【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种采用液相色谱联用质谱对楮实子化学成分进行测定的方法，属于中药的化学定性分析领域。
技术介绍
1、楮实子为桑科植物构树broussonetiapapyrifera(l.)vent.的干燥成熟果实，秋季果实成熟时采收，洗净，晒干，除去灰白色膜状宿萼和杂质(庞素秋,王国权,黄宝康,等.楮实子化学成分研究[j].中药材,2009,32(8):1229-1231.)。楮实子的药用始于《名医别录》，被载为上品，味甘，性寒，无毒，后历年版《中华人民共和国药典》(一部)均有记载。楮实子在全国大部分地区有分布，主产于河南、湖北、湖南、山西、甘肃等地。楮实子具有补肾清肝、明目、利尿的功效，多用于腰膝酸软、虚劳骨蒸、头晕目眩、目生翳膜、水肿胀满等症(熊山,叶祖光.楮实子化学成分及药理作用研究进展[j].中国中医药信息杂志,2009,16(5):102-103.)。
2、近年来，国、内外对楮实子天然有效成分的研究多集中在总黄酮、色素、多糖、总皂苷及楮实子油等方面。迟玉新等比较了超声提取及索氏提取法提取楮实子和构树叶中总黄酮的量，并对其含量进行了测定，结果表明，超声提取法测得楮实子中总黄酮含量明显高于索氏提取法(迟玉新,窦德强.楮实子与构树叶中总黄酮含量测定[j].中国现代中药,2008,10(11):2.)，但是该方法不能确认楮实子中的化合物具体结构。熊山等将楮实子经过石油醚脱脂后，再用zs-101型大孔吸附树脂除去大部分非皂苷类成分，得到其总皂苷，并进行了含量测定，结果表明，采用分光光度法高氯酸显色，在407nm处测定吸
技术实现思路
1、专利技术目的：本专利技术所要解决的技术问题是提供了一种有效区分、确认楮实子提取物中未知成分的检测方法。
2、技术方案：为解决上述技术问题，本专利技术提供一种楮实子中多种成分的检测方法，采用液相色谱联用质谱，包括以下步骤：
3、s1、定量称取楮实子样品，按比例加入体积浓度大于10％的甲醇水溶液，超声处理后过滤，得续滤液；
4、s2、对续滤液进行检测；所述检测的液相色谱条件为：c18色谱柱；流动相：a:乙腈，b：体积浓度为0.01％～0.2％的甲酸水溶液；洗脱梯度：0～5分钟，3％a；5～13分钟，3～7％a；13～28分钟，7～9％a，28～35分钟，9％a，流速为0.3～1.0ml/分钟；柱温25～35℃；所述检测的质谱条件为：电喷雾离子源esi，正、负离子模式下毛细管电压4000±200v、3500±200v；
5、s3、根据检测结果，获取楮实子成分信息。
6、该液相体条件下获得的色谱峰基线平稳，峰型尖锐，流动相中采用合适浓度的甲酸水溶液能够保证待测化合物充分电离，有助于对化合物定性分析。
7、优选地，所述楮实子样品为楮实子药材、楮实子饮片、楮实子配方颗粒的一种，所述楮实子配方颗粒包括楮实子药材提取物和辅料。
8、优选地，所述液相色谱进样体积为0.5～6μl，更优选地，进样体积为2～4μl。
9、优选地，所述步骤s2中流动相b为体积浓度0.01％～0.2％的甲酸水溶液。
10、优选地，所述色谱柱为poroshell 120sb-c18(150×4.6mm，2.7μm)、poroshell120aq-c18(150×4.6mm，2.7μm)或cortecst3(150×4.6mm，2.7μm)色谱柱中的一种，更优选的，所述色谱柱为cortecst3液相色谱柱。
11、优选地，步骤s2中所述质谱检测条件还包括：毛细管出口电压180v；锥孔电压70v；质荷比采集范围m/z50～1500；干燥气温度200-400℃，干燥气流速1-15l/min；雾化压力20～60psi，采样速度1spectra/s，采样时间1000ms/spectra，正离子采用嘌呤(121.050873)和hp-0921(922.009798)进行质量数实时校准，雾化压力6psi。
12、优选地，所述步骤s3包括以下步骤：1).从质谱总离子流图中提取出物质峰，得到精确的分子量；2).根据化合物峰的一级质谱离子碎片信息搜索数据库，得到数据库中与筛选的物质相匹配的质谱碎片信息；3).将加合离子类别、分子量误差、保留时间、相关文献和步骤2)中得到的质谱碎裂信息结合分析，得到化合物的结构。在本专利技术中，所述的数据库为根据文献报道的化学成分汇总而成的自建数据；所述加合离子类别包括m+h，m+nh4，m+na，m+k，m+cl，m+cooh等；所述分子量误差为绝对值小于10ppm。
