【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物发酵，具体涉及一株解淀粉芽孢杆菌及其在提高脂肪酶活力中的应用。
技术介绍
1、脂肪酶即三酰甘油酰基水解酶，是一种酯键水解酶，广泛存在于自然界中，尤其是动植物的各种组织以及多种微生物中。脂肪酶可在油水界面催化甘油三酯形成甘油二酯、甘油单酯或甘油及游离脂肪酸。脂肪酶具有多种催化能力，除了能催化水解反应和酯化反应外，还能催化酯交换反应、转酯反应、酸解反应等多种化学反应。因脂肪酶具有催化效率高、反应条件简单、副产物少且不需辅助因子等独特的性质，使得脂肪酶在食品、药物、生物燃料、诊断、生物修复、化学品、化妆品等工业生产中有着广泛应用，成为了继蛋白酶和淀粉酶之后的三大重要工业用酶之一。人们对健康、饮食习惯以及即将到来的高科技食品和饮料行业的认识不断提高，全球脂肪酶市场将以更快的速度增长。例如，通过脂肪酶催化改性，可以使便宜的、营养价值低的油脂升级为昂贵的、营养价值高的油脂。
2、脂肪酶在许多领域展现出诱人的应用前景，然而这种催化剂的“天然”活性在多数情况下却并不能满足工业上对其催化反应的要求，因此，提高脂肪酶的活性，以增强产品的市场竞争力，一直是脂肪酶研究的重点之一。已报道的方法包括利用蛋白质工程技术提高脂肪酶的活性；利用一些化学试剂与脂肪酶表面的-nh2、-oh或-cooh等基团发生反应，将这些化学试剂共价结合到脂肪酶分子的侧链上，改变侧链结构，从而提高脂肪酶的活性。例如，丁辉等用合成谷氨酸十二烷基酯核糖醇对源于candida rugosa脂肪酶修饰，并将之用于油/水两相中水解橄榄油体系，在此反应体系中，表
3、动物体中脂肪酶主要存在于胃部、胰腺组织中，例如人体中的胃脂肪酶与胰脂肪酶，主要可以使人体对油脂进行消化和吸收。植物体中脂肪酶主要存在于植物的种子中，油料作物种子中脂肪酶含量较高，主要作用将种子内的油脂成分催化水解为种子发育提供物质基础与能量。微生物脂肪酶对比前面的动物脂肪酶与植物脂肪酶，有着更加有好的反应条件，例如广泛的温度和ph适用范围、底物特应性更高、稳定性更高。同时，现在发现可以分泌脂肪酶的微生物种类广泛，并且微生物繁殖快、生长周期短、方便进行大批量培养、生长条件好控制等特点，适合现代工业化生产。因此，如今，微生物脂肪酶已经取代了动物脂肪酶与植物脂肪酶，成为工业用脂肪酶的主要来源。本专利技术从高糖柿子酵素中分离到一株产脂肪酶增效剂的解淀粉芽孢杆菌x7，该菌上清液与胰脂肪酶、微生物脂肪酶共同温育5min，即可使这两种分别来自动物和微生物的脂肪酶活性得到显著提升。并且，实验表明，100℃下20min的热处理对于解淀粉芽孢杆菌x7所产的脂肪酶增效剂活性影响不大，这对于该脂肪酶增效剂的工业化应用也是一个明显的优势。
技术实现思路
1、本专利技术首次发现一株解淀粉芽孢杆菌x7(bacillus amyloliquefaciens x7)cctcc no：m 20232293，灭活后的发酵上清液能显著增强脂肪酶活力，该法比外源摄入脂肪酶来促胃肠消化的方法更加安全可靠、有益于人体健康。
2、柿子酵素中具有多种生物活性成分，专利技术人发现实验室制备的一些柿子酵素上清液具有提高猪胰脂肪酶活性的有效成分，为获得其中的关键菌株，专利技术人将柿子酵素样品接入高糖yepd培养基中培养，在每次分离纯化过程中以提升猪胰脂肪酶活性高低为指标，从而将柿子酵素中的关键菌株x7逐步从菌群中分离纯化出来。x7菌株菌落呈淡黄色，表面有隆起，边缘不规则。在显微镜下菌株x7形态成弯曲的杆状，革兰氏染色阳性，着色均匀。可形成内生芽孢，呈椭圆形，两端钝圆，芽孢囊不膨大。
3、课题组已于2023年11月21日保藏于在中国典型培养物保藏中心，该解淀粉芽孢杆菌x7的保藏号为：cctcc no：m 20232293，拉丁名：bacillus amyloliquefaciens x7，地址：中国.武汉.武汉大学，邮编：430072，电话：027-68754052。
4、将解淀粉芽孢杆菌接入含有碳源和氮源的液体培养基中，振荡培养后固液分离，取上清液，得到解淀粉芽孢杆菌的发酵上清液。
5、所述解淀粉芽孢杆菌的发酵上清液用于提高脂肪酶的活性。
6、所述解淀粉芽孢杆菌的发酵上清液用于制备脂肪酶增效剂。
7、其中，所述脂肪酶包括猪胰脂肪酶和微生物脂肪酶。
8、本专利技术还提供一种提高脂肪酶活性的方法，具体是将保藏的解淀粉芽孢杆菌x7的发酵上清液与脂肪酶混合。
9、其中，所述解淀粉芽孢杆菌的发酵上清液与脂肪酶的混合时间为0～10min。
10、其中，所述解淀粉芽孢杆菌的发酵上清液的制备方法为：将解淀粉芽孢杆菌接入含有碳源和氮源的液体培养基中，振荡培养后固液分离，取上清液，得到解淀粉芽孢杆菌的发酵上清液。
