【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及三维细胞培养领域，并且特别涉及用于产生细胞和组织的细胞微隔室，该细胞和该组织能够用于人和兽医用途的gmp临床条件。
技术介绍
1、自从yamanaka教授发现诱导多能干细胞(ips或ipscs)以来，细胞培养是一个持续引起越来越多兴趣的领域。
2、历史上，细胞(包括诱导多能干细胞)是在二维空间中培养的。由于二维细胞培养的局限性，近年来已经开发了三维培养系统，从而使得部分克服二维培养的缺点成为可能。
3、实际上，此类系统有利地更接近于体内天然系统，并且可用于许多应用，特别在细胞治疗中。在这些系统中培养的细胞可以是任何类型的。它既可以是具有不同表型的分化细胞，也可以是祖细胞和干细胞。
4、特别合适的技术是专利申请wo 2018/096277中描述的技术，该技术由用于培养干细胞的三维微隔室组成。
5、尽管三维培养是一种非常有前途的技术，但是为了能够在临床条件下使用，它仍然存在某些缺点。为此，细胞和细胞所来自的三维培养系统两者都必须遵守关于良好生产规范(gmp)的规定。然而，大多数三维培养系统(诸如细胞微隔室)包括动物来源的和/或来自癌细胞系的细胞外基质，这不符合此类规定。
6、考虑到基于该技术的细胞疗法的出现以及用于人或动物食物消耗的动物或植物细胞的生产，因此需要开发一种替代方案，一种使得在保持细胞令人满意地粘附和生长的可能性的同时消除此类细胞外基质的存在成为可能的替代物。
7、在他们的工作的背景下，本专利技术人令人惊讶地发现，纤维蛋白使得在其用于细
8、因此，为了满足对没有任何非gmp细胞外基质(诸如)的细胞微隔室的该需求，本专利技术提出了一种基于细胞微隔室的三维培养系统，该细胞微隔室包括纤维蛋白网，该纤维蛋白网被布置在水凝胶外层与至少一个细胞层之间。
技术实现思路
1、因此，本专利技术涉及一种新的细胞微隔室，该新的细胞微隔室包括：
2、-至少一个细胞层，
3、-水凝胶外层，
4、-纤维蛋白网，该纤维蛋白网被布置在该水凝胶外层与该至少一个细胞层之间。
5、有利地，该纤维蛋白网可以是或可以不是分离的，即与该细胞微隔室的其他成分中的至少一种其他成分(诸如该细胞或该水凝胶外层)缠结。因此，根据一个实施方案，该细胞可被分布在该纤维蛋白网内部并且/或者该纤维蛋白网可缠结在该水凝胶外层中。优先地，该纤维蛋白网缠结在该水凝胶外层中。
6、当该纤维蛋白网与该水凝胶外层缠结时，后者可形成或不形成互穿网络。当该水凝胶外层形成互穿网络时，其可以是互穿聚合物网络(ipn)。
7、当该纤维蛋白网形成独特的网络时，其不与该细胞微隔室的其他组分中的至少一种其他组分缠结。
8、有利地，该纤维蛋白网可包含其他分子，例如生长因子、蛋白质、肽、培养基的元素和/或源自细胞活性的元素(例如分泌蛋白、代谢物等)。
9、根据另一目的，该水凝胶层优先地包含藻酸盐。
10、有利地，构成该细胞层的该细胞选自真核细胞、多能细胞和分化细胞。
11、根据另一优选的目的，根据本专利技术的微隔室包括以下特征中的至少一个特征：
12、-该微隔室是封闭的，并且/或者
13、-该微隔室是三维微隔室，优先地中空三维微隔室，并且/或者
14、-该微隔室为卵形体、圆柱体、球状体、球体或泪滴的形状，并且/或者
15、-该微隔室在所述至少一个细胞层内包括一个或多个内腔。
16、当该微隔室包括内腔时，该细胞层、该纤维蛋白网和该外层围绕该内腔组织。优先地，该细胞层、该纤维蛋白网和该外层围绕该内腔连续地组织。
17、根据特别优选的目的，包括在根据本专利技术的该微隔室中的纤维蛋白是从由凝血酶进行的纤维蛋白原的聚合获得的。有利地，由凝血酶进行的纤维蛋白原的该聚合是在封装过程期间和/或封装后获得的。
18、根据另一方面，本专利技术还涉及一组微隔室，该组微隔室包括根据本专利技术的至少一个微隔室。
