【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药物分析领域，涉及合成枸橼酸伊沙佐米原料药的起始物料的有关物质的检测方法，具体涉及分离测定枸橼酸伊沙佐米起始物料2,5-二氯苯甲酸异构体等有关物质的方法。
技术介绍
1、多发性骨髓瘤是浆细胞异常增生的恶性肿瘤，枸橼酸伊沙佐米(ixazomibcitrate)是首个口服给药治疗多发性骨髓瘤的新型靶向药物，由日本武田制药公司开发成功于2015年11月获得美国fda批准上市。
2、枸橼酸伊沙佐米化学名为[2-[(1r)-1-[[2-[(2,5-二氯苯甲酰)氨基]乙酰基]氨基]-3-甲基丁基]-5-氧-1,3,2-二氧硼戊环-4,4-二乙酸，结构式如下：
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4、2,5-二氯苯甲酸是合成枸橼酸伊沙佐米的一个关键起始物料，其结构式为：
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6、中国专利cn201510680783“蛋白酶体抑制剂mln9708的合成方法”记载了采用2,5-二氯苯甲酸为起始物料合成枸橼酸伊沙佐米的方法，反应路线如下：
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8、2,5-二氯苯甲酸在合成过程中可能产生多种位置异构体，他们的存在较大的影响了后续制备得到的枸橼酸伊沙佐米原料药的纯度，影响用药安全。
9、根据2,5-二氯苯甲酸的合成路线进行分析，该化合物合成过程中可能产生至少以下9种杂质，对终产品的质量产生影响：
10、
11、中国专利cn115774062a公开了一种测定3,5-二氯苯甲酸有关物质的检测方法，该法采用waters atlantis t3(4.6m
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种分离测定枸橼酸伊沙佐米起始原料2,5-二氯苯甲酸中多种有关物质的检测方法，该方法操作简便，能快速分离测定2,5-二氯苯甲酸多种异构体及其他杂质，帮助有效控制枸橼酸伊沙佐米原料药的质量。
2、根据本专利技术提供的一种2,5-二氯苯甲酸中有关物质的检测方法，所述有关物质为以下9个杂质：
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4、其特征在于，采用反相高效液相色谱法检测，所述方法色谱条件包括采用十八烷基硅烷键合硅胶作为填料的色谱柱；流动相为由磷酸水溶液和乙腈组成的混合溶液，通过变换流动相中磷酸水溶液和乙腈的比例进行梯度洗脱；流动相流速为0.9～1.1ml/min；色谱柱温度为20～30℃。
5、本专利技术在对色谱柱进行考察的过程中发现，常用的反相液相色谱柱均不能将所有杂质分离开，杂质峰存在重叠现象。本专利技术采用的色谱柱优选inertsil ods-sp柱(250mm×4.6mm，5μm)，该色谱柱为采用十八烷基硅烷键合硅胶作为填料(c18)的反相液相色谱柱，碳含量较低为8.5％，研究发现仅该色谱柱能将所有杂质峰分离，本专利技术所述色谱柱包含与inertsil ods-sp柱效能相当的色谱柱。
6、进一步的，本专利技术所述检测方法的色谱条件的流动相流速优选1.0ml/min；色谱柱温度优选25℃。
7、此外，本专利技术色谱条件采用的检测器为紫外检测器，检测波长为200nm～230nm，优选225nm。
8、本专利技术在采用选inertsil ods-sp柱同时对流动相进行研究考察中发现，所述流动相中磷酸溶液的ph为3.0～3.5时，能够将所有杂质有效分离，优选磷酸溶液ph为3.0～3.1，分离度最优，且峰形最好。
9、本专利技术所述由磷酸溶液和乙腈组成的流动相，通过变换流动相中磷酸水溶液和乙腈的比例进行梯度洗脱，具体方式为以磷酸溶液为流动相a，乙腈为流动相b，按下表进行梯度洗脱：
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11、在洗脱过程中，流动相a比例与流动相b比例总和为100％；其中流动相a比例是指流动相a占洗脱液总体积的百分比，流动相b比例是指流动相b占洗脱液总体积的百分比。
12、本专利技术采用的供试品溶液浓度为0.1mg/ml～1.0mg/ml，优选为0.5mg/ml。
13、本专利技术所述的检测方法，包括以下操作步骤：
14、1)供试品溶液的制备：取2,5-二氯苯甲酸适量，精密称定，加50％乙腈溶液溶解并稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液。
15、2)对照溶液的制备：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用50％乙腈溶液稀释至刻度，摇匀。
16、3)样品测定：精密量取供试品溶液、对照溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
17、本专利技术提供了一种分离测定枸橼酸伊沙佐米起始原料2,5-二氯苯甲酸中多种有关物质的检测方法，该方法是采用以c18液相色谱柱的反相高效液相色谱法，采用磷酸溶液和乙腈混合溶液作为流动相，通过变化流动相中两种溶剂的比例进行梯度洗脱，能有效分离测定2,5-二氯苯甲酸中多种异构体等9个杂质，分离度好，峰形好，能够帮助有效控制枸橼酸伊沙佐米原料药的质量。
18、下面结合说明书附图和具体实施方式的实施例对本专利技术做进一步说明。
19、说明书附图
20、图1专属性试验空白溶液图谱
21、图2专属性试验分离度溶液图谱
22、图3 2,5-二氯苯甲酸样品中有关物质的检测图谱
23、图4对比实施例分离度溶液图谱
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1.一种2,5-二氯苯甲酸中有关物质的检测方法，所述有关物质为以下9个杂质：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，色谱柱的型号为Inertsil ODS-SP柱。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磷酸水溶液的pH为3.0～3.5。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述磷酸水溶液的pH为3.0～3.1。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱的具体方式为以磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，按以下梯度进行洗脱：
6.根据权利要求1所述的方法，供试品溶液浓度为0.5mg/ml。
7.根据权利要求1所述的方法，所述流动相流速为1.0ml/min；色谱柱温度为25℃。
8.根据权利要求1所述的方法，所述检测方法包括以下操作步骤：
【技术特征摘要】
1.一种2,5-二氯苯甲酸中有关物质的检测方法，所述有关物质为以下9个杂质：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，色谱柱的型号为inertsil ods-sp柱。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磷酸水溶液的ph为3.0～3.5。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述磷酸水溶液的ph为3.0～3.1。
【专利技术属性】
技术研发人员：罗唐，于玉根，吴子强，钟剑，刘东华，翟丽平，
申请(专利权)人：深圳万乐药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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