【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医学生物，具体为一种抑制微卫星稳定型结直肠癌作用的肿瘤新抗原多肽。
技术介绍
1、在临床医学中，肿瘤被划分为实体瘤与非实体瘤两大类。实体瘤是那些可以通过x线、ct扫描、b超检查或物理触诊等方式检测到的有形肿块，如某些类型的癌症。相对地，非实体瘤，如白血病这类血液疾病，则无法通过上述方法直接观察到。实体瘤往往伴随着免疫逃避、治疗后复发及转移等问题，进而提高了患者的癌症风险和治疗后死亡率。当前，手术、放疗及化疗等传统治疗手段仅对部分癌症有效。免疫疗法，作为一种先进的癌症治疗方法，通过激活人体免疫系统来识别和消灭癌细胞，具体手段包括检查点抑制剂、细胞免疫疗法、溶瘤病毒和癌症疫苗等。
2、结直肠癌给患者及其家庭造成沉重的精神和经济负担，而目前以手术治疗，放射治疗和化学治疗为主的传统治疗手段存在着毒副作用强，对患者伤害大，治疗效果（尤其对晚期患者）不理想等诸多弊端。
3、本专利技术的目标是鉴定一组针对微卫星稳定型结直肠癌的新抗原肽序列，利用这些序列制备的肿瘤疫苗，在人源化的pdx（患者来源的肿瘤异种移植）结直肠癌动物模型中，展现出显著的肿瘤生长抑制作用。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种抑制微卫星稳定型结直肠癌作用的肿瘤新抗原多肽，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
2、为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种抑制微卫星稳定型结直肠癌作用的肿瘤新抗原多肽，该肿瘤新抗原多肽为：znf169-a275s和cdh4-v456m
3、所述znf169-a275s 相关的突变肽序列：
4、cgrrfsqks
5、cgrrfsqkss
6、cgrrfsqkssl
7、ecgrrfsqks
8、ecgrrfsqkss
9、fsqkssls
10、fsqksslsi
11、fsqksslsih
12、fsqksslsihq
13、grrfsqks
14、grrfsqkss
15、grrfsqkssl
16、grrfsqkssls
17、ksslsihq
18、ksslsihqr
19、ksslsihqrk
20、ksslsihqrkh
21、pecgrrfsqks
22、qksslsih
23、qksslsihq
24、qksslsihqr
25、qksslsihqrk
26、rfsqkssl
27、rfsqkssls
28、rfsqksslsi
29、rfsqksslsih
30、rrfsqkss
31、rrfsqkssl
32、rrfsqkssls
33、rrfsqksslsi
34、sqksslsi
35、sqksslsih
36、sqksslsihq
37、sqksslsihqr
38、sslsihqr
39、sslsihqrk
40、sslsihqrkh
41、sslsihqrkhs；
42、所述cdh4-v456m 相关的突变肽序列：
43、dpvtnegmvtm
44、egmvtmvk
45、egmvtmvka
46、egmvtmvkav
47、egmvtmvkavd
48、gmvtmvka
49、gmvtmvkav
50、gmvtmvkavd
51、gmvtmvkavdy
52、mvkavdye
53、mvkavdyel
54、mvkavdyeln
55、mvkavdyelnr
56、mvtmvkav
57、mvtmvkavd
58、mvtmvkavdy
59、mvtmvkavdye
60、negmvtmv
61、negmvtmvk
62、negmvtmvka
63、negmvtmvkav
64、pvtnegmvtm
65、pvtnegmvtmv
66、tmvkavdy
67、tmvkavdyel
68、tmvkavdyeln
69、tnegmvtm
70、tnegmvtmv
71、tnegmvtmvk
72、tnegmvtmvka
73、vtmvkavd
74、vtmvkavdy
75、vtmvkavdye
76、vtmvkavdyel
77、vtnegmvtm
78、vtnegmvtmv
79、vtnegmvtmvk。
