【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、抗体-药物缀合物(adc)是一类通过用永久性接头或不稳定接头将小分子治疗性剂与抗体附接来构建的高度有力的生物制药药物。抗体靶向仅在靶细胞上发现的特异性抗原。一旦adc与细胞结合，它就会触发抗体连同药物的内化。这以非常高的特异性将药物递送到患病细胞，最大化其功效并最小化全身暴露和相关联的副作用风险。
2、adc的应用是医学和靶向免疫疗法领域的研究和开发热点之一。目前有超过100种adc处于不同的临床开发阶段，并且存在数百个正在进行的临床试验。因此，对adc纯化和分析的创新性解决方案的需求日益增加。层析柱已经用于adc的分析。然而，目前的层析柱不能提供adc组分种类(species)的足够分辨。用于分析adc dar种类的改进层析分离柱和方法对于改进产品质量、功效和安全性非常有用。
技术实现思路
1、在一方面，本公开涉及用于分离生物分子的层析组合物和方法，特别是使用质谱法兼容条件用于adc的改进分离和分辨的固定相和层析柱。
2、选定定义
3、如本文所用，“重量百分比”、“wt%”、“按重量计的百分比”、“按重量计的%”及其变型指物质的浓度，其作为该物质的重量除以组合物的总重量并乘以100。
4、如本文所用，“摩尔百分比”、“mol%”、“按mol计的百分比”及其变型指物质的相对含量，其作为该物质的摩尔除以组合物的总摩尔并乘以100。
5、如本文所用，“体积百分比”、“vol%”、“按体积计的百分比”及其变型指物
6、如本文所用，“g”代表克；“l”代表升；“mg”代表“毫克(10-3克)”；“µg”等于一微克(10-6克)。“ml”或“cc”代表毫升(10-3升)。一“µl”等于一微升(10-6升)。单位“mg/100g”、“mg/100ml”或“mg/l”是组合物中组分的浓度或含量的单位。一“mg/l”等于一ppm (百万分之一)。“da”指道尔顿，其是分子量的单位；一da等于一g/mol。本文使用的温度单位是摄氏度(°c)。
7、术语“约”与数值结合使用以包括如本领域技术人员所预期的测量中的正常变化，并且将其理解为具有与“大约”相同的意义并且覆盖典型的误差幅度，诸如所述值的±15%、±10%、±5%、±1%、±0.5%或甚至±0.1%。
8、术语“约”还涵盖由于由特定初始组合物产生的组合物的不同平衡条件而不同的量。无论是否被术语“约”修饰，权利要求包括等效物。
9、应注意的是，如本说明书和所附权利要求中所用，除非上下文另有明确规定，否则单数形式“一(a)”、“一个(an)”、和“该(the)”包括复数指代物。因此，例如，提及含有“一个化合物”的组合物包括具有两个或更多个彼此相同或不同的化合物。还应注意，除非上下文另有明确规定，否则术语“或”通常以其包括“和/或”的含义应用。如本文所用，“和/或”是指并涵盖相关联的所列项中的一个或多个的任何和所有可能的组合，以及当在替代选择(“或”)中解释时组合的缺失。
10、为了简洁和简明起见，本说明书中所示的任何值的范围考虑了该范围内的所有值，并且将解释为对叙述具有以下端点的任何子范围的权利要求的支持，所述端点是所讨论的指定范围内的实数值。通过假设的说明性实例的方式，本说明书中1至5的范围的公开应视为支持以下范围中的任一个的权利要求：1-5；1-4；1-3；1-2；2-5；2-4；2-3；3-5；3-4；和4-5。
11、如本文所用，对柱“原型1”或原型柱“v1”的指代是指相同的测试原型，并且这些名称可互换地使用。相似地，“原型2”或柱“v2”也指相同的原型柱，并且在整个公开中可互换地使用。
12、术语“基本上”在本文中用于代表可以归因于任何定量比较、值、测量或其他表示的固有的不确定性程度。术语“基本上”在本文中还用于代表在不导致所讨论的主题的基本功能中的变化的情况下，定量表示可以与所述参考不同的程度。