11、其中，所述固液分离的方法为：在2～6℃，5000～15000r/min的条件下离心1～15min。
12、有益效果
13、利用益生菌活菌体饲喂动物，以提高其肠道消化酶活性的报道较多，其机理是这些活的益生菌进入肠道后进行定殖、生长繁殖，产生了多种胞外消化酶进入肠道的“酶池”，从而提高了动物消化酶活性。迄今为止，国内外没有利用微生物的胞外代谢产物来直接提高消化酶活性的报道。
14、本专利技术通过分离出的解淀粉芽孢杆菌的代谢产物，用于增强脂肪酶活性，或者说，解淀粉芽孢杆菌的代谢产物为脂肪酶增效剂，而且该增效剂的热稳定性强，根据实验表明，该增效剂可以承受121℃的热处理，但其增效作用有所降低，具体产生了什么物质与脂肪酶发生了增效作用的机理还需要进一步深入研究。
15、本专利技术利用一株解淀粉芽孢杆菌菌株，菌株发酵上清液可以显著增脂肪酶活力，但由于发酵液中物质太多，暂时无法比对出是何种物质或一类物质的组合，有待进一步深入研究，就本专利技术的解淀粉芽孢杆菌菌株而言，其方法是效果稳定，耐高温性能好，安全性较高，该法比外源摄入脂肪酶来促进胃肠消化的方法更加有益于人体健康。
16、本专利技术通过微生物的代谢产物来激活脂肪酶，制备方法简单，代谢产物稳定性强，容易保藏，并且具有一定的热稳定性，因此，预期其未来可应用的领域较广泛，除了可用于生产促消化的保健品、高活力胰酶外，还可用于生产具有促消化功能的肉制品、饮料等食品、以及能提高养殖效率的动物饲料。本专利技术增强脂肪酶活性的成本低廉，市场前景好。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种解淀粉芽孢杆菌，其特征在于：所述解淀粉芽孢杆菌保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC M 20232293。
2.一种权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌的应用，其特征在于：所述解淀粉芽孢杆菌的发酵上清液用于提高脂肪酶的活性。
3.一种权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌的应用，其特征在于：所述解淀粉芽孢杆菌的发酵上清液用于制备脂肪酶增效剂。
4.一种权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌的应用，其特征在于：所述脂肪酶包括猪胰脂肪酶和微生物脂肪酶。
5.根据权利要求2、3、4所述的解淀粉芽孢杆菌的应用，其特征在于：所述解淀粉芽孢杆菌的发酵上清液的制备方法为：将解淀粉芽孢杆菌接入含有碳源和氮源的液体培养基中，振荡培养后固液分离，取上清液，得到解淀粉芽孢杆菌的发酵上清液。
6.一种提高脂肪酶活性的方法，其特征在于：将权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌的发酵上清液与脂肪酶混合。
7.根据权利要求6所述的提高脂肪酶活性的方法，其特征在于：所述解淀粉芽孢杆菌的发酵上清液与脂肪酶的混合时间为0~10 min。
8.
9.根据权利要求6所述的提高脂肪酶活性的方法，其特征在于：所述固液分离的方法为：在2~6℃，5000~15000r/min的条件下离心1~15min。
...【技术特征摘要】
1.一种解淀粉芽孢杆菌，其特征在于：所述解淀粉芽孢杆菌保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为：cctcc m 20232293。
2.一种权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌的应用，其特征在于：所述解淀粉芽孢杆菌的发酵上清液用于提高脂肪酶的活性。
3.一种权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌的应用，其特征在于：所述解淀粉芽孢杆菌的发酵上清液用于制备脂肪酶增效剂。
4.一种权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌的应用，其特征在于：所述脂肪酶包括猪胰脂肪酶和微生物脂肪酶。
5.根据权利要求2、3、4所述的解淀粉芽孢杆菌的应用，其特征在于：所述解淀粉芽孢杆菌的发酵上清液的制备方法为：将解淀粉芽孢杆菌接入含有碳源和氮源的液体培养基中，振荡培养后固液分离，取...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。