【技术实现步骤摘要】
本申请涉及负调节因子(nef)蛋白(例如，非天然存在的nef蛋白)、包含嵌合信号传导结构域(cmsd)的功能性外源受体和含有此类nef蛋白的t细胞和/或含有cmsd的功能性外源受体。
技术介绍
0、技术背景
1、car-t细胞疗法利用携带特异性识别靶抗原(例如，肿瘤抗原)的工程化受体的遗传修饰的t细胞将t细胞引导至肿瘤部位。其在治疗血液癌症和多发性骨髓瘤(mm)方面显示出有希望的结果。car通常包含胞外配体结合结构域、跨膜(tm)域和胞内信号传导结构域(isd)。胞外配体结合结构域可包含靶向所需靶抗原的抗原结合片段(例如，单链可变片段，scfv)。在与靶抗原(例如，肿瘤抗原)结合时，car可以活化t细胞以以抗原依赖性方式启动isd介导的特异性抗肿瘤应答(例如，通过cd3ζisd的激活信号，模拟tcr信号传递)，而不受对靶抗原特异性的主要组织相容性复合物(mhc)的可用性的限制。
2、基于免疫受体酪氨酸的活化基序(itam)存在于许多细胞表面受体或与它们相关的亚基的胞质结构域中，并在信号传递中发挥重要的调节作用。例如，在tcr连接时，tcr复合物的itam的磷酸化会产生对接位点，以募集启动信号传导级联所必需的分子，从而导致t细胞活化和分化。itam的功能不限于t细胞，作为b细胞受体(bcr、cd79a/igα和cd79b/igβ)、选定的天然杀伤(nk)细胞受体(dap-12)和特定fcεr的组分，都需要itam来传播胞内信号。迄今为止，大多数临床研究已使用cd3ζ作为car的主要isd，但已经报道了其作为
3、由于个体差异，自体car-t或tcr-t疗法(使用患者自身的t细胞)在制造和标准化方面存在重大挑战，制造和治疗成本极其昂贵。此外，癌症患者通常免疫功能较低，淋巴细胞数量减少，免疫活性较低，体外扩增困难。通用同种异体car-t或tcr-t疗法被认为是理想的模型，其中t细胞来源于健康供体。然而，关键的挑战是如何在治疗过程中有效消除由于组织不相容性而引发的移植物抗宿主病(gvhd)。tcr是参与响应抗原呈递的t细胞活化的细胞表面受体。人中95％的t细胞具有由α(α)链和β(β)链组成的tcr。tcrα和tcrβ链组合形成异二聚体并与cd3亚基缔合形成存在于细胞表面上的tcr复合物。当供体的t细胞通过tcr识别非自身mhc分子并将宿主(移植受者)组织视为具有抗原性的外来组织并攻击它们时，就会发生gvhd。为了消除供体t细胞的内源性tcr从而防止gvhd，人们一直在使用基因编辑技术，诸如锌指核酸酶(zfn)、转录激活因子样效应子核酸酶(talen)和成簇规律间隔的短回文重复序列(crispr)-crispr相关(cas)(crispr/cas)进行内源性tcrα或tcrβ基因敲除(ko)，然后富集tcr阴性t细胞用于同种异体car-t或tcr-t生产。然而，tcr缺失可导致cd3下游信号转导途径受损，影响t细胞扩增。
4、本文所参考的所有出版物、专利、专利申请和公布的专利申请的公开内容据此通过引用以其整体并入本文。
技术实现思路
1、本专利技术一方面提供了经修饰的t细胞(例如，同种异体t细胞)，其包含：i)外源性nef蛋白；和ii)功能性外源受体，其包含：(a)胞外配体结合结构域，(b)跨膜结构域(例如，源自cd8α)，和(c)包含嵌合信号传导结构域(cmsd)的胞内信号传导结构域(isd)，其中cmsd包含一个或多个itam(“cmsd itam”)，其中多个cmsd itam任选地由一个或多个接头(“cmsd接头”)连接。