子鉴别以解决上述存在的问题。达到早期准鉴别贵州本地锦屏鹅和太湖鹅，缩短新品种育种周期的目的。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种早期鉴别贵州本地锦屏鹅和太湖白鹅的分子鉴别技术及应用，以解决上述种鹅培育过程中存在的早期种鹅蛋和雏鹅生产管理中不易区分、育种周期长问题，通过所设计的引物对，能够实现对贵州本地白鹅和太湖白鹅的种蛋和雏鹅阶段精准区别和鉴定，对贵州本地肉鹅纯种繁殖、选育与新品种的培育都具有重要的意义。
2、为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：
3、本专利技术设计引物（seq id no.2～3）克隆了贵州锦屏鹅泛酰巯基乙胺酶（vnn1）基因的cds区序列，序列如seq id no.1所示，与太湖鹅vnn1基因的cds区序列（ncbiaccession no:ky399733.1)进行序列比对，发现两个肉鹅品种在核苷酸序列的差异而导致氨基酸的差异的突变有：第1225位（a/g）导致氨基酸序列第410位差异为（甘氨酸g/精氨酸r）；第1426位（c/g）、第1429位（t/g）、第1431位（a/c）三个位点的突变造成核苷酸序列（ctctta/gtcgtc）导致氨基酸序列第476-477位差异为两个亮氨酸被两个缬氨酸取代（亮氨酸l、亮氨酸l /缬氨酸v、缬氨酸v）；第1411位（t/a）等位点的突变和缺失造成第1407-1418核苷酸序列（a-atagcacatca/acaaaac-caaca）导致氨基酸序列在第470-473位（nsts/tkpt）。
4、贵州锦屏鹅和太湖鹅vnn1基因，分析发现vnn1基因的cds区核苷酸序列具备5个snp位点，具体为：第1225位a/g、第1411位t/a、第1426位c/g、第1429位t/g、第1431位a/c，vnn1基因cds区核苷酸序列第1225位a、第1411位t、第1426位c、第1429位t和第1431位a时，待测品种为锦屏白鹅；vnn1基因cds区核苷酸序列第1225位g、第1411位a、第1426位g、第1429位g和第1431位c时，待测品种为太湖白鹅。
5、本专利技术的另一目的是提供一种用于锦屏白鹅和太湖白鹅品种鉴定的试剂盒，所述试剂盒含有如seq id no.2～3所示引物。
6、本专利技术的另一的是提供一种如seq id no.1所示vnn1基因作为分子标记鉴定锦屏白鹅和太湖白鹅品种的方法，trizol法提取总mrna，反转录成cdna后，利用权利要求4所述引物进行pcr扩增，pcr 产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，检测后的pcr 产物利用上游引物进行 sanger直接测序，对测序序列进行比对，发现在vnn1基因的第1225位a/g、第1411位t/a 、第1426位c/g、第1429位t/g、第1431位a/c 5个位置的核苷酸序列；第1225、1411、1426、1429、1431位分别为a、t、c、t、a时则为锦屏白鹅；第1225、1411、1426、1429、1431位分别为g、a、g、g、c时则为太湖白鹅。
7、进一步的，所述pcr扩增：反应体系为：pcr混合液 24 μl、上下游引物各2 μl、cdna模板4 μl和双蒸馏水18 μl；
8、反应程序为：95℃预变性5min；94℃持续45s，50℃持续40s，72℃持续40s，25个循环；72℃延长5 min。
9、本专利技术的有益技术效果是：本专利技术利用贵州本地锦屏鹅和江苏太湖鹅的泛酰巯基乙胺酶（vnn1）基因序列的差异，发现能准确鉴别贵州本地锦屏鹅和江苏太湖鹅的5个多态性位点，基于该多态性位点设计引物，能够实现快速、准确的鉴别贵州本地白鹅和太湖白鹅两个不同品种的肉鹅，这为地方品种肉鹅纯种繁殖与选育过程中本品种资源纯化和准确筛选出本地肉鹅种质资源中特有的功能基因提供了分子学鉴别手段，并且为地方肉鹅品种优势基因的保留提供了科学依据基础，具有可观的经济效益和使用价值。
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1.VNN1基因作为分子标记在锦屏鹅和太湖鹅品种鉴定中的应用，其特征在于，所述VNN1基因的CDs区核苷酸序列具备5个SNP位点，具体为：第1225位A/G、第1411位T/A、第1426位C/G、第1429位T/G、第1431位A/C。
2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述VNN1基因CDs区核苷酸序列第1225位A、第1411位T、第1426位C、第1429位T和第1431位A时，待测品种为锦屏鹅；所述VNN1基因CDS区核苷酸序列第1225位G、第1411位A、第1426位G、第1429位G和第1431位C时，待测品种为太湖鹅。
3.用于扩增权利要求1所述VNN1基因的引物，其特征在于，所述引物序列如SEQ IDNo.2～3所示。
4.用于锦屏鹅和太湖鹅品种鉴定的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求3所述引物。
5.VNN1基因作为分子标记鉴定锦屏鹅和太湖鹅品种的方法，其特征在于，Trizol法提取总mRNA，反转录成cDNA后，利用权利要求3所述引物进行PCR扩增，PCR 产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，检测
6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述PCR扩增：
...【技术特征摘要】
1.vnn1基因作为分子标记在锦屏鹅和太湖鹅品种鉴定中的应用，其特征在于，所述vnn1基因的cds区核苷酸序列具备5个snp位点，具体为：第1225位a/g、第1411位t/a、第1426位c/g、第1429位t/g、第1431位a/c。
2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述vnn1基因cds区核苷酸序列第1225位a、第1411位t、第1426位c、第1429位t和第1431位a时，待测品种为锦屏鹅；所述vnn1基因cds区核苷酸序列第1225位g、第1411位a、第1426位g、第1429位g和第1431位c时，待测品种为太湖鹅。
3.用于扩增权利要求1所述vnn1基因的引物，其特征在于，所述引物序列如seq idno.2～3所示。
4.用于锦屏鹅和太湖鹅品种鉴定的试剂盒，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈浩林，李亮，杨明军，徐景峨，韩雪，代国涛，
申请(专利权)人：贵州省畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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