13、术语“基本上不含”可以指本公开的组合物缺乏或几乎缺乏的任何组分。当提及“基本上不含”时，意指该组分不是有意添加到本公开的组合物中。使用术语“基本上不含”一个组分允许因为痕量的该组分存在于另一组分中，所以本公开的组合物中包含痕量的该组分。然而，应认识到，当组合物被称为“基本上不含”组分时，将仅允许痕量或最低(deminimus)量的该组分。此外，如果组合物被称为“基本上不含”组分，如果该组分以痕量或最小量存在，则应理解其将不影响组合物的有效性。应理解，如果成分在本文中未明确包括或在本文中未陈述其可能包括，那么本公开组合物可以基本上不含该成分。同样，成分的明确包含允许其明确排除，从而允许组合物基本上不含该明确陈述的成分。
14、如本文所用，术语“包含(comprise)”、“包含(comprises)”和“包含(comprising)”指定所述特征、整数、步骤、操作、元素和/或组分的存在，但不排除一个或多个其他特征、整数、步骤、操作、元素、组分和/或其组的存在或添加。
15、如本文所用，过渡短语“基本上由……组成”意指权利要求的范围应解释为涵盖权利要求中所述的指定材料或步骤以及不实质上影响所要求保护的专利技术的基本和新颖特征的那些材料或步骤。
16、因此，当在本专利技术的权利要求中使用时，术语“基本上由……组成”不旨在解释为等同于“包含”。
17、如本文所用，术语“增加(increase)”、“增加(increasing)”、“增加的(increased)”、“增强(enhance)”、“增强的(enhanced)”、“增强(enhancing)”和“增强(enhancement)”(及其语法变型)描述与对照相比至少约1%、5%、10%、15%、25%、50%、75%、100%、150%、200%、300%、400%、500%或更多的升高。
18、如本文所用，术语“减少(reduce)”、“减少的(reduced)”、“减少(reducing)”、“减少(reduction)”、“减弱(diminish)”和“降低(decrease)”(及其语法变型)描述例如与对照相比至少约1%、5%、10%、15%、20%、25%、35%、50%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%、99%或100%的降低。在特定实施方案中，减少可以导致没有或基本上没有(即，不显著的量，例如小于约10%或甚至5%或甚至1%)可检测的活性或量。
19、术语“优选的”和“优选地”指在某些情况下可以提供某些益处的实施方案。然而，在相同或其他情况下，其他实施方案也可以是优选的。此外，一个或多个优选实施方案的叙述并不意味着其他实施方案是无用的，并且不旨在将其他实施方案排除在本公开的范围之外。
20、如本文所用，“抗体药物缀合物”或“adc”是通过具有不稳定键的化学接头或接头单元附接至单克本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.层析固定相，其包含：
2.权利要求1所述的层析固定相，其中所述第一亲水单体和第二亲水单体是不同的。
3.权利要求1所述的层析固定相，其中所述第二亲水单体比所述第一亲水单体具有更低的亲水性。
4.权利要求1所述的层析固定相，其中所述固体支撑物包括多毛细管柱、整体柱、多个支撑物颗粒或其任何组合。
5.权利要求4所述的层析固定相，其中所述支撑物颗粒包括多个具有约0.5 µm至约50µm的直径的无孔二氧化硅颗粒。
6.权利要求1所述的层析固定相，其中所述第一亲水单体包括与亲水官能团偶联的烯属(-C=C)不饱和基团，所述亲水官能团选自聚环氧乙烷、羟基、二羟基、多羟基、羧酸、磺酸、磷酸、胺、酰胺或其任何组合。
7.权利要求1所述的层析固定相，其中所述第二亲水单体包含与直链或支链或环状(n>3) C1至C18饱和或不饱和烷基基团、芳基基团、芳香族基团、碳氟化合物基团或其任何组合偶联的烯属不饱和基团。
8.权利要求1所述的层析固定相，其中所述第一亲水单体选自(甲基)丙烯酸2-羟乙酯、(甲基)丙烯酸-3-
9.权利要求1所述的层析固定相，其中所述第二亲水单体选自(甲基)丙烯酸烷基酯(烷基 = Me、Et、n-Pr、i-Pr、n-Bu、s-Bu、t-Bu等)、(甲基)丙烯酸己酯、(甲基)丙烯酸环己酯、(甲基)丙烯酸-2-乙基己酯、(甲基)丙烯酸月桂酯、(甲基)丙烯酸硬脂酯、(甲基)丙烯酸异癸酯、(甲基)丙烯酸异冰片酯、(甲基)丙烯酸苯酯、(甲基)丙烯酸-2-萘酯、(甲基)丙烯酸-9-蒽基甲酯、(甲基)丙烯酸-2,2,3,4,4,4-六氟丁酯、(甲基)丙烯酸十八酯、苯乙烯，或其衍生物，或其任何组合。