在一些实施方案中，cmsd包括选自由以下组成的组的特征中的一种或多种特征：(a)多个(例如，2个、3个、4个或更多个)cmsd itam彼此直接连接；(b)cmsd包含两个或更多个(例如，2个、3个、4个或更多个)cmsd itam，它们通过一个或多个不是源自含itam母体分子的接头(例如，g/s接头)连接；(c)cmsd包含一个或多个源自含itam母体分子的cmsd接头，所述含itam母体分子不同于cmsd itam中的一个或多个所源自的含itam母体分子；(d)cmsd包括两个或更多(例如，2个、3个、4个或更多个)相同的cmsd itam；(e)cmsd itam中的至少一个不源自cd3ζ；(f)cmsd itam中的至少一个不是cd3ζ的itam1或itam2；(g)多个cmsditam各自源自不同的含itam母体分子；和/或(h)cmsd itam中的至少一种源自含itam母体分子，所述含itam母体分子选自由以下组成的组：cd3ε、cd3δ、cd3γ、igα(cd79a)、igβ(cd79b)、fcεriβ、fcεriγ、dap12、cnaip/nfam1、stam-1、stam-2和膜突蛋白。在一些实施方案中，cmsd基本上由一个cmsd itam组成(例如，由其组成)。在一些实施方案中，cmsd基本上由(例如，由)一个cmsd itam和与含itam母体分子异源的cmsd n端序列和/或cmsd c端序列(例如，g/s接头)组成。在一些实施方案中，多个(例如，2个、3个、4个或更多个)cmsd itam彼此直接连接。在一些实施方案中，cmsd包含通过一个或多个不源自含itam母体分子的接头(例如，g/s接头)连接的两个或更多个(例如，2个、3个、4个或更多个)cmsd itam。在一些实施方案中，cmsd包含一个或多个源自含itam母体分子的cmsd接头，所述含itam母体分子不同于cmsd itam中的一个或多个所源自的含itam母体分子。在一些实施方案中，cmsd包含两个或更多个(例如，2个、3个、4个或更多个)相同的cmsd itam。在一些实施方案中，cmsditam中的至少一个不源自cd3ζ。在一些实施方案中，cmsd itam中的至少一个不是cd3ζ的itam1或itam2。在一些实施方案中，多个cmsd itam各自源自不同的含itam母体分子。在一些实施方案中，cmsd itam中的至少一种源自含itam母体分子，所述含itam母体分子选自由以下组成的组：cd3ε、cd3δ、cd3γ、igα(cd79a)、igβ(cd79b)、fcεriβ、fcεriγ、dap12、cnaip/nfam1、stam-1、stam-2和膜突蛋白。
2、在根据上述经修饰的t细胞的任一种的一些实施方案中，所述多种cmsd itam中的至少一种源自含itam母体分子，所述含itam母体分子选自由以下组成的组：cd3ε、cd3δ、cd3γ、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种经修饰的T细胞，其包含：
2.如权利要求1所的经修饰的T细胞，其中：
3.如权利要求1所述的经修饰的T细胞，其中所述CMSD ITAM中的至少一个源自含ITAM母体分子，所述含ITAM母体分子选自由以下组成的组：CD3ε、CD3δ、CD3γ、CD3ζ、Igα(CD79a)、Igβ(CD79b)、FcεRIβ、FcεRIγ、DAP12、CNAIP/NFAM1、STAM-1、STAM-2和膜突蛋白。
4.如权利要求1-3中任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述CMSD不包含CD3ζ的ITAM1和/或ITAM2。
5.如权利要求1-4中任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述CMSD包含CD3ζ的ITAM3。
6.如权利要求1-5中任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述CMSD ITAM中的至少两个源自相同的含ITAM母体分子。
7.如权利要求6所述的经修饰的T细胞，其中所述CMSD ITAM中的至少两个彼此相同。
8.如权利要求1-6中任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述CMSD ITAM中的至少两个