19、在本专利技术的背景下，该微隔室特别适用于细胞治疗方案。另外，另一方面涉及用作药物的根据本专利技术的微隔室或根据本专利技术的该组微隔室。
20、此外，根据本专利技术的微隔室或根据本专利技术的该组微隔室可通过本领域技术人员已知的任何手段获得。
21、根据特别优选的方面，根据本专利技术的微隔室可根据下述制备方法获得。因此，本专利技术优先地涉及包括一种制备方法，该制备方法包括以下步骤：
22、a)将任选地先前在培养基中孵育的细胞与纤维蛋白原的混合物混合，
23、b)将来自步骤a)的该混合物封装在水凝胶层中，
24、c)在培养基中培养步骤b)中获得的该荚膜，
25、d)任选地，培养得自步骤c)的该荚膜持续至少1天、优先地3至50天，并且任选地回收所获得的细胞微隔室，
26、其特征在于在步骤b)和/或c)期间添加凝血酶溶液。
27、优先地，该方法任选地包括在该培养步骤c)与该培养步骤d)之间冲洗得自步骤c)的该荚膜持续至少1天的步骤。
28、优先地，该封装步骤b)包括以下子步骤：
29、i.使步骤a)的该混合物与水凝胶溶液接触以形成至少一个液滴，以及
30、ii.在能够将该水凝胶溶液硬化以形成每个微隔室的该外层的钙浴中收集所述所获得的液滴，每个液滴的内部部分由步骤a)的该混合物以及任选地该凝血酶溶液组成。
31、更优先地，可在步骤i)或ii)期间添加该凝血酶溶液。当在步骤i)期间添加该凝血酶溶液时，所获得的液滴包括外层，并且每个液滴的该内部部分由步骤a)的该混合物和该凝血酶溶液组成。优先地，步骤i)的该混合物在共注射期间通过微流体或毫流体注射器进行，该微流体或毫流体注射器允许该液滴的形成并使凝血酶接触，从而导致纤维蛋白原聚合成纤维蛋白。
32、当在步骤ii)期间添加该凝血酶溶液时，该凝血酶溶液存在于该钙浴中，该钙浴能够将该水凝胶溶液硬化以形成每个微隔室的该外层。然后，该凝血酶溶液扩散通过该水凝胶外层，从而允许纤维蛋白原聚合成纤维蛋白。
33、另选地，可在培养该荚膜的步骤c)期间在形成该微隔室的之后添加该凝血酶溶液。然后，该培养基包含凝血酶溶液，该凝血酶溶液扩散通过该水凝胶层，从而允许纤维蛋白原聚合成纤维蛋白。
34、根据特别优选的目的，步骤i)由使步骤a)的该混合物、该水凝胶溶液和包含所述凝血酶溶液的中间溶液接触组成。出于本专利技术的目的，术语“中间溶液”旨在意指不含能够将该水凝胶溶液硬化的分子和/或不含钙的溶液。根据具体实施方案，该中间溶液是等渗中间溶液。因此，在该液滴形成期间添加该凝血酶溶液。本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种细胞微隔室，所述细胞微隔室包括：
2.根据前述权利要求所述的细胞微隔室，其中所述纤维蛋白网与所述水凝胶外层缠结。
3.根据前述权利要求中的一项所述的细胞微隔室，其特征在于所述外层包含藻酸盐。
4.根据前述权利要求中的一项所述的细胞微隔室，其特征在于所述细胞微隔室是封闭的。
5.根据前述权利要求中的一项所述的微隔室，其中所述微隔室是三维微隔室。
6.根据前述权利要求中的一项所述的微隔室，其特征在于所述微隔室为卵形体、圆柱体、球状体、球体或泪滴的形状。
7.根据前述权利要求中的一项所述的细胞微隔室，其特征在于构成所述细胞层的所述细胞是选自真核细胞、多能细胞和分化细胞的细胞。
8.根据前述权利要求中的一项所述的细胞微隔室，其特征在于所述微隔室包括内腔。
9.根据前述权利要求所述的细胞微隔室，其特征在于所述细胞层、所述纤维蛋白网和所述外层围绕所述内腔连续地组织。
10.根据前述权利要求中的一项所述的微隔室，其特征在于所述纤维蛋白是从在封装期间和/或封装后由凝血酶进行的纤维蛋
11.一组微隔室，其特征在于至少一个微隔室是根据前述权利要求中的一项所述的微隔室。
12.根据权利要求1至10中的一项所述的微隔室或根据权利要求11所述的一组微隔室用作药物。
