【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化合物制备，具体而言，涉及一种高纯度d-虫荧光素类物质及其制备方法和应用。
技术介绍
1、d-虫荧光素是萤火虫荧光素酶底物。在镁离子存在下荧光素酶使荧光素与atp反应，被氧化形成二氧杂环丁烷结构并发出黄绿色的光。目前，常规的d-虫荧光素合成方法，原料成本低，但是由于合成条件较苛刻，容易导致副产物(构型相反的虫荧光素)的生成，加上后续处理步骤复杂，导致最终的虫荧光素，游离酸纯度不高，继而降低了整体产品的附加值。
2、鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种高纯度d-虫荧光素类物质及其制备方法和应用，以解决上述技术问题。
2、本专利技术是这样实现的：
3、第一方面，本专利技术的实施例提供了一种高纯度d-虫荧光素类物质的制备方法，其包括如下步骤：将质量比为1：(0.5-1.5)的2-氰基-6-羟基苯并噻唑和d-半胱氨酸盐酸盐在有机溶剂水溶液中进行反应，在体系颜色为淡黄色时加入碳酸盐，反应时间为5h-18h，制得d-虫荧光素游离酸；反应全程在避光环境中进行。
4、第二方面，本专利技术的实施例提供了一种如前述的制备方法制得的高纯度d-虫荧光素游离酸，高纯度d-虫荧光素游离酸的纯度>99.3％。
5、第三方面，本专利技术的实施例提供了一种虫荧光素金属盐，其由如前述的制备方法制得的高纯度d-虫荧光素游离酸与碱金属化合物在水溶液中反应制得；其中，碱金属化合物选自氢氧化钠和氢氧化钾中的任
6、第四方面，本专利技术的实施例提供了一种如前述的制备方法制得的高纯度d-虫荧光素游离酸的应用，其包括如下至少一种的应用方式：
7、(1)活细胞、组织或生物体内luc标记基因；
8、(2)荧光素酶-融合基因体内或体外表达的成像分析；
9、(3)报告基因分析；
10、(4)免疫分析；
11、(5)atp荧光监测分析。
12、本专利技术具有以下有益效果：
13、本专利技术实施例提供的高纯度d-虫荧光素类物质的制备方法，工序少，操作简单，便于实现工业化；该方法规避了通过传统纯化手段如柱层析，避免产生溶剂填料等物料浪费问题，从而极大地降低了废液废渣的产生量，有利于环保治理，降低工艺成本。
14、高纯度d-虫荧光素类物质是通过构建类噻唑环形成二共轭噻唑环体系的合成方法，后应用打浆纯化除去产品中杂质，进而得到高纯度d-虫荧光素游离酸。通过与不同的金属离子碱进行成盐，实现d-虫荧光素系列盐类的合成。制得的d-虫荧光素类物质在生物学研究、医学研究、环境监控以及食品安全检测方面都有广泛应用。
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1.一种高纯度D-虫荧光素类物质的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：将质量比为1：(0.5-1.5)的2-氰基-6-羟基苯并噻唑和D-半胱氨酸盐酸盐在有机溶剂水溶液中进行反应，在体系颜色为淡黄色时加入碳酸盐，反应时间为5h-18h，制得D-虫荧光素游离酸；反应全程在避光环境中进行。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂水溶液包括体积比为(1-3)：(2-1)的水和有机溶剂，其中，有机溶剂选自甲醇、乙醇、二氯甲烷和乙腈中的至少一种；
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂水溶液包括体积比为(1-3)：1的水和甲醇；
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述碳酸盐选自碳酸钾和碳酸钠中的任意一种；优选为碳酸钾；
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括在反应结束后，在避光环境且温度为2℃-10℃的条件下，调节溶液体系的pH值为2.8-3.2后，进行析晶处理。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述析晶处理后还包括对晶体进行打浆纯化；p>
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，打浆纯化至晶体纯度>99％时停止，制得高纯度D-虫荧光素游离酸。
8.一种如权利要求1-7任一项所述的制备方法制得的高纯度D-虫荧光素游离酸，其特征在于，所述高纯度D-虫荧光素游离酸的纯度>99.3％。
9.一种虫荧光素金属盐，其特征在于，所述虫荧光素金属盐由如权利要求1-7任一项所述的制备方法制得的高纯度D-虫荧光素游离酸与碱金属化合物在水溶液中反应制得；
10.一种如权利要求1-7任一项所述的制备方法制得的高纯度D-虫荧光素游离酸的应用，其特征在于，其包括如下至少一种的应用方式：
...【技术特征摘要】
1.一种高纯度d-虫荧光素类物质的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：将质量比为1：(0.5-1.5)的2-氰基-6-羟基苯并噻唑和d-半胱氨酸盐酸盐在有机溶剂水溶液中进行反应，在体系颜色为淡黄色时加入碳酸盐，反应时间为5h-18h，制得d-虫荧光素游离酸；反应全程在避光环境中进行。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂水溶液包括体积比为(1-3)：(2-1)的水和有机溶剂，其中，有机溶剂选自甲醇、乙醇、二氯甲烷和乙腈中的至少一种；
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂水溶液包括体积比为(1-3)：1的水和甲醇；
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述碳酸盐选自碳酸钾和碳酸钠中的任意一种；优选为碳酸钾；
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括在反应结束后...
【专利技术属性】
技术研发人员：李梦然，
申请(专利权)人：生工生物工程上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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