9.如权利要求8所述的经修饰的T细胞，其中所述两种不同的CMSD ITAM各自源自不同的含ITAM母体分子。
10.如权利要求1-9中任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述CMSD接头中的至少一个源自CD3ζ。
11.如权利要求1-10中任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述CMSD接头中的至少一个与含ITAM母体分子是异源的。
12.如权利要求1-11中任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述CMSD还包含位于最C端CMSD ITAM的C端的C端序列(“CMSD C端序列”)。
13.如权利要求1-12中任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述CMSD还包含位于最N端CMSD ITAM的N端的N端序列(“CMSD N端序列”)。
14.如权利要求1-13中任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述一个或多个CMSD接头、所述CMSD C端序列和/或所述CMSD N端序列独立地选自SEQ ID NO:12-26、103-107和119-126组成的组。
15.如权利要求1至14中任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述功能性外源受体是ITAM修饰的T细胞受体(TCR)、ITAM修饰的嵌合抗原受体(CAR)、ITAM修饰的嵌合TCR(cTCR)或ITAM修饰的T细胞抗原偶联剂(TAC)样嵌合受体。
16.如权利要求15所述的经修饰的T细胞，其中所述功能性外源受体是ITAM修饰的CAR。
17.如权利要求16所述的经修饰的T细胞，其中所述跨膜结构域源自CD8α。
18.如权利要求16或17所述的经修饰的T细胞，其中所述ISD还包含共刺激信号传导结构域。
19.如权利要求18所述的经修饰的T细胞，其中所述共刺激信号传导结构域源自CD137(4-1BB)或CD28。
20.如权利要求18或19所述的经修饰的T细胞，其中所述共刺激信号传导结构域包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列。
21.如权利要求18-20中任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述共刺激结构域在所述CMSD的N端。
22.如权利要求18-20中任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述共刺激结构域在所述CMSD的C端。
23.如权利要求15的经修饰的T细胞，其中所述功能性外源受体是ITAM修饰的cTCR。
24.如权利要求23所述的经修饰的T细胞，其中所述ITAM修饰的cTCR包含：
25.如权利要求24所述的经修饰的T细胞，其中所述第一和第二TCR亚基均为CD3ε。
26.如权利要求24或25所述的经修饰的T细胞，其中所述一种或多种CMSD ITAM源自CD3ε、CD3δ和CD3γ中的一种或多种。
27.如权利要求15所述的经修饰的T细胞，其中所述功能性外源受体是ITAM修饰的TAC样嵌合受体。
28.如权利要求27所述的经修饰的T细胞，其中所述ITAM修饰的TAC样嵌合受体包含：
29.如权利要求28所述的经修饰的T细胞，其中所述第二和第三TCR亚基均为CD3ε。
30.如权利要求28或29所述的经修饰的T细胞，其中所述一个或多个CMSD ITAM源自CD3ε、CD3δ和CD3γ中的一种或多种。
31.如权利要求1-30中任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述胞外配体结合结构域包含一个或多个特异性识别一种或多种靶抗原的一种或多种表...