10.权利要求1所述的层析固定相，其中所述聚合物涂层包含甲基丙烯酸-2-羟乙酯(HEMA)和甲基丙烯酸甲酯(MMA)的共聚物，并且其中HEMA与MMA的摩尔比为1:100至约100:1、约1:50至约50:1、约1:25至约25:1、1:10至约10:1、约1:5至约5:1，或约1:2至约2:1、约1:1.5至约1.5:1、约1:1.2至约1.2:1、约1.1:1至约1:1.1，或约1:1。
11.权利要求1所述的层析固定相，其中所述聚合物涂层具有约1 nm至约500 nm的厚度。
12.权利要求1所述的层析固定相，其中所述共聚物经由原子转移自由基聚合(ATRP)或氮氧化物介导的自由基聚合(NMP)或可逆加成-断裂链转移(RAFT)从所述固体支撑物的表面接枝。
13.层析柱，其包含根据权利要求1所述的层析固定相。
14.用于分析样品中的抗体-药物缀合物(ADC)的方法，所述方法包括：
15.权利要求14所述的方法，其中所述聚合物涂层包含甲基丙烯酸-2-羟乙酯(HEMA)和甲基丙烯酸甲酯(MMA)的共聚物，并且其中HEMA与MMA的摩尔比为1:100至约100:1、约1:50至约50:1、约1:25至约25:1、1:10至约10:1、约1:5至约5:1，或约1:2至约2:1、约1:1.5至约1.5:1、约1:1.2至约1.2:1、约1.1:1至约1:1.1或约1:1。
16.权利要求14所述的方法，其进一步包括分离和分辨处于其天然形式的ADC的洗脱DAR种类。
17.权利要求14所述的方法，其中所述方法用于分离具有相同DAR值的ADC中DAR种类的位置异构体。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.层析固定相，其包含：
2.权利要求1所述的层析固定相，其中所述第一亲水单体和第二亲水单体是不同的。
3.权利要求1所述的层析固定相，其中所述第二亲水单体比所述第一亲水单体具有更低的亲水性。
4.权利要求1所述的层析固定相，其中所述固体支撑物包括多毛细管柱、整体柱、多个支撑物颗粒或其任何组合。
5.权利要求4所述的层析固定相，其中所述支撑物颗粒包括多个具有约0.5 µm至约50µm的直径的无孔二氧化硅颗粒。
6.权利要求1所述的层析固定相，其中所述第一亲水单体包括与亲水官能团偶联的烯属(-c=c)不饱和基团，所述亲水官能团选自聚环氧乙烷、羟基、二羟基、多羟基、羧酸、磺酸、磷酸、胺、酰胺或其任何组合。
7.权利要求1所述的层析固定相，其中所述第二亲水单体包含与直链或支链或环状(n>3) c1至c18饱和或不饱和烷基基团、芳基基团、芳香族基团、碳氟化合物基团或其任何组合偶联的烯属不饱和基团。
8.权利要求1所述的层析固定相，其中所述第一亲水单体选自(甲基)丙烯酸2-羟乙酯、(甲基)丙烯酸-3-羟丙酯、(甲基)丙烯酸-2,3-二羟基丙酯、乙酸乙烯酯、乙烯醇、(甲基)丙烯酸钠、(甲基)丙烯酸四氢糠酯、(甲基)丙烯酸糠酯、(甲基)丙烯酸缩水甘油酯、(甲基)丙烯酸-2-(二乙氨基)乙酯、(甲基)丙烯酸-2-氨基乙酯盐酸盐、(甲基)丙烯酸-2-乙氧基乙酯、(甲基)丙烯酸-3-磺丙酯钾盐、(甲基)丙烯酸糖氧基乙酯，或其衍生物，或其任何组合。
9.权利要求1所述的层析固定相，其中所述第二亲水单体选自(甲基)丙烯酸烷基酯(烷基 = me、et、n-pr、i-pr、n-bu、s-bu、t-bu等)、(甲基)丙烯酸己酯、(甲基)丙烯酸环己酯、(甲基)丙烯酸-2-乙基己酯、(甲基)丙烯酸月桂酯、(甲基)丙烯酸硬脂酯、(甲基)丙烯酸异癸酯、(甲基)丙烯酸异冰片酯...
【专利技术属性】
技术研发人员：麦成康，I·鲁斯塔莫夫，A·C·桑切斯，C·N·黄，M·赞恩，
申请(专利权)人：菲诺米耐斯公司，
类型：发明
国别省市：
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