【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程，具体涉及一种大熊猫dnajc12基因的高效表达和分离方法。
技术介绍
1、dnajc12是dnaj热休克蛋白家族成员之一，具有阻止蛋白质的错误折叠和聚集作用，从而帮助蛋白质形成正确的结构及功能。在临床上，dnajc12基因的变化与神经性退行性疾病和代谢性疾病相关。研究报道，在欧洲人老年痴呆症患者中dnjc12发生突变，在胃癌、非小细胞肺癌、食管癌等疾病中发现dnajc12表达增高。同时，我们发现早期胚胎中dnajc12基因具有阶段性表达。可见，dnajc12基因在不同时期或个体中具有不同功能，特别是在神经性疾病、代谢性疾病中具有重要作用。
2、大熊猫是我国特有珍惜物种，开展大熊猫疾病的产生机制机理、防治新技术的研究，对大熊猫保护具有重要意义。目前除了与人类疾病相关的较少文献报道外，包括大熊猫在内的其他物种中针对dnajc12基因的研究甚少。但是受到实体dnajc12来源的限制、伦理问题及尚未分离出dnajc12蛋白，限制了dnajc12的进一步研究与应用。因此，有必要建立体外表达获得dnajc12蛋白。在体外表达系统中，真核细胞表达虽能对翻译后蛋白进行修饰而具活性，但蛋白表达量有限且纯化工艺复杂、成本高等缺点限制了其进一步应用；而原核细胞中，基因表达后不能被修饰，但较真核细胞，其表达蛋白多数以包涵体形式表达、表达量较高、纯化工艺容易、成本相对低，因此基因在原核细胞中表达获得其重组蛋白是产业化中常用的方法之一。然而，目前尚未建立dnajc12重组蛋白的原核细胞表达系统。
3、建立原核
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种高效、节约的大熊猫dnajc12基因表达方法。同时，提供一种简便的大熊猫dnajc12重组蛋白纯化方法。
2、为了达到上述目的，本专利技术提供了对大熊猫dnajc12基因序列进行优化并在其c端添加序列的序列，提供了一种可行、高效的大熊猫dnajc12基因表达方法，并通过简便的纯化手段获得大熊猫dnajc12重组蛋白的方法。
3、本专利技术提供了一种高效表达大熊猫dnajc12基因的方法，通过将核苷酸序列如seqid no.1所示的大熊猫dnajc12基因进行密码子优化，得到核苷酸序列如seq id no.2所示的优化序列，对所得的优化序列进行表达纯化。
4、优选地，在所得优化序列的c-末端添加由六个组氨酸组成的his-tag碱基序列。
5、优选地，在所得优化序列与his-tag碱基序列中间添加酶切克隆位点，该酶切克隆位点优选xhol。
6、优选地，本专利技术提供的表达纯化为经原核表达后纯化，其中，原核表达的表达载体优选自pet-30a(+)，其重组表达菌优选自bl21(de3)。
7、优选地，本专利技术中原核表达的体系可选择加或者不加诱导剂，该诱导剂为优选自iptg。
8、本专利技术的高效表达大熊猫dnajc12基因的方法，解决了目前无大熊猫dnajc12蛋白表达系统的问题以及不需要从动物实体获取、也能得到大熊猫dnajc12蛋白的问题，具有以下优点：
9、首先，本专利技术参照已公布的基因序列，按照预设优化序列合成目的基因片段，不需采集样品及其rna提取、反转录第一条链合成、pcr扩增等获得目的片段的步骤以及与此其对应的试剂耗材、设施设备就能获得优化后基因序列片段，克服了样品来源的限制，提高了实验效率，缩短了实验周期，促使实验初始阶段的研究成本得到有效降低。
10、其次，通过本专利技术的大熊猫dnajc12基因原核表达系统的配套构建，不添加诱导剂iptg也能较高表达大熊猫dnajc12重组蛋白，体现出技术上的提升；第三，通过本专利技术的实施，大熊猫dnajc12蛋白在原核细胞中有较高分泌型表达；第四，通过本专利技术设计及配套实施，采用简便的亲和层析，仍能得到高纯度的大熊猫dnajc12重组蛋白。
11、本专利技术采取了优化大熊猫dnajc12基因序列，获得较高纯度的大熊猫dnajc12重组蛋白，不仅解决了dnajc12蛋白来源有限的问题，且为进一步研究dnajc12结构功能及用途提供基础。
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1.一种高效表达大熊猫DNAJC12基因的方法，其特征在于，通过将核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示的大熊猫DNAJC12基因进行密码子优化，得到核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的优化序列，对所述优化序列进行表达纯化。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述优化序列的C-末端添加由六个组氨酸组成的His-tag碱基序列。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的表达纯化为经原核表达后纯化。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述原核表达的表达载体选自pET-30a(+)。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述原核表达的重组表达菌选自BL21(DE3)。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述原核表达为加或者不加诱导剂。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述诱导剂为IPTG。
【技术特征摘要】
1.一种高效表达大熊猫dnajc12基因的方法，其特征在于，通过将核苷酸序列如seq idno.1所示的大熊猫dnajc12基因进行密码子优化，得到核苷酸序列如seq id no.2所示的优化序列，对所述优化序列进行表达纯化。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述优化序列的c-末端添加由六个组氨酸组成的his-tag碱基序列。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，...
【专利技术属性】
技术研发人员：毛德才，杨志松，郑海朋，何可，侯勤曦，吴姝，林琦，
申请(专利权)人：四川省大熊猫科学研究院，
类型：发明
国别省市：
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