80、优选地，基于以上肿瘤新抗原多肽的实验分为四部分，分别为:酶联免疫斑点elispot实验、t细胞受体tcr测序实验和新抗原特异性tcr克隆分析实验与小鼠肿瘤移植和新抗原疫苗接种实验。
81、优选地，所述酶联免疫斑点elispot实验具体步骤为：
82、a1，树突状细胞dcs培养：按照既定的方法进行树突状细胞的培养。
83、a2，t细胞分离与刺激：
84、a21，从外周血单核细胞pbmcs中分离出t细胞；
85、a22，在24孔细胞培养板上，将t细胞与自体的、加载了单个新抗原肽（10μg/ml）和il-7（10ng/ml；peprotech）的树突状细胞dcs共刺激；
86、a23，第三天时，加入il-2（5μg/ml,peprotech）；
87、a24，每三天更换一半的培养基，并添加相应的细胞因子；
88、a3，elispot实验：
89、a31，十天后，使用人ifn-γelispot试剂盒mabtech进行elispot实验，测试预刺激的t细胞对新抗原的反应；
90、a32，洗涤elispot板五次，用pbs；
91、a33，将预刺激的t细胞和加载了新抗原肽的dcs加入到板的单独孔中，在含有5%co2的环境中于37°c孵育18-24小时；
92、a34，再次用pbs洗涤板五次；
93、a35，在37°c下用100μl/孔的抗人ifn-γ(7-b6-alp)孵育2小时；
94、a36，再次用pbs洗涤板五次；
95、a37，在室温下与bcip/nbt-plus底物孵育；
96、a38，使用elispotctl阅读器ce本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抑制微卫星稳定型结直肠癌作用的肿瘤新抗原多肽，其特征在于：该肿瘤新抗原多肽为：ZNF169-A275S和CDH4-V456M；
2.根据权利要求1所述的一种抑制微卫星稳定型结直肠癌作用的肿瘤新抗原多肽，其特征在于：基于以上肿瘤新抗原多肽的实验分为四部分，分别为:酶联免疫斑点ELISpot实验、T细胞受体TCR测序实验、新抗原特异性TCR克隆分析实验与小鼠肿瘤移植和新抗原疫苗接种实验。
3.根据权利要求2所述的一种抑制微卫星稳定型结直肠癌作用的肿瘤新抗原多肽，其特征在于：所述酶联免疫斑点ELISpot实验具体步骤为：
4.根据权利要求2所述的一种抑制微卫星稳定型结直肠癌作用的肿瘤新抗原多肽，其特征在于：所述T细胞受体TCR测序实验步骤为：
5.根据权利要求3所述的一种抑制微卫星稳定型结直肠癌作用的肿瘤新抗原多肽，其特征在于：所述新抗原特异性TCR克隆分析实验步骤包括对TCR-β链中的CDR3进行克隆多样性、平均克隆频率、TCR收敛性分析。
6.根据权利要求1所述的一种抑制微卫星稳定型结直肠癌作用的肿瘤新抗原多肽，其
7.根据权利要求3所述的一种抑制微卫星稳定型结直肠癌作用的肿瘤新抗原多肽，其特征在于：所述树突状细胞使用来自患者体内的，刺激PBMCs在体外产生NRTs。
8.根据权利要求6所述的一种抑制微卫星稳定型结直肠癌作用的肿瘤新抗原多肽，其特征在于：所述小鼠肿瘤移植和新抗原疫苗接种实验采用在体外被证实具有高度免疫原性的突变多肽ZNF169-A275S和CDH4-V456M来免疫人源化的小鼠。
...【技术特征摘要】
1.一种抑制微卫星稳定型结直肠癌作用的肿瘤新抗原多肽，其特征在于：该肿瘤新抗原多肽为：znf169-a275s和cdh4-v456m；
2.根据权利要求1所述的一种抑制微卫星稳定型结直肠癌作用的肿瘤新抗原多肽，其特征在于：基于以上肿瘤新抗原多肽的实验分为四部分，分别为:酶联免疫斑点elispot实验、t细胞受体tcr测序实验、新抗原特异性tcr克隆分析实验与小鼠肿瘤移植和新抗原疫苗接种实验。
3.根据权利要求2所述的一种抑制微卫星稳定型结直肠癌作用的肿瘤新抗原多肽，其特征在于：所述酶联免疫斑点elispot实验具体步骤为：
4.根据权利要求2所述的一种抑制微卫星稳定型结直肠癌作用的肿瘤新抗原多肽，其特征在于：所述t细胞受体tcr测序实验步骤为：
5.根据权利要求3所述的一种抑...
【专利技术属性】
技术研发人员：阴新强，敬媛媛，李大江，张舒婷，
申请(专利权)人：川北医学院，
类型：发明
国别省市：
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