13.一种用于制备根据权利要求1至10中的一项所述的细胞微隔室的方法，所述方法包括以下步骤：
14.根据前述权利要求所述的方法，其特征在于步骤(b)包括以下子步骤：
15.根据前述权利要求所述的方法，其特征在于在步骤i)或ii)期间添加所述凝血酶溶液。
16.根据权利要求13至15中的一项所述的方法，其特征在于步骤i)由使步骤a)的所述混合物、所述水凝胶溶液和包含所述凝血酶溶液的中间溶液接触组成。
17.根据权利要求13或14中的一项所述的方法，其特征在于在步骤c)期间添加所述凝血酶溶液。
18.根据权利要求13至17中的一项所述的方法，其特征在于所述纤维蛋白原的所述浓度为5mg/mL至30mg/mL、优先地10mg/mL至25mg/mL。
19.根据前述权利要求所述的方法，其特征在于所述纤维蛋白原的所述浓度为14mg/mL至20mg/mL。
20.根据权利要求13至19中的一项所述的方法，其特征在于所述凝血酶的所述浓度为0.001U/mL至2U/mL、优先地0.01U/mL至0.03U/mL。
21.根据权利要求13至20中的一项所述的方法，其特征在于步骤b)通过所述水凝胶溶液的同时共注射、来自步骤a)的所述混合物的同时共注射以及任选地所述中间溶液的同时共注射来进行；
22.根据前述权利要求所述的方法，其特征在于所述微流体注射器的最终开口直径为50μm至800μm、优先地80μm至240μm，并且所述溶液中的每种溶液的所述流速为0.1mL/h至1000mL/h、优先地10mL/h至150mL/h。
23.旨在用于制备根据权利要求1至10中的一项所述的微隔室的试剂盒的用途，所述试剂盒包含纤维蛋白原溶液和凝血酶溶液。
24.根据前述权利要求所述的用途，其特征在于所述纤维蛋白原溶液和所述凝血酶溶液是人源的，并且符合与良好生产规范(GMP)相关的规定。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种细胞微隔室，所述细胞微隔室包括：
2.根据前述权利要求所述的细胞微隔室，其中所述纤维蛋白网与所述水凝胶外层缠结。
3.根据前述权利要求中的一项所述的细胞微隔室，其特征在于所述外层包含藻酸盐。
4.根据前述权利要求中的一项所述的细胞微隔室，其特征在于所述细胞微隔室是封闭的。
5.根据前述权利要求中的一项所述的微隔室，其中所述微隔室是三维微隔室。
6.根据前述权利要求中的一项所述的微隔室，其特征在于所述微隔室为卵形体、圆柱体、球状体、球体或泪滴的形状。
7.根据前述权利要求中的一项所述的细胞微隔室，其特征在于构成所述细胞层的所述细胞是选自真核细胞、多能细胞和分化细胞的细胞。
8.根据前述权利要求中的一项所述的细胞微隔室，其特征在于所述微隔室包括内腔。
9.根据前述权利要求所述的细胞微隔室，其特征在于所述细胞层、所述纤维蛋白网和所述外层围绕所述内腔连续地组织。
10.根据前述权利要求中的一项所述的微隔室，其特征在于所述纤维蛋白是从在封装期间和/或封装后由凝血酶进行的纤维蛋白原的聚合获得的。
11.一组微隔室，其特征在于至少一个微隔室是根据前述权利要求中的一项所述的微隔室。
12.根据权利要求1至10中的一项所述的微隔室或根据权利要求11所述的一组微隔室用作药物。
13.一种用于制备根据权利要求1至10中的一项所述的细胞微隔室的方法，所述方法包括以下步骤：
14.根据前述权利要求所述的方法，其特征在于步骤(b)包括以下子步骤：
15.根据前述权利要求所述的方法，其特征在于在步骤...
【专利技术属性】
技术研发人员：克莱门特·里厄，乔佛里·米安内，埃莉斯·沃特，马克西姆·费约，
申请(专利权)人：树蛙疗法公司，
类型：发明
国别省市：
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