【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物组织工程，涉及thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡及其制备方法与用途。
技术介绍
1、骨质疏松症是一种常见的骨疾病，分为原发性(原因不明)和继发性(病因可追溯)骨质疏松症，其特征是骨组织的定量和定性破坏，导致骨密度降低，从而使骨折风险增加。全世界50岁以上的女性和男性中，分别有1/2和1/4在余生中因骨质疏松而遭遇骨折。而间充质干细胞(mesenchymal stem cells,mscs)的成骨向分化能力受损，将直接导致骨形成减弱，是骨丢失的重要原因，也是骨质疏松症的重要发病机制。因此，在骨质疏松患者体内，如何启动mscs的成骨信号通路并高效诱导其成骨向分化是骨组织工程技术的关键，也是防治骨丢失相关疾病与维持骨组织稳态的关键。
2、凋亡囊泡(apoptotic vesicles,apovs)是细胞凋亡过程中产生的异质性细胞外囊泡(extracellular vesicles,evs)亚群，直径从100nm到1000nm不等，包裹着大量dna、rna、蛋白质，甚至完整的细胞器。以往研究认为大多数正在经历凋亡的细胞以apovs的形式被吞噬细胞清除；而越来越多的证据显示，apovs介导的生物分子转移可以发生在不同类型的细胞之间，与干细胞的干性维持以及组织的再生息息相关。目前，越来越多的研究关注到apovs应用于疾病的诊断和治疗，包括：胃肠疾病的诊断，动脉粥样硬化、血友病、肝纤维化和细菌感染的治疗，骨、皮肤、毛发等组织再生工程，以及免疫治疗。当前，以apovs为核心的无细胞骨组织工程技术正在获得关注。研究表
3、已知evs的生物学特性很大程度上取决于供体细胞的特征，衰老细胞来源evs的生物学功能展现出与老化细胞类似的变化趋势。一项研究表明，来自老化骨基质的evs有利于mscs脂肪生成，并增强血管平滑肌细胞钙化，体内注射治疗可促进小鼠骨脂代谢失衡，并加剧血管钙化。作为evs的亚群，apovs的生物学特性可能也受供体细胞影响。因此，在临床前和/或临床实验中，不加区分地使用apovs可能会导致不稳定的结果，损害这一新生领域的发展。探索衰老供体来源apovs的生物学特性和功能，有利于完善对apovs如何参与个体衰老与骨代谢的理解，对apovs的工程化改造和临床转化应用至关重要。
4、thy1是一种25-37kda的糖磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,gpi)锚定的细胞表面蛋白。thy1在细胞迁移、粘附、分化、转分化、凋亡、机械转导和细胞分裂等过程中发挥重要作用，其功能已在免疫学、神经生物学、癌症、干细胞生物学、组织重塑和衰老等领域得到广泛研究。
技术实现思路
1、本专利技术的首要目的是提供一种thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡，以能够更好地促进间充质干细胞成骨向分化，从而可安全高效阻止骨质流失，从而可更好地用于骨质疏松症的治疗。
2、为实现此目的，在基础的实施方案中，本专利技术提供一种thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡，所述的thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡在间充质干细胞来源的凋亡囊泡表面包被有thy1膜糖蛋白。
3、在一种优选的实施方案中，本专利技术提供一种thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡，其中制备所述的thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡的所述的间充质干细胞来源的凋亡囊泡与所述的thy1膜糖蛋白的质量比为1:4-1:6。
4、在一种优选的实施方案中，本专利技术提供一种thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡，其中所述的thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡呈球形，具有双层脂质膜结构，粒径为100-300nm(平均粒径120-180nm)。
5、本专利技术的第二个目的是提供一种如上所述的thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡的制备方法，以能够更好地制备如上所述的thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡，制得thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡能够更好地促进间充质干细胞成骨向分化，从而可安全高效阻止骨质流失，从而可更好地用于骨质疏松症的治疗。
6、为实现此目的，在基础的实施方案中，本专利技术提供一种如上所述的thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡的制备方法，所述的制备方法包括如下步骤：
7、(1)制备所述的间充质干细胞来源的凋亡囊泡；
8、(2)将所述的间充质干细胞来源的凋亡囊泡与所述的thy1膜糖蛋白混合后孵育一定时间，以使所述的间充质干细胞来源的凋亡囊泡表面吸附一层或多层所述的thy1膜糖蛋白，分离得到所述的thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡。
9、在一种优选的实施方案中，本专利技术提供一种如上所述的thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡的制备方法，其中步骤(1)的制备过程包括如下步骤：
10、(11)从动物组织中分离骨髓间充质干细胞；
11、(12)诱导骨髓间充质干细胞凋亡；
12、(13)离心分离与洗涤得到所述的间充质干细胞来源的凋亡囊泡。
13、在一种优选的实施方案中，本专利技术提供一种如上所述的thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡的制备方法，其中步骤(12)中，以培养液重悬骨髓间充质干细胞，然后加入星形孢菌素(sts，优选浓度500nm)诱导细胞凋亡。
14、在一种优选的实施方案中，本专利技术提供一种如上所述的thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡的制备方法，其中所述的培养液选自mem培养基、dmem培养基、rpmi-1640培养基中的一种或者多种。
15、在一种优选的实施方案中，本专利技术提供一种如上所述的thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡的制备方法，其中步骤(13)包括如下步骤：
16、(131)将培养液于4℃，以700-900g离心8-15分钟，以去除培养液中的细胞碎片，获得离心上清液；
17、(132)将所述的离心上清液于4℃，以15000-18000g离心25-35分钟，取沉淀物，即得粗制的所述的间充质干细胞来源的凋亡囊泡；
18、(133)将粗制的所述的间充质干细胞来源的凋亡囊泡以无菌pbs洗涤，然后于4℃，以15000-18000g离心25-35分钟，获得所述的间充质干细胞来源的凋亡囊泡的纯品。
19、在一种优选的实施方案中，本专利技术提供一种如上所述的thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡的制备方法，其中步骤(2)中，孵育温度为35-40℃，孵育时间为1-2小时。
20、在一种优选的实施方案中，本专利技术提供一种如上所述的thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡的制备方法，其中步骤(2)中本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种Thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡，其特征在于：所述的Thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡在间充质干细胞来源的凋亡囊泡表面包被有Thy1膜糖蛋白。
2.根据权利要求1所述的Thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡，其特征在于：制备所述的Thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡的所述的间充质干细胞来源的凋亡囊泡与所述的Thy1膜糖蛋白的质量比为1:4-1:6。
3.根据权利要求1或2所述的Thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)的制备过程包括如下步骤：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤(12)中，以培养液重悬骨髓间充质干细胞，然后加入星形孢菌素诱导细胞凋亡。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(13)包括如下步骤：
7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，孵育温度为35-40℃，孵育时间为1-2小时。
8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：步
9.根据权利要求1或2所述的Thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡用于制备促进间充质干细胞成骨向分化的药剂的用途。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于：所述的Thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡进一步用于制备预防或治疗或缓解骨质疏松症的药剂。
...【技术特征摘要】
1.一种thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡，其特征在于：所述的thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡在间充质干细胞来源的凋亡囊泡表面包被有thy1膜糖蛋白。
2.根据权利要求1所述的thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡，其特征在于：制备所述的thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡的所述的间充质干细胞来源的凋亡囊泡与所述的thy1膜糖蛋白的质量比为1:4-1:6。
3.根据权利要求1或2所述的thy1包被的间充质干细胞凋亡囊泡的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)的制备过程包括如下步骤：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤(12)中，以培养液重悬骨髓间充质干细胞，然后加入...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。