13、利用上述分析方法获得的楮实子化学成分的结果是在楮实子颗粒中共鉴定出17中化学成分，分别包括核苷氨基酸类成分6种、有机酸类成分5种、糖苷类成分4种，环烯醚萜类成分1种，其他类成分1种。
14、优选地，所述楮实子样品与甲醇水溶液比例为0.1～1.0g：25～100ml，更优选的，所述楮实子样品与甲醇水溶液比例为0.3g:50ml。
15、优选地，所述步骤s1还包括：超声处理后使用对应的溶剂补足减失重量。
16、优选地，为了优化液相色谱峰形，所述步骤s1中甲醇体积浓度为10％～80％。
17、优选地，为了提升响应信号并兼顾分析效率，所述超声处理时间为20～60min；功率为150～300w；频率为20～50khz。更优选的，所述超声处理时间为20～45min；功率为250w；频率为40khz。在方案中，对超声的方法没有特殊限制，采用本领域技术人员公知的超声手段即可。
18、优选地，所述步骤s1中还包括离心处理，所述离心的转速为10000～13000rpm，离心持续时间为5～15min；更优选地，转速为12000rpm，持续为10min；经离心处理后的样品采用微孔滤膜过滤，得续滤液，微孔滤膜的孔径为0.10～0.50μm，更优选地，微孔滤膜的孔径为0.22μm。
19、优选地，液相色谱检测本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种采用液相色谱联用质谱对楮实子化学成分进行测定的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的楮实子中多种成分的检测方法，其特征在于，所述楮实子样品与甲醇水溶液比例为0.1～1.0g：25～100mL。
3.根据权利要求1所述的楮实子中多种成分的检测方法，其特征在于，所述步骤S1中甲醇体积浓度为10％～80％。
4.根据权利要求1所述的楮实子中多种成分的检测方法，其特征在于，所述获取的楮实子成分共有17种，分别包括核苷氨基酸类成分6种，为L-酪氨酸、异亮氨酸、腺苷、鸟苷、肌苷、色氨酸；有机酸类成分5种，为柠檬酸、新绿原酸、对羟基苯甲酸、绿原酸、隐绿原酸；糖苷类成分4种，为对羟基苯甲酸-β-D-吡喃葡萄酯苷、香草酸-4-O-β-D-葡萄糖苷、吡哆醇-3-O-β-D-葡萄糖苷、阔苞菊苷C；环烯醚萜类成分1种，为车叶草苷酸；其他类成分1种，为(3,6-二甲氧基-2-硝基-苯甲酰基)-丙二酸二乙酯。
5.根据权利要求1所述的楮实子中多种成分的检测方法，其特征在于，步骤S2中的质谱检测条件还包括：质荷比采集范围m/z 50～
6.根据权利要求1所述的楮实子中多种成分的检测方法，其特征在于，步骤S1中的超声处理时间为20～60分钟，功率为150～300W，频率为20～50kHz。
7.根据权利要求1所述的楮实子中多种成分的检测方法，其特征在于，所述楮实子样品为楮实子药材、楮实子饮片或者楮实子配方颗粒。
8.根据权利要求1所述的楮实子中多种成分的检测方法，其特征在于，所述色谱柱为所述色谱柱为CORTECS T3色谱柱。
9.根据权利要求1所述的楮实子中多种成分的检测方法，其特征在于，所述步骤S2中流动相B为体积浓度0.01％～0.2％的甲酸水溶液。
...【技术特征摘要】
1.一种采用液相色谱联用质谱对楮实子化学成分进行测定的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的楮实子中多种成分的检测方法，其特征在于，所述楮实子样品与甲醇水溶液比例为0.1～1.0g：25～100ml。
3.根据权利要求1所述的楮实子中多种成分的检测方法，其特征在于，所述步骤s1中甲醇体积浓度为10％～80％。
4.根据权利要求1所述的楮实子中多种成分的检测方法，其特征在于，所述获取的楮实子成分共有17种，分别包括核苷氨基酸类成分6种，为l-酪氨酸、异亮氨酸、腺苷、鸟苷、肌苷、色氨酸；有机酸类成分5种，为柠檬酸、新绿原酸、对羟基苯甲酸、绿原酸、隐绿原酸；糖苷类成分4种，为对羟基苯甲酸-β-d-吡喃葡萄酯苷、香草酸-4-o-β-d-葡萄糖苷、吡哆醇-3-o-β-d-葡萄糖苷、阔苞菊苷c；环烯醚萜类成分1种，为车叶草苷酸；其他类成分1种，为(3,6-二甲氧基-2-硝基-苯甲...
【专利技术属性】
技术研发人员：翟燕娟，孟璐，张云天，张宇静，顾超，顾芹英，周敏，郭星宇，刘慧，李松，
申请(专利权)人：江阴天江药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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