【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种c-met蛋白的核酸适体及其应用。
技术介绍
1、细胞间充质-上皮转化因子(c-met)是一种多功能跨膜酪氨酸激酶，属于受体酪氨酸激酶(rtks)家族，是目前已知唯一的肝细胞生长因子(hgf)的受体，因此又称肝细胞生长因子受体(hgfr)。c-met蛋白与配体肝细胞生长因子(hgf)结合后，会激活多条重要的信号通路，这些信号通路的激活进一步调节细胞的生长、运动和增殖等，在胚胎发育、组织修复、伤口愈合和器官动态平衡等过程中起到至关重要的作用。c-met蛋白的异常表达会导致信号转导异常活跃，促进肿瘤生长、血管生成和癌症转移等。在肝癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌和胃癌等诸多类型的恶性肿瘤中都检测到了该蛋白的异常表达。因此，需要研发对c-met蛋白的识别和干预技术。
2、dna由四种标准脱氧核苷构成，每种脱氧核苷都拥有一个独特的碱基，分别是腺嘌呤(adenine，a)、胸腺嘧啶(thymine，t)、胞嘧啶(cytosine，c)、鸟嘌呤(guanine，g)，这四种标准碱基构成了生命的遗传密码表。除了四种标准碱基，在病毒、原核生物及真核生物的基因组中，还广泛存在着多种天然的碱基修饰，这些修饰对于生物体的遗传信息稳定、基因表达调控以及适应环境变化等方面都具有重要作用。比如2,6-二氨基嘌呤(z)可以取代传统dna中的a碱基，和正常的dna相比，z完全取代a的dna具有更高的解链温度、更强的弯曲刚度、更长的持久长度、更短的静态轮廓长度等。
3、核酸适体(aptam
4、虽然现有技术中已经开发了一些靶向c-met蛋白的核酸适体，如公开号为cn117165593a的中国专利文献公开了识别并结合c-met蛋白的核酸适体及其应用，公开号为cn116121255a的中国专利文献公开了一种结合hgfr蛋白的核酸适配体及其应用，公开号为cn117778399a的中国专利文献公开了一种靶向c-met的双特异性核酸适体的构建及应用，但是上述专利技术中的方法均为常规细胞筛选方法，操作复杂，耗时久。为了探索和发现更多c-met蛋白相关药物，有必要开发新型的特异性靶向c-met蛋白的核酸适体。
技术实现思路
1、针对上述现有技术中存在的不足之处，本专利技术提供了一种c-met蛋白的核酸适体，其与c-met蛋白具有较强的亲和力，先将碱基替换后直接进行蛋白筛选得到，分子量较小，易于合成与修饰。
2、具体采用的技术方案如下：
3、一种c-met蛋白的核酸适体，所述的核酸适体具有mettym-4或mettym-5所示的核苷酸序列；
4、mettym-4(seq id no.1)：
5、tatgtgcgtctgcctcttgcccccagtgctcggtagacatgtag gatgcatactgggtgcataggagtcacgacgaccag；
6、mettym-5(seq id no.2)：
7、tatgtgcgtctgcctcttgccctctcgttgggcagctgtaccag cgctgtgaggcatgagtataggagtcacgacgaccag；
8、加下划线的核苷酸指示所述的核苷酸进行了2-氨基修饰。
9、进行了2-氨基修饰的a可记为z，其对应的核苷(2,6-二氨基嘌呤)，结构式如下所示：
10、
11、可选的，所述的核酸适体为单链mettym-4或mettym-5核酸适体，或者通过单链mettym-4或mettym-5核酸适体环化处理后得到的环单链mettym-4或mettym-5核酸适体。
12、本专利技术基于体外筛选技术selex技术，设计并合成了一个随机文库和相应的引物，且将碱基替换后直接进行蛋白筛选，用来筛选分子量小、化学性质稳定、能够高亲和力结合c-met蛋白的核酸适体。
13、可选的，所述的核酸适体的核苷酸序列包含标记物。
14、进一步的，所述的标记物为同位素标记物、生物素标记物、化学发光标记物、荧光标记物或者酶标记物。
15、本专利技术还提供了所述的核酸适体在制备捕获和纯化c-met蛋白的产品中的应用。
16、本专利技术还提供了所述的核酸适体在制备体外检测c-met蛋白的产品中的应用。
17、本专利技术还提供了所述的核酸适体在制备靶向c-met蛋白的药物中的应用。
18、本专利技术还提供了一种检测或纯化c-met蛋白的产品，该产品包含所述的核酸适体。
19、进一步的，所述的产品包括但不限于试剂盒、生物传感器、检测芯片。
20、本专利技术还提供了一种靶向c-met蛋白的药物，该药物包含所述的核酸适体。
21、本专利技术还提供了一种c-met蛋白的核酸适体的筛选方法，包括以下步骤：
22、(1)合成随机单链dna文库和引物；
23、(2)磁珠法筛选：进行至少2轮的反筛与筛选，并在第二轮的pcr扩增体系中将pcrmix中的atcg替换为ztcg(z为2-氨基修饰的a)。
24、与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
25、(1)本专利技术通过体外筛选技术获得了特异性靶向c-met蛋白的核酸适体，该核酸适体与c-met蛋白亲和力高，结合解离常数小于50nm；且该核酸适体具备分子量较小、性质稳定、重现性好、合成成本低的优势，有助于探索和发现更多c-met蛋白相关药物。
26、(2)本专利技术在筛选特异性靶向c-met蛋白的核酸适体过程中，将碱基替换后直接进行蛋白筛选，减少了筛选的轮次，操作简便，耗时少。
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1.一种c-MET蛋白的核酸适体，其特征在于，所述的核酸适体具有METtym-4或METtym-5所示的核苷酸序列；
2.根据权利要求1所述的核酸适体，其特征在于，所述的核酸适体的核苷酸序列包含标记物。
3.根据权利要求2所述的核酸适体，其特征在于，所述的标记物为同位素标记物、生物素标记物、化学发光标记物、荧光标记物或者酶标记物。
4.根据权利要求1-3任一所述的核酸适体在制备捕获和纯化c-MET蛋白的产品中的应用。
5.根据权利要求1-3任一所述的核酸适体在制备体外检测c-MET蛋白的产品中的应用。
6.根据权利要求1-3任一所述的核酸适体在制备靶向c-MET蛋白的药物中的应用。
7.一种检测或纯化c-MET蛋白的产品，其特征在于，包含权利要求1-3任一所述的核酸适体。
8.根据权利要求7所述的产品，其特征在于，所述的产品包括试剂盒、生物传感器或检测芯片。
9.一种靶向c-MET蛋白的药物，其特征在于，包含权利要求1-3任一所述的核酸适体。
【技术特征摘要】
1.一种c-met蛋白的核酸适体，其特征在于，所述的核酸适体具有mettym-4或mettym-5所示的核苷酸序列；
2.根据权利要求1所述的核酸适体，其特征在于，所述的核酸适体的核苷酸序列包含标记物。
3.根据权利要求2所述的核酸适体，其特征在于，所述的标记物为同位素标记物、生物素标记物、化学发光标记物、荧光标记物或者酶标记物。
4.根据权利要求1-3任一所述的核酸适体在制备捕获和纯化c-met蛋白的产品中的应用。
5.根...
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