【技术特征摘要】
1.一种经修饰的t细胞，其包含：
2.如权利要求1所的经修饰的t细胞，其中：
3.如权利要求1所述的经修饰的t细胞，其中所述cmsd itam中的至少一个源自含itam母体分子，所述含itam母体分子选自由以下组成的组：cd3ε、cd3δ、cd3γ、cd3ζ、igα(cd79a)、igβ(cd79b)、fcεriβ、fcεriγ、dap12、cnaip/nfam1、stam-1、stam-2和膜突蛋白。
4.如权利要求1-3中任一项所述的经修饰的t细胞，其中所述cmsd不包含cd3ζ的itam1和/或itam2。
5.如权利要求1-4中任一项所述的经修饰的t细胞，其中所述cmsd包含cd3ζ的itam3。
6.如权利要求1-5中任一项所述的经修饰的t细胞，其中所述cmsd itam中的至少两个源自相同的含itam母体分子。
7.如权利要求6所述的经修饰的t细胞，其中所述cmsd itam中的至少两个彼此相同。
8.如权利要求1-6中任一项所述的经修饰的t细胞，其中所述cmsd itam中的至少两个彼此不同。
9.如权利要求8所述的经修饰的t细胞，其中所述两种不同的cmsd itam各自源自不同的含itam母体分子。
10.如权利要求1-9中任一项所述的经修饰的t细胞，其中所述cmsd接头中的至少一个源自cd3ζ。
11.如权利要求1-10中任一项所述的经修饰的t细胞，其中所述cmsd接头中的至少一个与含itam母体分子是异源的。
12.如权利要求1-11中任一项所述的经修饰的t细胞，其中所述cmsd还包含位于最c端cmsd itam的c端的c端序列(“cmsd c端序列”)。
13.如权利要求1-12中任一项所述的经修饰的t细胞，其中所述cmsd还包含位于最n端cmsd itam的n端的n端序列(“cmsd n端序列”)。
14.如权利要求1-13中任一项所述的经修饰的t细胞，其中所述一个或多个cmsd接头、所述cmsd c端序列和/或所述cmsd n端序列独立地选自seq id no:12-26、103-107和119-126组成的组。
15.如权利要求1至14中任一项所述的经修饰的t细胞，其中所述功能性外源受体是itam修饰的t细胞受体(tcr)、itam修饰的嵌合抗原受体(car)、itam修饰的嵌合tcr(ctcr)或itam修饰的t细胞抗原偶联剂(tac)样嵌合受体。
16.如权利要求15所述的经修饰的t细胞，其中所述功能性外源受体是itam修饰的car。
17.如权利要求16所述的经修饰的t细胞，其中所述跨膜结构域源自cd8α。
18.如权利要求16或17所述的经修饰的t细胞，其中所述isd还包含共刺激信号传导结构域。
19.如权利要求18所述的经修饰的t细胞，其中所述共刺激信号传导结构域源自cd137(4-1bb)或cd28。
20.如权利要求18或19所述的经修饰的t细胞，其中所述共刺激信号传导结构域包含seq id no:36的氨基酸序列。
21.如权利要求18-20中任一项所述的经修饰的t细胞，其中所述共刺激结构域在所述cmsd的n端。
22.如权利要求18-20中任一项所述的经修饰的t细胞，其中所述共刺激结构域在所述cmsd的c端。
23.如权利要求15的经修饰的t细胞，其中所述功能性外源受体是itam修饰的ctcr。
24.如权利要求23所述的经修饰的t细胞，其中所述itam修饰的ctcr包含：
25.如权利要求24所述的经修饰的t细胞，其中所述第一和第二tcr亚基均为cd3ε。
26.如权利要求24或25所述的经修饰的t细胞，其中所述一种或多种cmsd itam源自cd3ε、cd3δ和cd3γ中的一种或多种。
27.如权利要求15所述的经修饰的t细胞，其中所述功能性外源受体是itam修饰的tac样嵌合受体。
28.如权利要求27所述的经修饰的t细胞，其中所述itam修饰的tac样嵌合受体包含：
29.如权利要求28所述的经修饰的t细胞，其中所述第二和第三tcr亚基均为cd3ε。
30.如权利要求28或29所述的经修饰的t细胞，其中所述一个或多个cmsd itam源自cd3ε、cd3δ和cd3γ中的一种或多种。
31.如权利要求1-30中任一项所述的经修饰的t细胞，其中所述胞外配体结合结构域包含一个或多个特异性识别一种或多种靶抗原的一种或多种表位的抗原结合片段。
32.如权利要求31所述的经修饰的t细胞，其中所述抗原结合片段是sdab或scfv。
33.如权利要求31或32所述的经修饰的t细胞，其中所述靶抗原是bcma、cd19或cd20...
【专利技术属性】
技术研发人员：范晓虎，赵云程，王冰，俞大伟，黄鑫，王平艳，庄秋传，
申请(专利权)人：南京传奇生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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